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细胞培养为什么要先裂解红细胞

红细胞裂解液一、基本介绍红细胞裂解液是一种去除红细胞最简便易行的方法,即用裂解液裂解红细胞,它 既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除 方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细 胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不 含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和 提取等。二、使用说明①组织细胞样品1、新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液。2、从4℃冰箱中取出 ELS裂解液,按 1:3-5 的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml 细胞压积加入 3-5ml裂解液),轻轻吹打混匀。3、 800-1000rpm离心 5-8 分钟,离心弃去上层红色清液。4、收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗 2-3 次。5、如裂解不完全可重复步骤2和3。6、重悬细胞,用于......阅读全文

红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)使用说明

红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)简介在生物科研领域,经常需要去除红细胞。去除红细胞的方法有多种,如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化铵红细胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer

TNT偶联网织红细胞裂解物系统问题与解答

1)什么是TNT偶联网织红细胞裂解物系统?TNT偶联网织红细胞裂解物系统为研究人员提供了一种可供选择的真核体外翻译系统,一种单管、偶联转录/翻译系统。将转录产物掺入到翻译混合物中,TNT偶联网织红细胞裂解物系统简化了体外翻译的过程,缩短了翻译所需的时间。标准兔网织红细胞裂解物翻译系统所用的RNA来源

全血RNA提取实验

            实验方法原理 红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质

全血RNA提取实验

全血RNA的提取可用于:(1)研究RNA干扰机制等;(2)用作反转录模板;(3)分子生物学其他研究。实验方法原理红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快

全血基因组提取操作步骤

操作步骤((200ul全血))* 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇! 1. 取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,放入1.5ml离心管。对如果全血起始量小于200μl,则用缓冲液BB补足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之间,则后续操作需要按照比例增

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的? FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。 2、流式同型对照怎样选择? 同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同

无细胞蛋白表达系统的选择

图1.  与细胞内蛋白表达相比,无细胞蛋白表达系统能够显著地节约时间。 与基于细胞的蛋白表达系统相比较,无细胞蛋白表达系统具有独特的优势,包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量。本文介绍了根据模板类型、期望产率以及下游实验等因素来选择无细胞蛋白表达系统的标

无细胞蛋白表达技术介绍

无细胞蛋白表达技术是指用含有蛋白合成必需的组分(核糖体,转运RNA,氨酰合成酶,启动/延伸/终止因子,三磷酸鸟苷,ATP,Mg2+和K+)的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。与传统的基于细菌或真核细胞的蛋白表达系统相比较,无细胞蛋白表达系统具有独特的优势,包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的

做人外周血流式相关问题

在下最近作人外周血流式,作表面及其胞内染色,试剂说明书说要先分离外周血单个核细胞再染色,我有时候分的红细胞比较多,其他的方法试过了,都改进的不好,我担心红细胞会有影响,想在分离出PBMC以后如果红细胞比较多的话,就用红细胞裂解液裂解一下,但是我有如下问题,希望这样做过的同志指点一下,感激不禁。(1)

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免

小量全血DNA提取方法

1 RNAi 慢病毒介导)服务2 筛选稳定细胞系方法3DNA提取试剂盒4RNA提取试剂盒5PCR相关产品6DNA Marker 产品7TA克隆产品8蛋白研究产品 储存事项: 1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可

偶然找到流式细胞术常见问题问答,经典!

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫

mRNA 在网织红细胞裂解液中的翻译

            实验材料 家兔 胰核糖核酸酶 小球菌核酸酶   I 型磷酸肌酸激酶

mRNA 在网织红细胞裂解液中的翻译

实验材料 家兔胰核糖核酸酶 小球菌核酸酶 I 型磷酸肌酸激酶试剂、试剂盒 乙酰苯肼溶液 A 溶液 B 灭菌重蒸水 CaCl2 EGTA 氯高铁血红素储存液 亚精胺 磷酸肌酸 氨基酸 DTT HEPES 水 KCl 乙酸镁 [35S] 甲硫氨酸.仪器、耗材 电泳装置干酪包布离心机实验步骤 一、材料与设

4.1 mRNA 在网织红细胞裂解液中的翻译

从哺乳动物细胞中提取的 mRNA 或通过克隆化 DNA 在体外转录产生的 mRNA 在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质,这些蛋白质可用于免疫沉淀试验或进行生物学活性测定。实验材料家兔胰核糖核酸酶小球菌核酸酶I 型磷酸肌酸激酶试剂、试剂盒乙酰苯肼溶液 A溶液 B灭菌重蒸水CaCl2EGTA氯高铁血红

如何选择最佳的全血DNA、RNA提取方法?

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面,层层剥茧,分析最佳的实验方法。 1、全血的采集保存和DNA的提取I. 用含抗凝

流式实验即将开始,“分析样品”你准备好了?

一、细胞的准备 试验一:组织培养细胞的细胞准备材料   完全培养基  流式细胞仪染色液  15或50ml尖底离心管实验过程1. 对于悬浮培养的细胞,把细胞分装到一个尖底离心管中,对细胞进行计数和活性分析,然后进入步骤3;2. 对于贴壁培养的细胞,用完全培养基从培养皿上吹起并吹散细胞凝聚物,

全血RNA提取实验

实验材料 鲜血液试剂、试剂盒 抗凝剂红细胞裂解液RLB去蛋白液RW1乙醇漂洗液RW仪器、耗材 制冰机离心机离心管移液枪移液管针头注射器水浴锅实验步骤 一、在适合大小的RNase free离心管中加入1体积(<1.5 ml)加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB,颠倒

DNA提取前为什么要先进行红细胞裂解

血液基因组DNA提取前为什么要先进行红细胞裂解全血基因组DNA提取试剂盒作用原理:全血基因组DNA提取试剂盒特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。全血基因

血RNA快速提取的操作步骤

操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!(2) 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。(3) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μlβ-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT

4.5 体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统

TNT 耦联网织红细胞裂解物系统乂可以分为:TNTT7 系统、TNTSP6 系统和 TN 下 PCR 系统。其屮,TNTT7 系统可以从线状和环状 DNA 中翻译蛋白质,SP6 系统只能使用环状 DNA 进行翻译,而 PCR 模板可使用 TNTPCR 系统迸行翻译实验材料质粒 DNA 模板试剂、试剂

制备和纯化 mRNA 显示蛋白实验

基本方案             实验方法原理 实验材料

制备和纯化 mRNA 显示蛋白实验

实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织

体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统

            实验材料 质粒 DNA 模板 试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水

全血RNA快速提取

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β

体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统

实验材料 质粒 DNA 模板试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水 [35S] 标记的甲硫氧酸 TNT 快速超级混合液 T7TNTPCR 增强液仪器、耗材 一 70°C 冰箱 冰浴 微量移液器 离心机 水浴槽 聚丙烯酰胺凝胶电泳装置实验步骤 ―、材料与设备1) 无核酸酶污染的水。2)[35S] 标记的甲硫氧

制备和纯化 mRNA 显示蛋白实验

实验材料DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织红细胞裂解物翻译试剂盒氯化

离心机在宫颈癌筛查中的应用

    宫颈癌筛查中,获取宫颈表面活性样本经前期梯度稀释处理,经过低速离心后可制成均匀单层的细胞薄片,达到检验要求。    液基薄层细胞制片机在此项中利用较小的离心力(200g),将宫颈刮片的稀释样品均匀的分布在细胞片上,方便后续的筛查工作。&nbs

基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法(1)

应用聚合酶链反应(PCR)技术测定临床标本中的病原体核酸成分,是一种高度敏感,且最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质,可干扰PCR反应,故在做PCR反应前必须进行核酸提取。经典的核酸提取方法通常是加去污剂(SDS等)裂解细胞,经蛋白酶处理、有机溶剂提取及乙醇沉淀等步骤。由于样本的

4.3 非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统

非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统由于具有转移定位、信号肽的切除和糖篇化的能力,因此对于绝大多数的外源性 mRNA 都具冇持续性的修饰加工能力。由于其膜的稳定性高,因此可使用蔗糖密度梯度离心或蛋白酶保护反应等方法分析转录产物的定位。实验材料成年雌性非洲爪蟾抑肽酶tRNA蛋白酶 K仪器、耗材离心机冷室实验步