什么是DNA直接转化法

通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞,并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转化。如果外源DNA分子是病毒(噬菌体)的DNA或cDNA,那么把此过程也称为转染。(1)直接转化法:有的微生物细胞在不加任何处理的情况下就能直接摄取外源DNA,只要外源DNA与这样的细胞混合,在适宜的条件下悬浮培养,就能完成外源DNA的转化。(2)化合物诱导转化法:用二价阳离子(如Mgsuperscript2+superscript、Casuperscript2+superscript、Mnsuperscript2+superscript)处理某些受体细胞,可以使其成为感受态细胞,即处于能摄取外源DNA分子的生理状态的细胞。采用这种转化方法,1μg质粒DNA可以获得5×10superscript6superscript7×10superscript7superscript个被转化的菌落(转化子),这是实验室中常用于微生物的一种转化......阅读全文

什么是DNA直接转化法

通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞,并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转化。如果外源DNA分子是病毒(噬菌体)的DNA或cDNA,那么把此过程也称为转染。(1)直接转化法:有的微生物细胞在不加任何处理的情况下就能直接摄取外源DNA,只要外源DNA与这样的细胞混合,在适宜的

DNA转化

DNA转化Chemical Transformation·         Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method) (Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation inc

质粒的酵母直接转化

1.用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。2.将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA)。3.加0.5ml PLATE溶液,振荡。PL

质粒的酵母直接转化

实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌

重组DNA转化

目的:在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞,才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理:带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后,需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体

DNA的转化实验

体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术, 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中,DNA可在生物体系中大量扩增,繁殖, 保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术,所获得的,不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研,医药生产和生物

质粒DNA的转化

实验概要本实验将人Bcl-2重组质粒转化DH5α扩增菌,转化后在含Amp的培养基上进行筛选,生长的菌落即为含重组质粒的工程菌。含人Bcl-2重组质粒的DH5α菌用于质粒DNA的扩增,获得的质粒将作为限制性内切酶的酶切底物DNA。实验原理转化是将外源DNA分子导入到受体细胞,使之获得新的遗传特性的一种

质粒DNA的转化和染色体DNA的转化差异

质粒DNA的转化和染色体DNA的转化有显著的不同。在一般情况下前者的转化效率远远低于后者。但如果先用一定浓度的钙离子处理大肠杆菌细胞,再用质粒DNA和染色体DNA对它做转化实验则情况恰好相反。此外,质粒DNA很容易进入去掉了细胞壁的细菌的原生质体,说明对它的吸收并不通过专门的接受位点;质粒DNA的转

酵母菌落直接质粒转化法

酵母菌落直接质粒转化法1.用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。2.将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA)。3.加0.5ml PL

DNA转化实验指导4

2B.  Transformation 1.     Preparation of electrocompetent DH5a cells:  autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB.  Remove a 1 mL aliquo

DNA转化实验指导1

CONTENT Transformation-Competent E. coli preparation   Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol DNA Ligation an

DNA转化实验指导5

2C.  Notes on Transformation 1.     Bacto tryptone and yeast extract can cause allergic reactions. 2.     All containers used to handle the bacteria (

DNA转化实验指导2

1B.  Cloning 1.     A caveat on dephosphorylation: the most common reason for failure to obtain colonies is a result of adding too much BAP or CIP to

质粒-DNA-的转化实验

实验方法原理转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受体细胞一般

dna转化有哪些方式

DNA转化的范围较广,但以植物细胞中的转化为主,现将其方式及优点阐述如下:1、农杆菌介导基因转化:转化原理:农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有

质粒-DNA-的转化实验

实验方法原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受

耐药质粒DNA的转化

实验概要本实验介绍了将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆,即转化子。实验原理受体菌Ecoli RRI  在低温条件下经Ca   处理,可改变细胞膜的通透性,利于受体菌对DNA的摄取,这种经Ca   处理的细菌称感受态菌。pBR322  质粒带有氨基苄青霉素(Ap)和四

DNA转化实验指导3

6.     Simultaneous digestion of the pUC vector with both enzymes in the presence of 3 units of Shrimp Alkaline Phosphatase (Amersham BioSciences) in

耐药质粒-DNA转化实验

耐药质粒 DNA转化实验  本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆,即转化子。     【原理】  受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理,可改变细胞膜的通透性,利于受体菌对DNA的摄取,这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒

温室气体或可直接转化为燃料

  当前,温室气体排放造成的全球和局部气候变化,已成为全世界最关心的问题之一。如果有种技术能把温室气体直接转化为燃料,既满足能源需求,又解决了环境问题,那会怎样?犹他州大学生化学家兰斯·希菲尔德说:“那是当前科学研究的一座‘圣杯’。”   据物理学家组织网报道,最近,美国犹他州大学、弗吉尼亚理工大

直接从PCR产物回收纯化DNA

1)直接加90-100μl纯化缓冲液于1.5ml离心管,再加入30~300μl PCR反应物,Vortex混合;2)加入1ml树脂轻轻Vortex 3次,每次间隔1分钟;3)将取出拉杆的注射器筒(3ml)装在纯化柱上,加入上述DNA与树脂混合液,然后装上拉杆,慢慢将混合液推进纯化柱内;4)卸下注射器

DNA转化的过程方法介绍

中文名称DNA转化英文名称DNA transformation定  义将外源DNA分子导入原核细胞的过程。一般细菌很难接受外源DNA分子,可用适当的化学或物理方法处理细菌(如氯化钙法、电穿孔法等),使DNA分子容易进入细菌。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

甲烷转化新策略-温和条件下直接转化为液体燃料

  中国科学院上海硅酸盐研究所2月24日发布消息称,该所王文中研究员带领的科研团队在甲烷光催化转化研究方面取得新进展,提出了温和条件下甲烷向液体燃料直接转化的新策略。  光催化直接转化可以打破传统热力学平衡的束缚,使甲烷的转化可以在低温常压下进行。王文中研究团队设计并制备出铜修饰氮化碳材料,实现甲烷

用于PCR的模板DNA制备实验——直接法(DNA-免提法)

实验步骤1. 标本太少时,可将一张石蜡切片经脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。2. 加入 20~80 μl 直接裂解液中,加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2~1 μl,放置 55℃ 裂解 3 h 以上;100℃10 min 灭活蛋白酶 K;10000 r/min 离心 10

新技术实现将竹材直接转化为热固性塑料

近日,国家林业和草原局竹子研究开发中心(简称竹子中心)以竹代塑创新团队在“以竹代塑”新技术研究方面取得重要突破。研究团队利用竹材细胞壁定向活化与模压技术,成功将竹材直接加工成高强度、耐水以及可降解的全竹热固性塑料异形产品。该研究成果在材料科学期刊《美国化学会—纳米》(ACS Nano)上发表。国家林

Nature:实现不同种成体细胞间直接转化

美国研究人员在患糖尿病的老鼠身上做实验,将普通细胞转化成可分泌胰岛素的胰岛β细胞,减轻了病情。这一研究利用基因重组技术,实现不同种类成体细胞间直接转化,代表再生医学的重大进步。 试验 美国哈佛大学医学院和波士顿儿童医院研究人员开展了这项研究。 他们通过注射冷冻的普通腺病毒,把三种基因送入体内缺

多铁性材料可将热直接转化为电

  据美国物理学家组织网近日报道,从1824年开始,工程师们就已学会利用液体水和气体水之间的相变来发电。现在,美国科学家开始探索使用名为多铁性材料的金属合金发生“相变”来直接将热转化为电。  美国明尼苏达大学的理查德·詹姆斯领导的团队希望利用多铁性材料中自然出现的相变代替水的相变来发

恒温循环器助力DNA转化

生物学实验室日夜奋斗的小伙伴们,IKA为您们带来好消息啦!热激法转化大肠杆菌,大家一定不陌生:大肠杆菌在0℃ CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小

乙醇固定样品DNA-抽提和直接PCR

实验概要本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取DNA,并利用直接PCR进行了鉴定。实验原理在实际的研究工作中,野外取样的地点一旦较为偏远,受条件的限制,很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻;另外,对一些稀有物种和濒危种,鲜活样品的采集十分困难,一般为了解决这些问题,常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品,再对样

人皮肤细胞首次被直接转化为神经细胞

  美国哥伦比亚大学研究人员4日报告说,他们绕过了干细胞阶段,首次将人类皮肤细胞直接转化为功能正常的前脑神经细胞。有关研究成果当天发表在《细胞》杂志网络版上。   从上个世纪80年代开始,科学家就已意识到,具有全能性(即可以分化成所有不同种类的体细胞)且可以自我修复的胚胎干细胞将在再生医学领域扮演