WB电泳浓缩胶没压成一条线
第一、样本本身含有高盐。第二、积层胶长度不足,一般样品1-2cm足矣。但是如果样本含有高盐可以考虑将积层胶加长到4cm左右。第三、缓冲液需要更换。使用多次的Buffer缓冲能力会大打折扣,如果样品珍贵难得推荐用新鲜配制电泳缓冲液,反之用3次就丢弃吧!第四、上样量有关。dxylark已经叙述。第五、电压不要太高,一般60-80V跑完积层胶后再将电压提高。如果感觉不放心就低压4度电泳,效果还可以。第六、确保分离胶底部的气泡排光,如果有气泡将会影响电泳。......阅读全文
WB电泳浓缩胶没压成一条线
第一、样本本身含有高盐。第二、积层胶长度不足,一般样品1-2cm足矣。但是如果样本含有高盐可以考虑将积层胶加长到4cm左右。第三、缓冲液需要更换。使用多次的Buffer缓冲能力会大打折扣,如果样品珍贵难得推荐用新鲜配制电泳缓冲液,反之用3次就丢弃吧!第四、上样量有关。dxylark已经叙述。第五、电
western-blot-跑胶时无法压成一条线
先看一下你的Mark 的条带是不是正常的,那就应该是你的制样有问题的,样品的盐浓度是不是太高了,样品是不是没有煮到位,如果mark都不正常,那就要考虑你的体系有没有问题,电极缓冲液的pH要一次到位,不能要HCl什么的调,否则条带扩散,SDS的量是不是对的,丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺有没有过期(胶凝了也跑
wb电泳为什么不在一条线上
wb电泳不在一条线上的原因:1、样本本身含有高盐。2、积层胶长度不足,一般样品1-2cm足矣。但是如果样本含有高盐可以考虑将积层胶加长到4cm左右。3、缓冲液需要更换。使用多次的Buffer缓冲能力会大打折扣,如果样品珍贵难得推荐用新鲜配制电泳缓冲液,反之用3次就丢弃。4、上样量有关。5、电压不要太
电泳浓缩胶浓度怎么选取
1,看目的蛋白的大小 一般actin以下的可以跑12胶 红线左右可以用12或10跑 几百的很大的用6的胶 小蛋白12的10的一般都能跑 如果不考虑效率的话...能跑多慢跑多慢,越慢跑的越好看 2,看样品浓度多少,以及你想用几次 通常我们是定到4微每微,总量10...5919
聚丙烯酰氨凝胶电泳凝胶拖尾的原因分析和处理办法
出现拖尾现象的原因主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。此外可能是灌胶时分离胶过多导致浓缩胶很少,不能起到浓缩作用,没有把样品压成一条线。处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度;灌胶时分离胶不要过多。
聚丙烯酰氨凝胶电泳凝胶异常的原因分析和处理办法
出现拖尾现象的原因主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。此外可能是灌胶时分离胶过多导致浓缩胶很少,不能起到浓缩作用,没有把样品压成一条线。处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度;灌胶时分离胶不要过多。出现纹理现象的原因主要是样
浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗?
这主要出现在初学者中,一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;后者是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的。
电泳条带为什么有宽有窄
条带过宽或者不清晰是因为DNA被降解了或者是凝胶没做好。sds-page电泳泳道一般不会很宽的,因为用来形成泳道的梳子都是固定大小的,只有电泳时条带可能会变的很宽这个是因为上样体积比较大的时候,比如上满整个泳道的时候,因为浓缩胶体积小,未能将样品完全压成一条线,在分离胶的时候条带就容易扩散。
电泳条带为什么有宽有窄,有浓有淡
条带过宽或者不清晰是因为DNA被降解了或者是凝胶没做好。sds-page电泳泳道一般不会很宽的,因为用来形成泳道的梳子都是固定大小的,只有电泳时条带可能会变的很宽这个是因为上样体积比较大的时候,比如上满整个泳道的时候,因为浓缩胶体积小,未能将样品完全压成一条线,在分离胶的时候条带就容易扩散。
电泳分离技术-浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡的影响
一般对电泳不会有太大的影响。浓缩胶与分离胶断裂,主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;板间有气泡,是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的。
蛋白质SDSPAGE电泳分离胶和浓缩胶的浓度如何确定
1,看目的蛋白的大小一般actin以下的可以跑12胶红线左右可以用12或10跑几百的很大的用6的胶小蛋白12的10的一般都能跑如果不考虑效率的话...能跑多慢跑多慢,越慢跑的越好看2,看样品浓度多少,以及你想用几次通常我们是定到4微每微,总量100微,用10次如果浓度小的话定到2用5次
WB上层胶怎么算跑好了
检测器检测。理论上,从普通培养基中收集分泌蛋白,此时对细胞生长条件的影响最小,是最佳的实验条件:但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA(牛血清白蛋白)之类的蛋白质,除非你进一步分离纯化,否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦,尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候:用“任何”
浓缩胶的配制方法
一般同工酶可选择7?5%~10%的胶(过氧化物酶和酯酶7?5%较合适,超氧化物歧化酶用10%,可溶性蛋白可根据需要配制)。将配制好的凝胶液置真空干燥器中,抽气10Min,再加入TEMED15μl;混匀后用一细玻棒引流,沿无凹槽的玻板缓缓注入胶室中,注胶过程要防止气泡产生。胶液加到离凹槽3CM处为止,
wb下层胶不平整会有什么影响
v是有较大影响的,胶体薄的位置防水性能与防潮性能较差,其他性能也会随之降低。胶体略厚的位置,很难用针探测元器件,零部件在出现故障后,不容易找出来。胶体固化后高低不平,还会导致电器性能不稳定,在运作过程中,零部件即使用螺丝紧固,胶液层厚的位置依然会出现轻度倾斜,长期使用会增加电器出现故障几率。
wb胶堵孔是什么原因
wb胶堵孔原因如下:1、胶的水分过分蒸发。2、浓缩胶凝胶太快。3、错用梳子。4、梳子不干净。
细胞凋亡-WB-没成功,你是不是用了-RIPA?
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程,通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是 WB 也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备
wb电泳时电流多少正常
看电泳槽多大,两电极直接的距离,每cm 3~5V。例如一个20cm的电泳槽,电压就应该设为60~100V间。电压大,速度就快。还要考虑DNA长度,小片段DNA适宜用比较低的电压。DNA分子提取得到以后,需要通过电泳技术来检测其数量和质量。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来,按相对分子质量大
DNA电泳(agarose胶)
DNA琼脂糖凝胶电泳 实验方法原理 利用DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时具有的电荷效应和分子筛效应。电荷效应是指DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电,在电场
DNA电泳(agarose胶)
实验材料 DNA样品试剂、试剂盒 琼脂糖 电泳缓冲液溴化乙锭 上样缓冲液仪器、耗材 电泳仪电泳漕 透射紫外灯 胶带纸 紫外成像仪
DNA电泳(agarose胶)
DNA电泳可用于:(1)分离不同大小的DNA片段;(2)鉴定目的DNA片段;(3)纯化和回收DNA片段。实验方法原理利用DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时具有的电荷效应和分子筛效应。电荷效应是指DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电,在电场中向正极移动,且相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,能以
WB电泳槽不能漏水吗
不能漏水。玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损,这样玻璃板受损处则不再平整,液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板,而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的,这种情况则需要一起更换。有时由于清洗不到位,边条压片表面会有污物凸起,也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分,其
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
什么是成层胶
中文名称成层胶英文名称spacer gel定 义凝胶电泳时,在分离胶上方铺设的一薄层大孔凝胶。能使样品在电泳初始阶段快速浓集在分离胶界面,样品在分离胶就能达到更好的分离效果。样品通过成层胶浓集是采用等速电泳的原理。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
wb实验分离胶立马就凝固了行么
透明胶邮票粘在一起,要分而不损伤邮票的确是件很麻烦的事。用电吹风或水泡等也不失为好办法。但刚开始不要盲目用电吹风或水泡等办法用在邮票上,以免损伤邮票。你可以用透明胶粘在和邮票差不多的废纸上(最好是撕下废弃无用的邮票边纸上)做个试验,先用电吹风吹,如果没有效,再用水泡等方法。试验成功取得经验后,再用到
电泳胶浓度的选择
浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了5mlH2O 3.6acrylamide mix(30%) 0.621M Tris(PH6.8) 0.6310% SDS 0.0510% AP 0.05TEMED 0.005
非变性胶蛋白电泳
Section 2.1Nondenaturing Polyacrylamide Gel Electrophoresis of ProteinsJohn M. Walker1. IntroductionSDS-PAGE (Section 2.2) is probably the most commo
RNA甲醛变性胶电泳
提取样品的总RNA后,一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构,因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳,得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。一、试剂:DEPC(Sigma公司产品),MOPs(Bocherigmer公司产品),甲酰胺(Formamide,Sigma公司