用琼脂糖凝胶电泳分析核酸有哪些影响因素
核酸电泳中所用到的eb能用sybrgreen,goldview替代。GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型DNA染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验,尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。SYBR Green I 核酸凝胶染液(SYBR Green Nucleic Acid Gel Stains)是一种高敏感性的荧光染液,用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。当染液与核酸结合后,SYBR Green I 核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强,因此经SYBR GreenI 核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比,没有背景荧光。为获得最佳的结果,凝胶最好在跑胶后再进行染色。SYBR GreenI 核酸凝胶染液用于低含量的P......阅读全文
微量气体成分分析有哪些影响因素?
微量氮气体分析仪仪器采用高频高压电源电离气体,产生正电荷离子和自由电子,形成等离子体环境,其中的N2分子被电离成原子。正电荷离子、自由点在电场的作用下分别加速移向负极、正极。由于碰撞,离子和电子将自身能量传递给原子,使得气态原子被激发。原子被激发后,其外层电子发生能级跃迁,在返回基态时发射特征光
影响植物根的生长有哪些因素
影响根生长的物理环境因素:土壤的物理因素,如土壤容重、含水量、温度等对植物根系的生长发育影响较大。土壤容重大,说明土壤紧实,根不易伸长。“旱长根,水长苗”,因为水分过多,土体中空气就少,植物毒素积累,影响根的正常呼吸。但过于干旱也不利于根的生长。一般水分保持在该土壤田间持水量的60%~80%时,根系
影响显微镜成像有哪些因素?
由于客观条件,任何光学系统都不能生成理论上理想的像,各种相差的存在影响了成像质量。下面分别简要介绍各种相差。 1、色差 色差是透镜成像的一个严重缺陷,发生在多色光为光源的情况下,单色光不产生色差。白光由红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七种组成,各种光的波长不同 ,所以在通过透镜时的折射率也不同,这
热重分析仪有哪些影响因素?
热重分析仪(Thermal Gravimetric Analyzer)是一种利用热重法检测物质温度-质量变化关系的仪器。热重法是在程序控温下,测量物质的质量随温度(或时间)的变化关系。 影响因素试样量和试样皿热重法测定,试样量要少,一般2~5mg。一方面是因为仪器天平灵敏度很高(可达0.1μg),
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离方法介绍
1.核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系(1)DNA分子的大小 在凝胶中,DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
实验方法原理 可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
实验方法原理 可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该法较为温和,因此特别适用从脉冲场琼脂糖凝胶中 回收高分子质
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该法较为温和,因此特别适用从脉冲场琼脂糖凝胶中 回收高分子质量的 DNA,从恒强电
人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析
实验目的: 1.熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经
人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析
实验目的: 1. 熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经苯酚
影响饲用酶制剂应用效果的因素有哪些?
1.酶制剂 1.1种类和活性 饲用酶制剂包括单一酶制剂和复合酶制剂,现在使用的多为复合酶制剂。一般来说,复合酶制剂比单一酶制剂效果好,但并不意味着复合酶制剂中酶种愈多愈好。复合酶制剂有两种,多数由几种单一酶混合调制而成,还有一种是由一种微生物产生含多种酶系的复合酶制剂,后者具有很好的发展前途,是
影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素
影响DNA分子在琼脂糖凝胶电泳仪中泳动度的因素有DNA分子性质、琼脂糖凝胶浓度、电场强度和缓冲液离子强度等。一、DNA分子性质:DNA分子性质包括DNA分子电荷数、大小和空间构型等。1、DNA分子电荷数:一般来说,分子的电荷密度越大,泳动度越大。但不同核酸分子的电荷密度大致相同,因此对泳动度影响不大
影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素
影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有DNA分子大小、DNA构象、凝胶浓度、琼脂糖种类、电泳缓冲液、嵌入染料的存在和使用电压等。一、DNA分子大小:DNA分子大小迁移速度与logN成反比(N为碱基对数目)。分子越大,摩擦力越大,同时大分子通过凝胶孔的效率低于较小的分子,所以大分子的迁移速度慢。
凝胶的分辨能力的影响因素
凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关,琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2~50kb,而聚丙烯酰胺凝胶的分辨能力要高一些,能够分辨较小分子质量的DNA片段,其分辨范围为1~1000bp。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小,浓度越高,孔隙越小,其分辨能力也就越强;反之,浓度降低,孔隙就增大,其分辨
凝胶电泳仪影响因素
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在
RNA琼脂糖变性胶电泳分析
一、原理RNA分子是以单链形式存在的,但在局部仍有双链结构形成。由于这种局部双链结构的干扰,使得在非变性凝胶上对RNA分子完整性的鉴定及其分子量大小的检测,变得不十分可靠。通过加入乙二醛一二甲基亚砜、氢氧化甲基汞、甲醛等变性剂进行变性处理,使其局部双链变为单链。再进行电泳,RNA的泳动距离与其片段大
恒温恒湿试验箱有哪些影响因素?
由于是温度保持不住,观察制冷压缩机在试验箱运行过程中是否能够启动压缩机在环境试验设备运行过程中都能够开启, 首先检查两组制冷机组的低级压缩机的排气和吸气压力都较正常值偏低而且吸气压力呈抽为放空状态,发现排气管路的温度不高吸气管路的温度也不低(未结霜)这也说明了主机组的制冷剂缺乏。 将恒温恒湿
涂镀层测厚仪精度的影响有哪些因素?
测量值精度的影响因素1.影响因素的有关说明a 基体金属磁性质磁性法测厚受基体金属磁性变化的影响(在实际应用中,低碳钢磁性的变化可以认为是轻微的),为了避免热处理和冷加工因素的影响,应使用与试件基体金属具有相同性质的标准片对仪器进行校准;亦可用待涂覆试件进行校准。b 基体金属电性质基体金属的电导率对测
影响拉力试验机精度有哪些因素
首先是拉力试验机的力值传感器,因为传感器的好坏决定了试验机的精度和测力稳定性,目前市场上的拉力机用传感器小力值一般用S型传感器,大力值一般用轮輻式传感器,传感器内部一般为电阻应变片式,如果应变片精度不高或固定应变片用的胶抗老化能力不好在或者传感器的材料不好都将影响传感器的精度和使用寿命。 其次就是驱
有哪些影响电子天平质量控制因素?
天平预热 天平的预热时间是保证天平示值稳定的关键。预热时间的长短除与天平的检定分度值和检定分度数有关,规程第 18 条规定天平检定前应预热 0.5h 以上,但 0.5h 以上多长的预热时间比较合适?这时就要根据各天平使用说明书上的要求,同时天平的预热和天平的精度有密切的关系。 电磁力平衡式传
影响比旋光度测定中的因素是有哪些?
比旋光度是旋光物质的特征物理常数。旋光性物质的旋光度和旋光方向可用旋光仪进行测定。当平面偏振光通过某种介质时,有的介质对偏振光没有作用,即透过介质的偏振光的偏振面保持不变。而有的介质却能使偏振光的偏振面发生旋转。这种能旋转偏振光的偏振面的性质叫做旋光性。具有旋光性的物质叫做旋光物质或光活性物质。
为什么琼脂糖凝胶电泳可以分离和鉴定核酸
可以,琼脂糖凝胶电泳可以通过限制性酶切多态性(rflp)或者扩增片断多态性(aflp)来鉴定检测的dna。就是不同dna被特定的限制性内切酶切出来的片断大小是不一样的,在琼脂糖凝胶电泳跑出来的条带也不一样,如果是相同的dna,结果就一样。
为什么琼脂糖凝胶电泳可以分离和鉴定核酸
可以,琼脂糖凝胶电泳可以通过限制性酶切多态性(rflp)或者扩增片断多态性(aflp)来鉴定检测的dna。就是不同dna被特定的限制性内切酶切出来的片断大小是不一样的,在琼脂糖凝胶电泳跑出来的条带也不一样,如果是相同的dna,结果就一样。
核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环 DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时,环状DNA(一般为球形)不能进入胶中,相对迁移率为0(Rm=0),而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进
琼脂糖凝胶电泳用哪种琼脂糖-DNA线性长度如何确定
线性DNA长度可以琼脂糖凝胶电泳来判断呀,这要看你的DNA是多大的了,如果是几KB的话,选择相应的Marker,跑电泳比对一下就知道大小了,如果是10KB以上的话,先用内切酶切,然后再跑电泳比对带型
琼脂糖凝胶电泳能解决哪些问题
所有核酸分子,dna和rna。只要分子量或者形态不同,如线性,开环,环形。它们在胶中移动速度不同,就可以区分开。可以与Marker对比估计分子量。浓度问题,我做时都是10mL1倍TAE,0.2克琼脂糖,1μL染料。
核酸分析技术有哪些
总的来说包括了核酸的分离、提纯,核酸的扩增,检测,定性与定量分析等。下面以DNA为例说一下相关的概念。1、DNA的分离提纯就那些试剂,那些步骤,网上一大堆视频的,自己去找吧。2、扩增一般指的是PCR,需提供引物(引物具有特异性,比如说乙肝病毒基因的引物只能扩增乙肝病毒基因)、酶、底物等,三个流程一个
核酸检测方法有哪些
核酸检测采用咽拭子检测,有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦,刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情,张口发出“啊——”的声音就可以了,检测过程并没有创伤风险,是非常安全的检测。检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉,不过这些不适症状通常只需要半分钟到
核酸内切酶的影响及因素
限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系,底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢,要使超螺旋构型DNA彻底降解,需要的酶量就大。对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用,Mol
核酸电泳—琼脂糖凝胶电泳的凝胶摄影和EB溶液的净化处理
1、琼脂糖凝胶电泳—凝胶摄影 需配置135照相机,全色135胶卷,照相机固定架,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。 操作需在暗室进行,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,装上红色滤光片,按常规拍照。 亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。 2、琼脂糖凝胶电泳—E