western一抗4摄氏度敷育过夜后为什么要复温

我的理解是,为了更好的进行二抗孵育,毕竟抗体的最适温度是37度4度孵育过夜一般是为了减少非特异的条带,或者是实在是当天做不完了,扔到4度去过夜。......阅读全文

western如何孵一抗

将抗体稀释到推荐浓度,这要是看你放膜的容器大小,如果容器刚好和膜差不多,只要配少量的一抗溶液就可以完全覆盖膜,但是如果容器较大,就需要事先看多少ml的溶液才能够用。抗体溶液倒到膜上后,将容器放到一个水平摇床,或者是染色摇床上,缓慢的摇动。可以在4C过夜孵育,也可以在室温孵育1h即可。

western-glut4一抗,二抗怎么配置

配制抗体的时候有两样东西比较关键:溶解抗体的溶液或稀释液,通常如果只是溶解抗体,可能会建议用PBS或者TBS,提供中性环境,以帮助抗体的保存。如果已经是液体,只是需要稀释做实验的话,一般会用封闭液(BSA溶液,脱脂奶粉,注脱脂奶粉稀释后的抗体无法再次使用),或者是洗液(TBST或PBST)。抗体的浓

western-blot的一抗、二抗可以重复用么

保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。

western-blot的一抗、二抗可以重复用么

保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。

western-blot的一抗、二抗可以重复用么

保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。

western-blot中的一抗如何选择

一般选择的原则是去文献中找,看看别人做和你一样的目的蛋白的时候用的都是哪家得抗体,都有介绍的,看看图片效果怎么样。多找出一些文献,然后根据你掌握的信息选择一种最便宜,最高效,特异性最好的抗体。一般做科研的人都是这么选择抗体的,不能蒙着买,毕竟不便宜的。

western-blot-一抗用什么溶剂溶解

western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶剂溶解western blot 一抗使用的时候一般只需要稀释,购买时厂家应该会提供一抗稀释液。如果没有一抗稀释液可以用TBST或者PBST稀释,这个要看具体使用的情况了

如何在Western-Blot中选择一抗?

说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体,本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用时我们应该怎么选择呢?检测任何一种目的蛋白都

western-blot-一抗用什么溶剂溶解

western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶剂溶解western blot 一抗使用的时候一般只需要稀释,购买时厂家应该会提供一抗稀释液。如果没有一抗稀释液可以用TBST或者PBST稀释,这个要看具体使用的情况了

western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少

一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大,从1:200到1:1000都有,这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打,一般用1:5000到1:10000就可以了。

western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少

一般抗体的说明上,都给出了一个范围,一抗为1:200-2000,二抗为1:1000-10000。western blot 的原理:本质是抗原抗体反应。第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体

western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少

一般抗体的说明上,都给出了一个范围,一抗为1:200-2000,二抗为1:1000-10000。western blot 的原理:本质是抗原抗体反应。第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体

western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少

一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大,从1:200到1:1000都有,这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打,一般用1:5000到1:10000就可以了。

western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少

一般抗体的说明上,都给出了一个范围,一抗为1:200-2000,二抗为1:1000-10000。western blot 的原理:本质是抗原抗体反应。第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体

Western-Blot-一抗二抗去除液(酸性)使用说明

ECL 化学发光法是目前最常用、最灵敏的 Western Blot 检测方法。由于这些底物不会在膜表面沉淀、牢牢结合在膜上,因此可以通过一抗二抗去除液(Stripping buffer)将亲和结合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体,也要足够温和使转移的目标蛋白仍

做western-blot-的一抗孵育的原理

只是简单的抗原抗体反应而已,抗体的氨基酸序列与抗原氨基酸序列相互匹配才能发生反应。所以不同的蛋白质要选择与其相对应的抗体,是特异性反应。

做western-blot-的一抗孵育的原理

只是简单的抗原抗体反应而已,抗体的氨基酸序列与抗原氨基酸序列相互匹配才能发生反应。所以不同的蛋白质要选择与其相对应的抗体,是特异性反应。

western用过的一抗可以回收再用吗

中间做过strip吗?是不是strip的太剧烈了,把膜上的蛋白完全都剥掉了。尝试用一些温和的剥脱方法,降低温度,降低SDS浓度和处理时间可能会有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能会导致检测不到。需要确认一下。

western-一抗用什么稀释比较好

可以用加了脱脂奶粉的封闭液,也可以用TBST液。如果显色用的是红外荧光二抗,则只能用TBS液稀释。

western用过的一抗可以回收再用吗

中间做过strip吗?是不是strip的太剧烈了,把膜上的蛋白完全都剥掉了。尝试用一些温和的剥脱方法,降低温度,降低SDS浓度和处理时间可能会有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能会导致检测不到。需要确认一下。

western-blot中的一抗是甚么东西

一抗就是用来和你要检测的蛋白发生免疫反应的抗体确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的

western膜一抗放两天行吗

在四度冰箱中可以的,拿出来后一抗多洗一会没事的,不然可能会背景有点深,我最长敷过四天呢,妥妥的。

Western用的一抗,单抗好些还是多抗好些?

做Western来讲,理论上单抗比多抗的特异性要好,但单抗种类较少,一般价格偏高,所以一般来说多抗足够了。用于Western的抗体和用于ELISA的抗体,一般来说用于Western的抗体识别的是氨基酸序列特异性,而可用于ELISA的抗体要看抗原种类,有些是识别氨基酸序列特异性,有些是识别构象特异性,

没有注明可以用来做Western-blot的一抗可以用来做Western-...

没有注明可以用来做Western blot的一抗,可以用来做Western blot吗?不一定,因为有的抗体是识别线性表位的,有的是识别构象型表位,识别构象型表位的抗体不能用于Western blot,因为在Western blot中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原,而蛋白质抗原的构象型表位变性时被

western-blot中一抗封闭时间过长会有什么后果

如果一抗封闭时间过长,非特异性的条带也会被染上一抗,这样再染二抗的时候,二抗和一抗结合,显影后背景深且非特异性条带会很多

western-blot中一抗封闭时间过长会有什么后果

如果一抗封闭时间过长,非特异性的条带也会被染上一抗,这样再染二抗的时候,二抗和一抗结合,显影后背景深且非特异性条带会很多

western-blot中一抗封闭时间过长会有什么后果

如果一抗封闭时间过长,非特异性的条带也会被染上一抗,这样再染二抗的时候,二抗和一抗结合,显影后背景深且非特异性条带会很多

western-blot中一抗封闭时间过长会有什么后果

如果一抗封闭时间过长,非特异性的条带也会被染上一抗,这样再染二抗的时候,二抗和一抗结合,显影后背景深且非特异性条带会很多

western-blot-一抗孵育4小时有影响吗

western blot 一抗孵育4小时当然有影响的,一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分,然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体,抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深,但洗膜时间延长并不能完全去除背景。

western-blot-一抗孵育4小时有影响吗

western blot 一抗孵育4小时当然有影响的,一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分,然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体,抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深,但洗膜时间延长并不能完全去除背景。