mRNA在网织红细胞裂解液中的翻译
实验材料 家兔胰核糖核酸酶 小球菌核酸酶 I 型磷酸肌酸激酶试剂、试剂盒 乙酰苯肼溶液 A 溶液 B 灭菌重蒸水 CaCl2 EGTA 氯高铁血红素储存液 亚精胺 磷酸肌酸 氨基酸 DTT HEPES 水 KCl 乙酸镁 [35S] 甲硫氨酸.仪器、耗材 电泳装置干酪包布离心机实验步骤 一、材料与设备(一）兔网织红细胞裂解液的制备1)2〜3 kg 的家兔 6 只。2)1.2% 乙酰苯肼，用 1moL/LHEPES(pH7.0) 中和至 PH7.5。3) 溶液 A:140 mmol/LNaCL,l.5 mmol/L 乙酸镁，5 mmol/LKCL,0.001% 肝素4) 溶液 B:140 mmol/LNaCl,1.5 mmol/L 乙酸镁，5 mmol/LKC15) 灭菌重蒸水6)lOOmmol/LCaCl27)200 mmol/LEGTA(pH7.0)8) 小球菌核酸酶（150000 单位/ml), 保存于坫氨酸浓度为 50 m......阅读全文
mRNA－在网织红细胞裂解液中的翻译
实验材料 家兔胰核糖核酸酶 小球菌核酸酶 I 型磷酸肌酸激酶试剂、试剂盒 乙酰苯肼溶液 A 溶液 B 灭菌重蒸水 CaCl2 EGTA 氯高铁血红素储存液 亚精胺 磷酸肌酸 氨基酸 DTT HEPES 水 KCl 乙酸镁 [35S] 甲硫氨酸.仪器、耗材 电泳装置干酪包布离心机实验步骤 一、材料与设
mRNA－在网织红细胞裂解液中的翻译
实验材料 家兔 胰核糖核酸酶 小球菌核酸酶 I 型磷酸肌酸激酶 试剂、试剂盒
4.1－mRNA－在网织红细胞裂解液中的翻译
从哺乳动物细胞中提取的 mRNA 或通过克隆化 DNA 在体外转录产生的 mRNA 在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质,这些蛋白质可用于免疫沉淀试验或进行生物学活性测定。实验材料家兔胰核糖核酸酶小球菌核酸酶I 型磷酸肌酸激酶试剂、试剂盒乙酰苯肼溶液 A溶液 B灭菌重蒸水CaCl2EGTA氯高铁血红
网织红细胞裂解物的概念
中文名称网织红细胞裂解物英文名称reticulocyte lysate定 义用于测定信使核糖核酸(mRNA)活性的一种体外翻译分析系统。通常由药物致贫血而发育不完全的兔网织红细胞制备，但须用RNA酶去除其中内源的mRNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
关于兔网织红细胞系统的基本介绍
兔网织红细胞系统：网织红细胞无细胞核，其合成的蛋白质90%l 人上为珠蛋白。兔网织红细胞用活大白兔制备，通过纯化除去兔网织红细胞以外的污染细胞。网织红细胞裂解后，提取物用微球菌核酸酶破坏内源mRNA,最大限度地降低翻译背景。裂解物包含蛋白质合成所必须的细胞内组分(tRNA,核糖体，氨基酸，起始、
红细胞裂解液的基本介绍
红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer,或称 ACK Lysis Buffer）是一种去除红细胞最简便易行的方法，即用裂解液裂解红细胞，它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法，主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细
红细胞裂解液的作用原理
细胞裂解液一般都用的是含酶的,在血红细胞表面上有红细胞专属的表面抗原,当裂解液中含可以攻击特定红细胞表面抗原的酶的时候 就只会造成红细胞的变形,生物通道扩大,膨胀,裂解,或者引起红细胞的变性.而不会攻击其他细胞.另外红细胞有自己的电负性,渗透脆性(通常是一些非酶细胞裂解液的突破点) ,悬浮稳定性,这
mRNA的转运和翻译
mRNA的转运真核生物和原核生物之间的另一个区别是mRNA的转运。由于真核转录和翻译是在不同的细胞器内进行的，真核mRNA必须从细胞核输出到细胞质。 这一过程可能受不同信号通路的调节。成熟的mRNA通过其加工的修饰被识别，在结合帽结合蛋白CBP20和CBP80及转录/输出复合物（TREX）后通过核孔
无细胞蛋白表达技术介绍
无细胞蛋白表达技术是指用含有蛋白合成必需的组分（核糖体，转运RNA，氨酰合成酶，启动/延伸/终止因子，三磷酸鸟苷，ATP，Mg2+和K+）的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。与传统的基于细菌或真核细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的
简述红细胞裂解液的作用原理
氯化铵是红细胞裂解液的主要效应物质，氨根离子不能通过细胞膜，而其他离子可以通过，造成细胞内外的离子浓度差异，形成了渗透压差，外部的水分会扩散至细胞内，使红细胞膨胀，达到裂解的效果。
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 DNA 库 不含甲硫氨酸的翻译混合物
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验材料DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织红细胞裂解物翻译试剂盒氯化
mRNA－在麦胚提取物中的翻译
实验材料 精胺或4.0〜8.Ommol L亚精胺肌氨酸激酶新鲜麦胚 沙粒试剂、试剂盒 提取缓冲液 平衡缓冲液 DEFC 10X能量缓冲液 乙酸钾 DTT LHEPES mRNA [3 H] 或 [35S] 标记的 L-氨基酸 三氯乙酸（TCA)。仪器、耗材 SephatkxG-25(粗级）高温烘箱
mRNA－在麦胚提取物中的翻译
实验材料 精胺或4.0〜8.Ommol L亚精胺 肌氨酸激酶 新鲜麦胚 沙粒 试剂、试剂盒
TNT偶联网织红细胞裂解物系统问题与解答
1)什么是TNT偶联网织红细胞裂解物系统？TNT偶联网织红细胞裂解物系统为研究人员提供了一种可供选择的真核体外翻译系统，一种单管、偶联转录/翻译系统。将转录产物掺入到翻译混合物中，TNT偶联网织红细胞裂解物系统简化了体外翻译的过程，缩短了翻译所需的时间。标准兔网织红细胞裂解物翻译系统所用的RNA来源
无细胞蛋白表达系统的选择
图1. 与细胞内蛋白表达相比，无细胞蛋白表达系统能够显著地节约时间。 与基于细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量。本文介绍了根据模板类型、期望产率以及下游实验等因素来选择无细胞蛋白表达系统的标准。
关于红细胞裂解液的使用说明
一、组织细胞样品： 1.新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液，离心弃去上清液； 2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml细胞压积加入3-5ml裂解液），轻轻吹打混匀； 3.800-1000rpm离心5-8分钟，离心弃去上层红色清液；
4.2－mRNA－在麦胚提取物中的翻译
麦胚提取物体外翻译系统可用于病毒和真核细胞中 mRNA 在异种无细胞体系中的有效的翻译实验材料精胺或4.0〜8.Ommol L亚精胺肌氨酸激酶新鲜麦胚沙粒试剂、试剂盒提取缓冲液平衡缓冲液DEFC10X能量缓冲液乙酸钾DTTLHEPESmRNA[3 H] 或 [35S] 标记的 L-氨基酸三氯乙酸（T
4.5－体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
TNT 耦联网织红细胞裂解物系统乂可以分为：TNTT7 系统、TNTSP6 系统和 TN 下 PCR 系统。其屮，TNTT7 系统可以从线状和环状 DNA 中翻译蛋白质，SP6 系统只能使用环状 DNA 进行翻译，而 PCR 模板可使用 TNTPCR 系统迸行翻译实验材料质粒 DNA 模板试剂、试剂
mRNA的转运和翻译介绍
mRNA的转运 真核生物和原核生物之间的另一个区别是mRNA的转运。由于真核转录和翻译是在不同的细胞器内进行的，真核mRNA必须从细胞核输出到细胞质。 这一过程可能受不同信号通路的调节。成熟的mRNA通过其加工的修饰被识别，在结合帽结合蛋白CBP20和CBP80及转录/输出复合物（TREX）后
关于麦胚提取物系统的简介
麦胚提取物系统：通过碾磨麦胚，用筛子或吹风机初选，分出麦胚，然后再将粗制的麦胚加10 倍体积的缓冲液与砂子共研磨。以23 000g 转速离心，所得的上清液称为S23。上清液通过层析将抑制翻译的内源氨基酸和植物色素等分离出去。提取物用微球菌核酸酶处理以破坏内源mRNA,最大限度降低翻译背景。将S2
体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
实验材料 质粒 DNA 模板 试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水 [35S] 标记的甲硫氧酸 TN
体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
实验材料 质粒 DNA 模板试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水 [35S] 标记的甲硫氧酸 TNT 快速超级混合液 T7TNTPCR 增强液仪器、耗材 一 70°C 冰箱 冰浴 微量移液器 离心机 水浴槽 聚丙烯酰胺凝胶电泳装置实验步骤 ―、材料与设备1) 无核酸酶污染的水。2)[35S] 标记的甲硫氧
网织红细胞计数和网织红细胞绝对值
织红细胞计数和网织红细胞绝对值参考范围及临床意义:原理： 网织红细胞是幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过渡型细胞。网织红细胞的胞浆内尚残存核糖体等嗜碱性物质，用煌焦油蓝行活体染色后可呈蓝色细颗粒或网状物。在染色血液涂片中计数每 100个无核红细胞中的网织红细胞数，即为网织红细胞计数，以百分比
网织红细胞计数和网织红细胞绝对值
原理： 网织红细胞是幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过渡型细胞。网织红细胞的胞浆内尚残存核糖体等嗜碱性物质，用煌焦油蓝行活体染色后可呈蓝色细颗粒或网状物。在染色血液涂片中计数每 100个无核红细胞中的网织红细胞数，即为网织红细胞计数，以百分比表示。将网织红细胞计数的百分数乘以红细胞计数值
真核生物翻译的调控（2）
5′端非翻译区的二极结构影响到调控蛋白与帽结构的接近，阻碍40S前起始复合体的装配和在mRNA上的扫描，起负调控的作用。但若二极结构位于 AUG的近下游，（最佳距离为14 nt），将会使移动的40亚基停靠在AUG位点，增强起始反应。真核的系列翻译起始因子可使二极结构解链，使翻译复合体顺利通过
关于无细胞翻译系统的基本信息介绍
无细胞翻译系统（cell-free translation system）是2008年公布的生物化学与分子生物学名词。 没有完整细胞的体外蛋白质翻译合成系统。通常利用无细胞提取物提供所需要的核糖体、转移核糖核酸、酶类、氨基酸、能量供应系统及无机离子等，在试管中以外加的信使核糖核酸(mRNA)指
网织红细胞的检测
实验步骤 展开
网织红细胞的检测
实验步骤展开