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常见破膜剂如何选择

常见破膜剂有:① 皂素;② 有机溶剂:乙醇、甲醇、丙酮等;③ Triton-X、Tween-20。 破膜剂选择原则: ① 尽量保持细胞形态,使可根据散射光信号分析细胞种类,如区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞; ② 不影响细胞膜表面抗原与抗体的特异性结合(若需同时检测细胞内外抗原)。 常见破膜剂对比: ① 细胞形态影响:利用皂素破膜,外周血细胞的流式散射光图中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分群清晰;而另两种破膜剂,通过与细胞膜上的蛋白质和脂质作用发挥破膜效果,易导致细胞发生皱缩,这3群细胞很难分开; ② 对抗原影响:a.标记表面抗原和破膜两步操作的先后顺序有所影响:以检测表面CD8为例,先标记再破膜对CD8无明显影响,而先破膜再标记,乙醇和Triton-X会使表达CD8细胞比例和每个细胞上抗原表达量急剧下降;b.对不同抗原的影响不同:如检测IFN-γ时,Triton-X破膜会导致其检测率降低,而皂素和乙醇无影响;检测TNF-α时,皂素的......阅读全文

胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎1例诊疗分析

胎膜早破(PROM),是指胎膜在临产前发生自发性破裂,依据发生的孕周分为足月胎膜早破和未足月胎膜早破。足月单胎胎膜早破发生率为8%;单胎妊娠胎膜早破发生率为2%~4%,双胎妊娠膜早破发生率为7%~20 %,未足月胎膜早破是早产的主要原因之一。 绒毛膜羊膜炎是胎膜早破的常见并发症,两者互为因果。绒

破膜剂的秘密

用去污剂自制破膜剂,皂素、Tween-20、Triton-x哪个好?我应该选择哪种方法破膜?用哪种方法破膜,需根据你要标记的靶抗原和要求,例如如果你需要尽可能保持细胞形态和光散射特点,那么就需要选择对形态影响小的固定和破膜成份,并且要检测的靶分子位于胞浆还是胞核,也非常重要。常用的破膜方法主要包括:

由一例奇怪的Ph染色体阳性急性B淋巴细胞白血病引发...-2

窦心灵-酒泉市人民医院:应该是染色体吧?茹进伟-乐昌市人民医院:书中有提到,Ph+的ALL常会带有颗粒,猜想一下,会不会是这些颗粒影响细胞化学MPO染色结果?陈佳宁-北京友谊医院:各位老师,我们也遇到过原始细胞细胞化学MPO和PAS双阳的,如果没有完善流式检查或流式只支持淋或髓中的某一系,而没有遗传

Th1细胞和Th2细胞的检测

实验材料细胞内因子抗体试剂、试剂盒PMA 贮存液依诺霉素贮存液莫能星RPMI-1640破膜剂实验步骤一、检测试剂1. PMA 贮存液:PMA 溶于 DMSO,浓度为 0.1 mg/mI,-20℃ 保存,工作液贮存液 1:100 稀释于 RPMI-1640 或 PBS(无菌,无叠氮钠)中,此时为 1

Th1细胞和Th2细胞的检测

            实验材料 细胞内因子 抗体 试剂、试剂盒 PMA 贮存液

Th1细胞和Th2细胞的检测

            实验材料 细胞内因子 抗体 试剂、试剂盒 PMA 贮存液

浅谈自然产程中的“人工破膜及点滴缩宫素”

众所周知,在产程中的催产办法主要包括三种:镇静、人工破膜及静脉点滴缩宫素。目前来看,静推安定并不是很提倡了,因为存在一定的风险,主要是有孕妇突发心脏骤停的危险性,除非是在孕妇极度疲劳且需要继续待产的情况下,可以考虑使用。现在,在临床上比较常用的催产办法就是人工破膜及点滴缩宫素,现结合自己的临床实践,

人PBMC调节T细胞检测操作步骤

1、制备PBMC,并调整细胞浓度至107/ml。2、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液,细胞数约为1x106个。3、按照细胞表面抗原染色方法标记CD4和CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量(一般来说是20ul,可能随批次有差异)。按个人要求设置空白管、对照管、补

病例分析:一例少见的双表型急性白血病

    2016年8月14日,秦皇岛市第一医院的陈宏伟老师受中国医学科学院血液病医院的许议丹老师委托,在全国形态学诊断学术交流群分享了一例临床少见的白血病病例。现将详细内容整理成帖,方便大家收藏和学习。    简要病史:患者,女,6岁,以“间断发热1

破膜剂的秘密(二)

流式染色中,最难的是破膜,了解破膜剂的秘密,能够更好地进行胞内染色。为什么要进行破膜?很简单,就是希望研究细胞内部的蛋白分子,正常情况下,荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜,只能在细胞膜上打出足够大的孔,才能使抗体进入细胞内。一般,破膜主要分为以下几步:(1)用醛类(多聚甲醛、甲醛、戊二醛)或有机溶

离体叶绿体的制备以及完整度的测定

实验概要分离方法一般有两种,一是酶消化方法,把叶片表皮撕去后,用纤维素酶和果胶酶消化细胞壁,得到原生质体,再把原生质体通过尼龙网小孔(孔径20μm),使原生质体破裂而释放出完整叶绿体,但此方法分离得到的叶绿体数量有限。另一种是用机械方法,先用捣碎机破碎叶片,再分步离心,可以大量制备叶绿体。这里主要介

中国科大在抗胰腺癌纳米医药研究方面取得进展

原文地址:http://www.cas.cn/syky/202103/t20210318_4781444.shtml  胰腺癌致死性较高,其难治的根本原因在于胰腺癌细胞被致密的基质屏障所裹,从而阻碍治疗药物的浸润,导致难以清除肿瘤细胞。为促进治疗药物通过基质屏障的渗透,在注射吉西他滨治疗之前用佐剂重

文献点评—60例足月胎膜早破孕妇最佳引产时机探究

本文的研究目的:探讨足月胎膜早破孕妇不同引产时机对母儿的影响。研究对象:回顾性分析2016年1月至2017年2月内蒙古医科大学附属医院收治的60例足月胎膜早破孕妇的临床资料, 根据引产时机的不同将孕妇分为甲乙丙3组, 各20例。3组孕妇分别在破膜2 h、12 h、24 h后, 静脉滴注缩宫素进行

胎膜早破的临床指南解读

胎膜早破(PROM)在产科急诊中很常见,多数发生在晚上,从而作为产科医生无论是120出车,还是看急诊产科,胎膜早破是产科医师必须掌握的疾病,掌握中国的胎膜早破的指南非常有必要。胎膜早破是指在临产前出现自发性的胎膜破裂,可以分为足月和未足月两种类型。足月PROM在产科临床中最为常见,其发生率为8%,其

细胞内细胞因子染色步骤

1.样本准备:1) 收集细胞。经刺激和阻断处理的细胞(具体处理方案请参考文献进行),加细胞染色Buffer(或含0.1%BSA的PBS)制成单细胞悬液,调整细胞浓度约为1×107/ml。2) 取100μl细胞/管(约1×106细胞),分别加到做好标记的流式管底部。2.固定:1) 如需要表面染色,选用

流式细胞仪实验方法

一、 实验准备1.   标本制备:2.   zui小化非特异性结合: 二、凋亡1.凋亡的检测方法:网站和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、细胞因子1.激活的细胞因子2.CBA 四、血小板

引产、产后出血治疗

  1 妊娠晚期引产用药    促宫颈成熟药物:适用于晚期引产、高危妊娠和过期妊娠。对有阴道分娩条件者,使用前行宫颈Bishop评分小于6分;胎儿宫内状况评估无胎儿窘迫者;除外药物应用禁忌者。    缩宫素 有促宫颈成熟、诱发及加

SsrB对伤寒沙门菌氧应激早期基因表达的调节

【摘要】  目的: 研究伤寒沙门菌ssrB基因在氧应激早期对其他基因表达的调节。方法: 通过同源重组的方法利用自杀质粒制备伤寒沙门菌ssrB基因缺陷变异株;采用伤寒沙门菌全基因组芯片比较野生株和ssrB基因缺陷变异株在氧应激早期的基因表达差异,并对其中部分表达差异基因进行实时定量P

自噬流的检测方法

  自噬是真核细胞降解长寿蛋白、错误折叠蛋白和受损细胞器的重要生物学过程。细胞自噬由多个步骤组成, 其中包括: ① 吞噬泡的形成; ② 自噬体的形成; ③ 自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体; ④ 自噬溶酶体的降解。自噬流是这些步骤在细胞内连续出现的动态过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成

关于穿破硬脊膜案例的处理分享

椎管内穿刺时麻醉医生常用的操作技能,由于是经验性盲穿技术,故穿破硬脊膜仍是有可能发生,虽然几率为1.5%,但是头痛发生几率却高达52%。正所谓常在河边走,哪有不湿鞋,本人从事麻醉专业将近十年,一直小心翼翼,可最近在一次硬膜外穿刺过程中,还是不小心刺破了。病例回顾患者女性26岁,50kg,因“停经40

通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书

  通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   通用型植物线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过物理或化学破膜及离心处理方法,从植物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器,然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制

初产妇护理实例分析

  初产妇,28岁。足月妊娠临产,2小时前检查宫口开4cm,检查:宫缩7-8分钟一次,持续时间30秒,胎膜未破,余无异常。    一、从产程图上可以看出,该产妇存在的问题是?    答:活跃期停滞。  &nbs

显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程

实验概要本实验详细介绍了显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程。实验原理转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因(或基因组片段)用显微注射法注入供体小鼠的受精卵(或着床前胚胎细胞),然后将此受精卵(或着床前胚胎细胞)再植入受体动物的输卵管(或子宫)中,使其发育成携带有外源基因的转基因动物,通过分

转基因小鼠模型的建立(SOP)-7

4)  如果未见DNA溶液流,则轻轻摩擦持样器钝缘,渐渐的打开注射器针头。针头重新进入油内确定DNA溶液流的存在。5)  移动持卵管回到受精卵下部。通过微分驱动水压控制系统使持卵管内产生温和的负压,并使持卵管末端吸住受精卵。此操作必须确保受精卵基底部与凹玻片基底部轻轻接触。注意不

小鼠Treg检测操作步骤

1、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液,细胞数约为1x106个.2、按照细胞表面抗原染色方法标记表面抗原。根据说明书加入CD4和CD25抗体100 µl体系中使用0.125 µg FITC anti-mouse CD4,0.

实现蛋白marker与Annexin V双染的同时检测的实验方法

要用AnnexinV双染法测凋亡,又想同时标记蛋白marker,甚至还有胞内指标,可是PI和7-AAD都不能洗,怎么办? eBioscience的可固定细胞活力染料Fixable Viability Dye帮您完美解决固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色,

流式细胞仪实验方法-1

流式细胞仪实验方法 一、 实验准备1.   标本制备:2.   zui小化非特异性结合: 二、凋亡1.凋亡的检测方法:和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、细胞因子1.激活的细胞因子2.C

流式细胞检测中抗体信号弱,累觉不爱,啥原因?

1、抗体储存确保你的抗体保存在4℃并且避光。如果抗体结合了荧光素,那么千万不要冷冻保存,因为这可能会导致荧光抗体的沉淀和聚集。还有,要确保抗体没有过期。2、稀释你是不是一直在用厂家推荐的量做实验?你可能需要进行抗体滴定找到最佳抗体用量。3、仪器--滤光片设置确保流式机器配置有合适的、能够检测到你所用

显微操纵系统-RI

   Integra Ti显微操纵系统的主要特点    最新设计全机械传动, 全集成整体一体化结构,占用空间最少   ·最新设计的全机械传动, 操纵器TDU5000具有X、Y、Z三个方向的微调与粗调功能,令操作更加可靠、平稳和直观,避免了电动式操纵反应滞后,克服了液压式步进马达的位移不连续性等弊

原代细胞免疫荧光鉴定步骤

为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞,使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型,免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤,仅做