食物过敏原的检测和定量方法PCR多聚酶联反应法
PCR多聚酶联反应 以DNA为测试对象的检测方法越来越多地应用到外来食物的检测中，如转基因谷物等。PCR方法对食物中特定过敏原的检测具有专一性和灵敏度，但是，PCR方法不能检测抗原或特定蛋白，因此检测结果不能与食物的真正过敏性相关联，而且食品加工过程对蛋白和DNA的影响不同，在一些加工工序中蛋白和DNA可能被分离，因此产品中是否有过敏原，以PCR方法的检测结果作判断可能产生错误结论。PCR方法的优点在于，以DNA为测试对象的方法与以蛋白质为测试对象的方法相比，热变性条件下目标DNA可以有效提取而不象蛋白提取时受食物基质的影响较大；它的另一个优点是它的稳定性，它不象蛋白质组成那样受地理条件和季节变化的影响。 特定的DNA片段，侧链连接两个被热稳定的多聚酶化学修饰的低聚核苷酸作为测定反应的初始物，测定反应每一个修饰循环包括三个作用步骤。......阅读全文
食物过敏原的检测和定量方法PCR多聚酶联反应法
PCR多聚酶联反应 以DNA为测试对象的检测方法越来越多地应用到外来食物的检测中，如转基因谷物等。PCR方法对食物中特定过敏原的检测具有专一性和灵敏度，但是，PCR方法不能检测抗原或特定蛋白，因此检测结果不能与食物的真正过敏性相关联，而且食品加工过程对蛋白和DNA的影响不同，在一些加工工序
食物过敏原的检测和定量方法即时（realtime）PCR法
即时PCR方法与其他DNA定量方法相比，即时PCR方法需要昂贵的实验室设备，但准确度高，劳动强度低。即时PCR方法不用凝胶制品而使用特定目标的低聚核苷酸探子，因而实现即时分析。
食物过敏原的检测和定量方法－PCRELISA联用方法
PCR-ELISA联用方法是用特定的以DNA为基础的方法与相当方便和经济的ELISA测定方法结合用于半定量分析的分析方法。使用PCR-ELISA联用方法，致敏食物中特定的DNA片段被化学修饰，修饰物与特定的DNA探子标记的特定蛋白相结合，标记蛋白与特定的酶标记的抗体偶合，以酶-底物反应形成的颜
食物过敏原的检测和定量方法
RAST/EAST (radio-allergosorbent test/enzyme allergosorbent test） RAST/EAST主要应用于食物过敏的临床诊断，同时也应用于食物过敏原的定性检出以及多品种食物中潜在致敏性的评价。也有少量使用RAST法进行过敏原的定量检测的文
食物过敏原的检测和定量方法RIE
RIE （rocket immuno-electrophoresis） RIE使用含有凝胶的抗体，被分析的抗原按照自身的电泳能力在凝胶中移动直到抗体和抗原结合，所形成的电泳峰高与检测抗原量成比例。RIE法检测不同食品中的几种抗原的检测极限约为2.5-30 mgkg-1。该方法的局限是实验所需的
食物过敏原的检测和定量方法ELISA
ELISA （enzyme-linked immunosorbent assay） 现在ELISA是食品工业和政府食品管理部门进行食品中潜在过敏原检测和定性最常用的方法，用这种方法特定的蛋白或抗原可以与特定的酶标记的抗体键合后用显色反应来定性和定量，靠标准曲线来计算抗原的含量。 ELISA的
PCR－(多聚酶链反应)
【实验目的】掌握PCR技术的原理，学习PCR技术的基本方法，了解PCR技术的应用范围与意义。【实验原理】详见14章第2节。【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dN
多聚酶链式反应PCR
多聚酶链式反应PCR ：(1)PCR原理：在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。以欲扩增的DNA做为模板，以和模板正链和负链末端互补的两种寡聚核苷酸做为引物，经过模板DNA变性、模板引物复性结合、并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模
食物过敏原的检测和定量方法免疫印迹（IB）
免疫印迹（IB） （immunoblotting） 点式免疫印迹测试法主要用于简单或廉价食品样品的检测，提取的样品蛋白喷洒在硝化纤维膜或PVPF膜上，用特定的与目标抗原结合的抗体进行酶标记，酶与底物反应呈现出有颜色的斑点，斑点的深浅与抗原的含量成比例。这种方法是半定量测量方法，但对某些食物
PCR(多聚酶链反应)实验原理、方法步骤和注意事项
【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】 引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dNTP贮备液(商品化产品)；DNA模板(需扩增的 DNA)；双蒸水；矿物油；PCR反应管；微量移液器；离心机及PCR仪
食物过敏原的检测和定量方法－生物探测器
生物探测器 使用生物探测器是另一项还未普及应用到食品分析中的技术。生物探测器仪器可以即时测定特定分子之间的反应。把一个目标分子（可能是抗体（蛋白）或DNA片段）固定到传感器的表面，然后定量测定一个或两个分子间的键合反应。这种技术的特点是分析时间短、自动化程度高。生物探测器技术可以用来测定特
多聚酶链式反应技术（PCR技术）
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最
多聚酶链式反应技术（PCR技术）
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最
多聚酶链式反应技术（PCR技术）
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。 PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究
多聚酶链式反应技术（PCR技术）(2)
（2）反应增强剂：PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%～10%二甲基亚砜（DMSO）、5%～20%甘油、非离子去污剂、1.25%～10%甲酰胺和10～100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量，有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。（3）热启动PCR：如果PCR反应混合物置于低于Tm
多聚酶链式反应技术（PCR技术）(1)
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应
食物过敏原的检测方法
一、双盲食物激发试验：双盲食物激发试验为诊断食物过敏的金标准，主要用于以下情况：（1）几种食物同时被怀疑为过敏原且特异性IgE（sIgE）阳性，为减少患者禁食种类时可使用；（2）高度怀疑某一过敏物，但无sIgE抗体的证据，为进一步确定进食该食物的安全性时使用；（3）非IgE介导型食物过敏者多用该方法
酶联免疫法的检测方法
双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 三、加酶标抗
酶联免疫法的检测方法
双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 三、加酶标抗
免疫多聚酶链反应
实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上，再用PCR方法将这段DNA扩增，然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力，因而比常规的免疫学检测法，如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC
免疫多聚酶链反应
实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上，再用PCR方法将这段DNA扩增，然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力，因而比常规的免疫学检测法，如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC
食物过敏原的检测方法有哪些？
一、双盲食物激发试验： 双盲食物激发试验为诊断食物过敏的金标准，主要用于以下情况： （1）几种食物同时被怀疑为过敏原且特异性IgE（sIgE）阳性，为减少患者禁食种类时可使用； （2）高度怀疑某一过敏物，但无sIgE抗体的证据，为进一步确定进食该食物的安全性时使用； （3）非IgE介导型
食物过敏原的检测
历史上很少有像牛奶这样的食品与人类密切相关的。公元5千年前就有家养的奶牛了，而印度奶牛至今被奉为神明。牛奶的味道不仅好，而且它也是健康和营养的食品。实际上，作为最有价值的食品之一，牛奶含有构筑肌肉的健康蛋白质、强壮骨骼和牙齿的钙、促进消化的乳糖以及强大免疫系统的维他命。牛奶蛋白质由于其含有大量
多聚酶链式反应的原理
多聚酶 链式反应的原理类似于DNA的天然 复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡 核苷酸 引物，经 变性、退火和延伸若干个 循环后，DNA扩增2n倍。 1．变性：加热使模板DNA在 高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。 2．退火：使溶液温度降至
多聚酶链式反应(PCR)基因扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
一、 实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理，掌握PCR的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。二、 实验原理PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段，即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。基本原理及过程如下：PCR循环过程中有三种不同的事件发生：（1）模板变性；（2）引物退火；（3）热
食品过敏原的常见检测技术
1、免疫学检测技术 之前提到95%的食品过敏原属于蛋白质，因此专门针对蛋白检测的免疫学相关技术是检测食品中蛋白类过敏原的重要手段。其中免疫学检测包括免疫吸附技术、免疫层析技术、免疫传感器技术、免疫扩散技术以及免疫印迹等技术。 免疫吸附技术主要包括酶联免疫吸附技术和放射/酶联吸附抑制实验。酶联
食品过敏原的常见检测技术
免疫学检测技术 免疫吸附技术主要包括酶联免疫吸附技术和放射/酶联吸附抑制实验。酶联免疫技术是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化反应有机结合起来的一种检测技术，其原理是被酶标记的抗体与食品过敏原发生反应作用于底物后，其显色深浅能够反映待测样品中过敏原的含量。该技术特异性强，灵敏度高，操作简
食品中常见过敏原及检测技术研究进展
食物过敏是指过敏原蛋白引起的异常或过强的免疫反应，从免疫学机制而言，可以将食物过敏反应分为4 种类型，即：免疫球蛋白（Ig）E介导的I型超敏反应、II型细胞毒性超敏反应、III型免疫复合型超敏反应以及T细胞介导的迟发性超敏反应。目前可以从广义的角度将食物过敏分为IgE介导和非IgE介导两大类，其
PCR反应绝对定量和相对定量的差别？
绝对定量目的是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数，应用于taqman探针法检测。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数，应用于sybr green染料法检测。
实时定量PCR法对mRNA的检测、分析及定量的方法
方法：实时定量PCR目标RNA的类型：mRNA同时定量的目标RNA的数量：通常为一个，但也可检测多个目标RNA，参见Stanley和Szewczuk（2005）等的研究结果，他们在单个多重反应中同时分析过72个mRNA。用途：是检测目标RNA的一种高灵敏及高精度的方法。即使目标RNA在细胞中拷贝数极