什么是DNA直接转化法

通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞,并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转化。如果外源DNA分子是病毒(噬菌体)的DNA或cDNA,那么把此过程也称为转染。(1)直接转化法:有的微生物细胞在不加任何处理的情况下就能直接摄取外源DNA,只要外源DNA与这样的细胞混合,在适宜的条件下悬浮培养,就能完成外源DNA的转化。(2)化合物诱导转化法:用二价阳离子(如Mgsuperscript2+superscript、Casuperscript2+superscript、Mnsuperscript2+superscript)处理某些受体细胞,可以使其成为感受态细胞,即处于能摄取外源DNA分子的生理状态的细胞。采用这种转化方法,1μg质粒DNA可以获得5×10superscript6superscript7×10superscript7superscript个被转化的菌落(转化子),这是实验室中常用于微生物的一种转化......阅读全文

中科院大化所:甲烷室温直接催化转化实现

  近日,中科院大连化学物理研究所催化基础国家重点实验室邓德会研究员和包信和院士带领的研究团队,在长期深入研究二维催化材料和纳米限域催化的基础上,发现石墨烯限域的单原子铁中心可以在室温条件下(25℃)直接将甲烷催化转化为高附加值的C1含氧化合物。相关研究结果发表于《化学》。  甲烷是天然气、页岩气、

瑞士开发甲烷直接转化甲醇新工艺取得进展

   甲烷是天然气的主要成分,甲烷可转化成甲醇作为燃料和基本化工原料,相对于气态的甲烷,液态的甲醇运输方便、安全性好,对天然气的综合利用具有很好的前景。目前虽已有工业化的甲烷转化甲醇工艺,但反应需要高温高压条件,并经过两步化学反应,生产装置体积大、结构复杂,生产成本高,而且过程中出现一氧化碳、二氧化

我国科学家发明病毒直接转化疫苗新技术

12月2日,国际顶级期刊《Science》发表了北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室主任周德敏教授/张礼和院士课题组的突破性研究进展,他们以流感病毒为模型,发明了人工控制病毒复制从而将病毒直接转化为疫苗的技术,该研究成果被称为是一种革命性或颠覆性的发现。周德敏博士生司龙龙和徐欢为该论

我所实现甲烷低温高效直接催化转化制甲酸

  近日,我所催化基础国家重点实验室二维材料与能源小分子转化创新特区研究组(05T6组)邓德会研究员和于良副研究员团队在甲烷低温转化制含氧化合物研究中取得新进展,发现ZSM-5孔道晶格限域的配位不饱和Fe位点可在温和条件下直接催化甲烷高效定向转化制甲酸。  甲烷是一种重要的化石能源,广泛存在于天然气

大连化物所实现甲烷低温高效直接催化转化制甲酸

  近日,中国科学院大连化学物理研究所催化基础国家重点实验室二维材料与能源小分子转化创新特区研究组研究员邓德会和副研究员于良团队在甲烷低温转化制含氧化合物研究中取得进展,发现ZSM-5孔道晶格限域的配位不饱和Fe位点可在温和条件下直接催化甲烷高效定向转化制甲酸。  甲烷是一种重要的化石能源,存在于天

瑞士开发甲烷直接转化甲醇新工艺取得进展

  甲烷是天然气的主要成分,甲烷可转化成甲醇作为燃料和基本化工原料,相对于气态的甲烷,液态的甲醇运输方便、安全性好,对天然气的综合利用具有很好的前景。目前虽已有工业化的甲烷转化甲醇工艺,但反应需要高温高压条件,并经过两步化学反应,生产装置体积大、结构复杂,生产成本高,而且过程中出现一氧化碳、二氧化碳

乙醇固定样品DNA-抽提和直接PCR

实验概要本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取DNA,并利用直接PCR进行了鉴定。实验原理在实际的研究工作中,野外取样的地点一旦较为偏远,受条件的限制,很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻;另外,对一些稀有物种和濒危种,鲜活样品的采集十分困难,一般为了解决这些问题,常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品,再对样

外源质粒DNA转化大肠杆菌

摘要: 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程

质粒DNA高频转化大肠杆菌实验

实验材料 感受态细胞试剂、试剂盒 质粒DNA抗生素仪器、耗材 Ep管水浴锅LB平板实验步骤 1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0.03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀,置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟,立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul L

如何提高DNA片段的转化率

一、克隆分析原理克隆分析用于将DNA片段从一个载体(质粒、黏粒或噬菌体)转移到另一个载体上。它们通常用于构建表达系统,或是将DNA片段转移到特殊的载体上以制备杂交探针或是制备测序用的单链模板。典型的载体含有三个必要的元件:一个抗生素抗性标记、一个复制起点(以便选择转化了的大肠杆菌宿主)以及一个或多个

重组DNA的转化和蓝白筛选

体外连接的重组DNA分子导入合适的受体细胞才能进行大量复制,增殖和表达,其首要目的是获得大量的克隆基因。虽然PCR技术,体外转录及翻译系统能部分达到大量扩增的目的,但毕竟受到体外操作的许多限制。重组质粒导入宿主细胞最常用的方法之一就是转化(transformation)。转化这一概念来源于遗传学:细

质粒dna的转化结果分析原理介绍

  转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受体细胞一般是限制修

质粒DNA的转化(CaCl2法)

实验原理受体细胞经过一些特殊方法如化学试剂法的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(即带有异源DNA分子的受体细

苏格兰男子DNA检测为地球首位女性直接后裔

72岁的老人伊恩·柯纳德是地球上出现的第一名女性的直接后裔。  据外电报道,近日苏格兰一名退休老人被告知,他是地球上出现的第一名女性的直接后裔。从遗传学的角度讲,全英国人恐怕都要管他叫“祖父”。  这名72岁的老人伊恩·柯纳德日前接受了一次基因检测,他的DNA测试结果让专家

脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收

低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 D

脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收

            实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。 实验材料

脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收

实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。实验材料 DNA 大小标准基因组 DNA试剂、试剂盒 溴化乙锭酚:氯仿仪器、耗材 水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液溴化

大肠杆菌质粒DNA的提取及转化

实验概要本实验包括大肠杆菌质粒DNA的提取,质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定,大肠秆菌感受态细胞的制备及质粒DNA高频转化大肠杆菌。实验步骤1. 大肠杆菌质粒DNA的提取碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:   1) 接1%含质

质粒DNA导入细菌细胞实验——电转化法

实验方法原理高压电转化简单,快捷可靠,而且是目前效率最高的质粒DNA转化大肠杆菌方法。不过该方法需要电转化装置。实验材料菌落试剂、试剂盒LB甘油SOC仪器、耗材平板离心瓶聚丙烯管电阻器电转化池实验步骤1.  接种一个单菌落于5 ml LB培养液,37°C温和振摇培养5 h或过夜。2.  将2.5 m

重组DNA的转化实验原理和操作步骤

实验目的制备出感受态细胞,把体外重组的DNA引入受体细胞,使受体菌具有新遗传性,并从中选择出转化子。实验原理感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态,只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA片段插入时,LacZ基因失活,转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和

美实验首次直接将鼠皮肤细胞转化为神经细胞

  新华网华盛顿1月27日电(记者任海军)美国斯坦福大学医学院研究人员27日宣布,他们在实验中绕过诱导多功能干细胞这一步骤,首次直接将实验鼠皮肤细胞转化为神经细胞。这项成果对理解细胞分化及再生医学研究均具有重要意义。   研究人员首先选择了19个与细胞重组或神经发展有关的基因,然后利用慢病毒将这些

合成气直接转化制低碳烯烃获重大突破

  低碳烯烃包括乙烯、丙烯、丁烯,被广泛用于生产塑料、纤维等,是重要的化工原料,也是现代化学工业的基石,传统上是通过石脑油裂解获得。由于我国富煤贫油少气,因此开发从煤、天然气、生物质等非石油的碳资源制备低碳烯烃的方法具有重要的战略意义。  合成气(CO和H2混合气体)是煤、天然气等碳资源转化利用的重

中国科学家用这项技术,将病毒直接转化为疫苗!

  美国东部时间12月1日,全球最大的科技新闻工作站SciPak向全球媒体发布,国际顶级期刊《科学》2日发表中国科学家题为《制备复制缺陷的活流感病毒疫苗》的研究进展,称发明了人工控制病毒复制,从而将病毒直接转化为疫苗的技术。这一发现颠覆了病毒疫苗研发的理念,成就了活病毒疫苗的重大突破。  该研究由北

美实验首次直接将鼠皮肤细胞转化为神经细胞

华盛顿1月27日电(记者任海军)斯坦福大学医学院研究人员27日宣布,他们在实验中绕过诱导多功能这一步骤,首次直接将实验鼠皮肤细胞转化为神经细胞。这项成果对理解细胞分化及再生医学研究均具有重要意义。 研究人员首先选择了19个与细胞重组或神经发展有关的,然后利用慢将这些基因植入来自实验鼠胚胎的皮肤细

Nat-Nanotechnol:DNA纳米结构可直接送药进肿瘤

          加拿大研究人员发现一种金纳米粒子组装方法,可作为运输工具直接将癌症治疗药物或识别标记传送入肿瘤中。此项研究成果发表在最新一期《自然—纳米技术》杂志上。   研究报告第一作者、多伦多大学生物材料和生物医学工程研究所(IBBME)博士研究生周佑廷在接受科技日报采访时说,要让药物进入

DNA修复技术碱基的直接插入过程介绍

DNA单链断裂是常见的损伤,其中一部分可仅由DNA连接酶(ligase)参与而完全修复。此酶在各类生物各种细胞中都普遍存在,修复反应容易进行。但双链断裂缺几乎不能修复。

癌基因转化细胞:基因组DNA转染法

实验概要 癌基因转化细胞实验步骤1.提取基因DNA(含癌基因)。2.DNA准备:取供体DNA50~100微克,加3M NaCl或醋酸钠使最终浓度至0.3M混匀。3.再加2倍体积无水乙醇,3000转/分离心10分钟,去上清。4.加入转染缓冲液,待DNA充分融解后,再加入2.5M CaCl2,令最终浓度

提高质粒DNA的转化效率方法有哪些

1.细胞生长状态和密度:不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌,最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好,可通过监测培养液的OD600来控制。DH5α菌株的OD600为0.5时,细胞密度在5×107个/ml左右(不同的菌株情况有所不

基因枪法转化小麦实验——DNA包裹金粉颗粒

实验材料BIO-RAD 亚微米金粉试剂、试剂盒无水乙醇TE 缓冲液亚精胺仪器、耗材离心管实验步骤1. 准备金粉颗粒( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中,加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min,短暂离心 3s,然后弃上清。重复用乙

将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化

实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇(DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪:如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽(