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前沿显微成像技术专题——转盘式共聚焦显微镜(1)

传统的荧光显微技术在生物成像领域有两个难以克服的挑战:一是对生物样品的结构做3D成像。在传统宽场荧光显微镜中,照明光会照亮光路上的整个样品,来自非焦平面的杂散光信号也会被成像物镜收集到(图1),干扰所要观察的样品信号,不但降低横向分辨率,轴向分辨率也只能达到2.5µm左右,比大多数生物结构都要大,因此很难对样品3D结构清晰而准确地成像;另一个挑战是对样品内部结构清晰成像。在观察细胞内部活动时,细胞膜的荧光信号会对成像产生极大的干扰。图1 小鼠肾脏切片(厚度20µm)分别在 (a) 宽场和 (b) 荧光共聚焦显微镜下的成像效果。哺乳动物上皮细胞(厚度50µm)分别在 (c) 宽场和 (d) 荧光共聚焦显微镜的成像效果。Scale bar: 20µm。(Adapted from Jonkman and Brown 2015)如何排除这些来自非焦平面的干扰信号呢?早在1953年,美国学者马文·明斯基就提出了“共聚焦”的构想。经过30年......阅读全文

快速转盘共聚焦显微镜

什么是快速转盘共聚焦显微镜?它有什么特点?又能够应用于什么领域呢?快速转盘共聚焦显微镜,是一种利用高速旋转的多尺寸空间针孔阵列(转盘)过滤掉非焦平面光线,利用高精度 Z 轴扫描部件对样品进行高度方向扫描,从而快速获得样品表面三维形貌的显微镜。

前沿显微成像技术专题 —— 转盘式共聚焦显微镜(2)

上一篇文章介绍了转盘式共聚焦显微镜的基本原理和技术特点,本篇主要介绍一些不同的转盘共聚焦系统。常见转盘共聚焦系统目前市场上最常见的是由日本Yokogawa(横河电机)公司生产的 CSU系列转盘系统,主流转盘共聚焦显微镜多使用的是这一系列。正如在前文中提到的,它由两个同轴排列的针孔圆盘组成,中间装有一

前沿显微成像技术专题——转盘式共聚焦显微镜(1)

传统的荧光显微技术在生物成像领域有两个难以克服的挑战:一是对生物样品的结构做3D成像。在传统宽场荧光显微镜中,照明光会照亮光路上的整个样品,来自非焦平面的杂散光信号也会被成像物镜收集到(图1),干扰所要观察的样品信号,不但降低横向分辨率,轴向分辨率也只能达到2.5µm左右,比大多数生物结构都要大,因

共聚焦显微镜中荧光团的共定位

在多标荧光样品图像中,因两个或多个荧光团在显微结构中距离很近,经常会有发射信号叠加,这种效应就称为共定位。目前,高特异性合成荧光团和经典免疫荧光技术的应用、精密光切技术的应用、共聚焦和多光子显微镜提供的数字图像处理技术等大大提高了生物样品中共定位检测的能力。

快速转盘共聚焦显微镜 Smartproof5 的特点

快速转盘共聚焦显微镜 Smartproof5 的特点:高速扫描,扫描速度大大快于基于点扫描原理的激光共聚焦显微镜极大的操作简便性与新一代软件图形界面拥有各种国际标准的分析测量软件,能够满足材料表面表征和分析的需求稳固设计,卓越的光学性能,精确的测量结果快速转盘共聚焦显微镜在工业领域有着广泛的应用,如

共激光扫描共聚焦显微镜

共激光扫描共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope,LSCM)是一种先进的分子生物学和细胞生物学研究仪器。它在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置,结合数据化图像处理技术,采集组织和细胞内荧光标记图像,在亚细胞水平观察钙等离子水平的变化,并结合电生理等技术

共聚焦图中对荧光团共定位

正如上面所讨论的,在共聚焦图中对荧光团共定位的定量测定,可通过散点图和感兴趣区域的信息获得。从整个散点图的信息,可获得很多变量值。Pearson′s 系数就是用于分析整个散点图的诸多变量中的一个,为描述两幅图之间重叠程度,在识别一幅图像和另一幅图像的匹配程度上, Pearson′s, R(r)系数是

显微成像小课堂丨告别非焦平面信息干扰

  虽然我们常说的分辨率指的焦平面上的分辨率(即XY方向),决定分辨率高下的决定因素是物镜的数值孔径,但是其实在宽场荧光显微镜中,样本中整个被照亮的区域都会发射出荧光,这些非焦平面上的荧光其实对于焦平面上发射出的荧光,也就是我们真正关注的信息来说就是一种干扰,这也可以理解为在Z方向上,也是有分辨率的

激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构

    激光扫描共聚焦荧光显微镜是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、先进的分子细胞生物学的分析仪器。主要用于观察活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,定量分析,以及实时定量测定等。   成像原理   采用点光源照射标本,在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点,该点被照射后发出的

共聚焦显微镜的共焦显微技术

共聚焦显微镜有较高的分辨率,而且能观察到样本随时间的变化。因此,共聚焦显微技术在生物学研究领域起着不可或缺的作用。以下为共焦显微技术的几个主要应用方面:  (1)组织和细胞中荧光标记的分子和结构的检测:  利用激光点扫描成像,形成所谓的“光学切片”,进而可以利用沿纵轴上移动标本进行多个光学切片的叠加