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小分子荧光抑制剂实现酶高分辨成像的新方法

大连化物所复杂分子体系反应动力学研究组(1101组)韩克利研究员团队基于氨基甲酸酯母核的结构与功能关系,设计并发展了小分子抑制剂型荧光探针(SMI-probe),在重要的药物代谢酶羧酸酯酶(Carboxylesterases,CEs)的实时荧光高分辨检测中取得了良好的应用效果。由于抑制剂型探针分子NIC-4的分子结构简单,体积小,且具有针对CEs的超分辨响应灵敏度,因此在细胞原位检测中能够获得更加真实的成像效果,为亚细胞器层面的酶标记提供了新的设计思路与成功范例。 羧酸酯酶CEs是一类重要的水解酶,在外源性药物代谢过程中,其负责催化的酯水解过程,是包括伊立替康等在内的抗癌药物起效的关键激活步骤。此外,CEs在维持内源性脂质和糖代谢稳定中发挥着十分重要的作用。对CEs的原位实时荧光标记,是实现糖/脂代谢平衡深入理论研究及抗肿瘤药物应用效果监测的实践基础。传统的免疫荧光标记策略能够标记CE,但该方法操作复杂,依靠免疫级联反应实现的......阅读全文

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南 一、基本步骤: 1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对; 2、引物、探针的设计; 3、引物探针的合成; 4、反应体系的配制; 5、反应条件的设定; 6、反应体系和条件的优化; 7、荧光曲线和数据分析;

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

实时定量PCR应用中的优化方案(二)

实践中的问题实时定量PCR已广泛地运用于分子生物学的各个领域,就目前的应用情况来看,虽然取得了很好的效果,但是其在方法学上的选择、敏感性问题、重复性问题等都一直是争论不休的,本文将就这些问题做出探讨。1. 方法的选择:研究者在实验中往往想要得到目的基因的绝对量,因为绝对定量对目的基因的表达差异有直接

细菌学诊断新技术

 随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法

感染性疾病基因诊断进展

感染性疾病有病原微生物引起,致病的病原微生物主要有病毒、细菌、衣原体、支原体和螺旋体等。这些病原体的传统检测方法通常采用形态学检查,体外培养和免疫学试验。但对某些难以培养的病原体,抗原抗体检测不能判断体内病原体 DNA 或 RNAde 复制情况,或存在检测灵敏度低等问题。自聚合酶链反应( PCR )

ABI实时定量PCR常见问题

1.      定量PCR仪的开关机顺序是怎样的?    按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率。开机顺序:先开电脑,待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面

定量PCR常见问题(二)

8.      什么是背景校正?多长时间执行一次背景校正?    背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间,定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度

感染性疾病基因诊断进展(一)

  感染性疾病有病原微生物引起,致病的病原微生物主要有病毒、细菌、衣原体、支原体和螺旋体等。这些病原体的传统检测方法通常采用形态学检查,体外培养和免疫学试验。但对某些难以培养的病原体,抗原抗体检测不能判断体内病原体 DNA 或 RNAde 复制情况,或存在检测灵敏度低等问题。自聚合酶链反应( P

提出实现酶高分辨成像新方法

近日,中科院大连化学物理研究所研究员韩克利团队基于氨基甲酸酯母核的结构与功能关系,设计并发展了小分子抑制剂型荧光探针(SMI—probe),在重要的药物代谢酶羧酸酯酶(CEs)的实时荧光高分辨检测中取得了良好的应用效果。由于抑制剂型探针分子NIC—4的分子结构简单,体积小,且具有针对CEs的超分辨响

利用小分子荧光抑制剂实现酶高分辨成像的新方法

  近日,大连化物所复杂分子体系反应动力学研究组(1101组)韩克利研究员团队基于氨基甲酸酯母核的结构与功能关系,设计并发展了小分子抑制剂型荧光探针(SMI-probe),在重要的药物代谢酶羧酸酯酶(Carboxylesterases,CEs)的实时荧光高分辨检测中取得了良好的应用效果。由于抑制剂型

RT-PCR实验方法大全

RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单

31项与免疫学有关的分子生物学实验技术(二)

十二、大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)制备E.coli DH5α制备主要操作步骤:1)挑取受体菌(DH5或DH10B)的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);2)取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-30

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)简介

摘要对单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的研究分析近几年被广泛应用于生物及医学研究的诸多领域,筛查SNPs的方法很多,各具特色,并一直不断地发展.本文对筛查SNP的几种常用及最新方法做一简要介绍,其中包括PCR-RFLP,分子信标等.细胞外基质

荧光定量PCR在中医药研究中的应用

摘要:荧光定量PCR是一种新的核酸定量技术,该技术在PCR仪反应系统中引入了荧光标记探针,通过荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大的克服了原有PCR仪技术的不足,其最主要的优势是能对待测样本起

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

唐本忠团队:水溶性 AIEgen 用于生物成像与光动力治疗

  具有近红外区聚集诱导发光 (AIE) 特性和治疗诊断功能的水溶性 AIEgen(具有 AIE 性质的分子)一直是人们追求的目标,但前进的道路依然极具挑战性。近日,英国皇家化学会旗舰期刊 Chemical Science 发表了唐本忠院士团队(香港科技大学)与华南师范大学胡祥龙研究员、郑州大学第一

沙眼衣原体实验诊断技术进展

1907年,捷克学者Halberstaeder和Prowazek发现沙眼包涵体,1956年我国学者汤飞凡等分离沙眼衣原体成功,引起了全世界对其进行广泛深入的研究[1]。沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, Ct)与人类疾病关系密切,且目前已成为许多国家和地区常见的性传播疾

通过调控扭转分子内电荷转移设计高亮度和高敏感荧光团

  近日,我所分子探针与荧光成像研究组(1818组)徐兆超研究员团队与新加坡科技设计大学刘晓刚教授团队合作发表综述文章,总结了近年来通过调控扭转分子内电荷转移设计高亮度和高敏感荧光团的工作。  针对生物单分子检测和超高时空动态分辨荧光成像的前沿需求,设计高亮度、高光稳定和环境敏感的荧光染料是近年来的

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大,则指

细菌学诊断中的新技术

随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法,

定 量 PCR 技 术 简 介

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在是否

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400

季铵哌嗪如何实现荧光超分辨率成像?

  近年来,先进的荧光成像技术得到了快速的发展,但是与成像技术的治疗进化相比,具有足够亮度和光稳定性的染料的发展仍然缓慢,如单分子定位显微镜(SMLM),其分辨率超过了衍射极限。但是荧光团亮度不足成为了超分辨显微镜发展的一大瓶颈,这也对体内细胞动力学研究构成了重要的限制。比如罗丹明染料被广泛应用,但

JACS:季铵哌嗪取代罗丹明具有亮度增强的超分辨率成像

  近年来,先进的荧光成像技术得到了快速的发展,但是与成像技术的治疗进化相比,具有足够亮度和光稳定性的染料的发展仍然缓慢,如单分子定位显微镜(SMLM),其分辨率超过了衍射极限。但是荧光团亮度不足成为了超分辨显微镜发展的一大瓶颈,这也对体内细胞动力学研究构成了重要的限制。比如罗丹明染料被广泛应用,但

回顾2018:中国大陆在CNS发表的神经科学论文

  即将过去2018年,中国大陆学者在神经科学的基础、临床及技术方法等领域取得了丰硕的成果。  据不完全统计,以第一作者(含共同第一作者)单位或通讯作者(含共同通讯)单位在国际顶级期刊Cell、Nature和Science 即CNS发表以神经科学为主体的研究论文共计19篇。其中,论文第一作者单位和最