斑点ELISA法主要操作程序
⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜彻底干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色 加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定 以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应。......阅读全文
斑点ELISA法主要操作程序
⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜彻底干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30
斑点ELISA法的操作程序
常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置
斑点ELISA法的操作程序
与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面
间接ELISA法的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步骤① 加抗原包被 → 4
竞争ELISA法的操作程序
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面
阻断ELISA检测法操作程序
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤
阻断ELISA法的操作程序
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃
间接ELISA法的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步骤① 加抗原包被 → 4
竞争ELISA法的操作程序
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标
双夹心ELISA法的操作程序
此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（A
抗体捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，该方法的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→
双夹心ELISA法的操作程序
此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（A
抗体捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，该方法的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→
双抗体夹心ELISA法的操作程序
本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加
布ELISA法的主要程序
⑴ 首先把抗布氏杆菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌抗体，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；⑷ 加入底物液显色；⑸ 测定OD值。
间接ELISA的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下： ⑴ 材料 ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液； ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清； ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。 ⑵ 方
阻断ELISA的操作程序
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃
标记抗原捕捉ELISA法的主要程序
① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
斑点杂交（Dot－blot）法
斑点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot（Bio-Rad）和Hybri-Dot,它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下
ELISA试剂盒实验操作程序总结
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合elisa试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释
斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)
Hawkes等(1982)根据某些固相载体具有较强吸附蛋白质能力的特点，研究建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)，目前在医学及兽医工作中得以广泛应用。该试验以硝酸纤维素薄膜(NC)作固相载体，代替了聚苯乙烯反应板，从而克服了ELISA方法中包被好的酶标板保存运送不便及检测需仪器等缺点，
薄层色谱法操作程序
1原理：将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 2仪器与设备：玻板（除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm，20cm×20cm的规格）、定量毛细管或微量注射器、展开缸。 3试液与试剂：固
ELISA法
ELISA法是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。由于测定中需要酶标记抗原或抗体，酶分子与抗原或抗体分子的结合物可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。常用的ELISA分析1) 测定抗原A 将抗体吸附于固相表面，这个过程叫包被。B
痘苗DNA检测实验——斑点杂交法
实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒NaOHTris • Cl2×SSCPBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取缓冲液乙酸钠乙醇PCR 扩增缓冲液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培养基完全 MEM-10／BrdU
斑点印迹法的技术方法介绍
中文名称斑点印迹法英文名称dot blotting定 义将点状样品吸印到特定的膜上进行检测的方法。如用硝酸纤维素膜吸印固体培养基上的菌落或噬斑，在膜上原位裂菌或裂解噬菌体后，与特定的标记探针杂交，从而直接从转化的DNA文库或噬菌体文库中筛选所需要的克隆；将不同稀释度的蛋白质吸附在膜上进行显色反应，
胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用
ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用,特别是用于各型肝炎标志物的检测。但ELISA法由于操作程序复杂,时间较长,需要洗板机、酶标检测仪等贵重仪器。给实验室带来不便。ELISA法需时较长的主要原因,是由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应,不适当地缩短反应时间,将使灵敏度降
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
1、直接ELISA试剂盒本法首要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，直接ELISA的操作程序如下：(1) 资料① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参阅血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。