揭示基因重组过程中关键酶错配容忍度差异机制
近日,中科院大连化学物理研究所研究员李国辉团队与清华大学教授王宏伟团队、陈春来团队合作,在揭示基因重组过程中关键酶错配容忍度差异机制研究中取得新进展。相关研究成果发表在《核酸研究》上。 同源重组是主要的DNA双链断裂修复机制,在真核细胞中主要的重组酶为Rad51和Dmc1。Rad51和Dmc1的序列虽然高度保守,但也存在差异,Rad51主要负责有丝分裂期间体细胞中的DNA修复,而Dmc1仅在生殖细胞减数分裂时起作用。这种差异可能是由它们在同源重组时错配容忍度决定的,Rad51在同源重组时不允许存在错配,而Dmc1的错配容忍度较高。 为了阐明上述错配容忍度差异的分子机理,王宏伟团队通过冷冻电镜技术,解析了处于不同状态下人源Rad51和酵母Dmc1与DNA的复合体结构。基于上述结构信息,李国辉团队进行了系统的分子动力学模拟,发现RAD51的Loop2区域中Val273和Asp274对应于DMC1的Pro274和Gly275......阅读全文
揭示基因重组过程中关键酶错配容忍度差异机制
近日,中科院大连化学物理研究所研究员李国辉团队与清华大学教授王宏伟团队、陈春来团队合作,在揭示基因重组过程中关键酶错配容忍度差异机制研究中取得新进展。相关研究成果发表在《核酸研究》上。 同源重组是主要的DNA双链断裂修复机制,在真核细胞中主要的重组酶为Rad51和Dmc1。Rad51和Dmc
基因组错配扫描的功能
中文名称基因组错配扫描英文名称genome mismatch scanning;GMS定 义从遗传背景有较大差异、但具有相同性状的两个不同个体基因组中筛查高度一致的DNA片段的技术。应用学科遗传学(一级学科),基因组学(二级学科)
基因重组胰蛋白酶与传统胰酶的消化对比
胰蛋白酶(Trypsin)是一种丝氨酸蛋白水解酶。其前体为无生物活性的胰蛋白酶原(trypsinogen),产生于胰脏。随胰液分泌到小肠中,被小肠中的肠肽酶激活后,能将蛋白质分解为多肽,进而分解成为氨基酸。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端。故在体外细胞培养中,胰蛋白酶被用于消化贴壁细胞
基因重组和DNA重组区别
基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。 在人类的生殖细胞中发现的46条染色体发生在生物体内基因的交换或重新组合。基因重组是生物遗传变异的一种机制,包括同源重组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类。DNA重组指DNA分子内或分子间发生的遗传
什么是重组酶?
中文名称重组酶英文名称recombinase定 义参与基因定位重组过程的酶。负责识别、切割特异的重组位点,并连接两个参与重组的分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
DNA-同源重组的关键分子机制
蛋白质与植物基因研究国家重点实验室研究团队揭示 DNA 同源重组的关键分子机制 作为三大DNA代谢途径(DNA 复制、重组、损伤修复)之一,DNA同源重组(Homologous Recombination)是生命体的基本生物事件。它在细胞生长、减数分裂、配子形成、物种进化、DNA双链断裂修复、
重组酶聚合酶扩增叙述
重组酶聚合酶扩增(RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37℃左右。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链D
DNA重组技术-酶切
实验概要 通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA实验原理 DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开,经分离纯化后,用链接酶将其连接,构成新的DNA分子。 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DN
RPA重组酶是什么?
2006 年,Piepenburg 等首次提出了重组酶聚合酶扩增反应(recombinase polymerase amplification,RPA)。它是由重组酶(T4 uvsX)、聚合酶(Bsu)和单链结合蛋白(gp32)以及两条特异性的上下游引物参与的等温扩增。 首先, T4 uvsX
什么是Cre重组酶?
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 [1] 。 Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种
关于基因重组的自然重组的介绍
自然界不同物种或个体之间的基因转移和重组是经常发生的,它是基因变异和物种进化的基础。自然界的基因转移的方式有: 接合作用:当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时,质粒DNA就可从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌),这种类型的DNA转移称为接合作用(conjugation )。 转化作用(
基因重组的定义
重组(recombination) 杂交后代的个体中出现了亲代所没有的基因组合的现象。
基因重组的分类
①基因的自由组合:减数分裂(减1后期)形成配子时,随着非同源染色体的自由组合,位于这些染色体上的非等位基因也自由组合。组合的结果可能产生与亲代基因型不同的个体。②基因的交叉互换:减Ⅰ四分体时期,同源染色体上(非姐妹染色单体)之间等位基因的交换。结果是导致染色单体上基因的重组,组合的结果可能产生与亲代
基因重组的简述
基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。1974年波兰斯吉巴尔斯基(Waclaw Szybalski)称基因重组为合成生物学,1978年他在《基因》期刊中写道:限制酶将带领我们进入合成生物学的新时代。
什么是基因重组
基因重组是造成基因型变化的核酸的交换过程,是生物体内细胞中DNA序列的改变。基因重组是在生物体进行有性生殖的过程中,控制不同性状的基因重新组合。基因重组一般发生在减数分裂过程中,包含两种情况,一种是减一后期同源染色体上的等位基因彼此分离,非同源染色体上的非等位基因彼此结合;另一种情况是联会时期的交叉
基因重组的应用——基因诊断
通过使用基因芯片分析人类基因组,可找出致病的遗传基因。癌症、糖尿病等,都是遗传基因缺陷引起的疾病。医学和生物学研究人员将能在数秒钟内鉴定出Z终会导致癌症等的突变基因。借助一小滴测试液,医生们能预测药物对病人的功效,可诊断出药物在ZL过程中的不良反应,还能当场鉴别出病人受到了何种细菌、病毒或其他微生物
基因重组应用——转基因技术
基因重组中转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学。基因片段的来源可以是提取特定生物体基因组中所需要的目的基因,也可以是人工合成指定序列的DNA片段。基因重组DNA片段被转入特定生物中,与其本身的基因组进行重组,再从重组体中进行数代的人工选育,从而获得具有稳定表现特定的遗传性状的个体。该技
基因重组和基因突变区别
1、基因突变是基因的从无到有,突变产生新基因。基因重组是原有基因的重新组合,产生的是新基因型。2、发生的时间:基因重组发生的时期是:减数分裂中四分体时期同源染色体的非姐妹染色单体之间的局部交换和减数diyi次分裂后期非同源染色体的而重新组合;基因突变发生的时间是在有丝分裂和减数分裂的间期。
基因重组和基因重排的区别
基因重排:通过基因的转座,DNA的断裂错接而使正常基因顺序发生改变。基因重排是一个基因内DNA排列发生改变,而使这个基因改变了,如出现新的基因就是靠这种方法基因重组: 是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。基因重组却是几个不同基因互相改变位置,而使的
基因重排与基因重组的区别
基因重排:通过基因的转座,DNA的断裂错接而使正常基因顺序发生改变基因重组: 是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。也就是说,,基因重排是一个基因内DNA排列发生改变,,而使这个基因改变了,如出现新的基因就是靠这种方法,而基因重组却是几个不同基因互相
什么酶重组等温扩增技术?
通过模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定重组酶、外切酶、聚合酶等多酶体系进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进行优化组合,从而获得核心的重组等温扩增体系,建立特殊扩增反应体系,在37-42℃恒温条件下,可将微量DNA/RNA的特异性区段在数分钟内扩增
重组质粒双酶切鉴定
既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题。 pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6
DNA重组技术:酶切、连接
实验原理: DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开,经分离纯化后,用链接酶将其连接,构成新的DNA分子。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。 5’…G↓A
重组克隆筛选(酶切鉴定)
【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理;2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统,其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说,重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入
重组酶聚合酶扩增(RPA)技术简介
核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA
化学错配裂解的概念
中文名称化学错配裂解英文名称chemical mismatch cleavage;CMC定 义一种测定基因突变的方法。即将同位素标记的野生型DNA分子和突变型DNA或RNA片段混合变性,复性时可形成DNA-DNA或DNA-RNA异源双链、化学修饰突变部位的错配碱基、氮杂环己烷裂解被修饰的DNA片段
什么是化学错配裂解?
中文名称化学错配裂解英文名称chemical mismatch cleavage;CMC定 义一种测定基因突变的方法。即将同位素标记的野生型DNA分子和突变型DNA或RNA片段混合变性,复性时可形成DNA-DNA或DNA-RNA异源双链、化学修饰突变部位的错配碱基、氮杂环己烷裂解被修饰的DNA片段
错配修复的概念
错配修复可校正DNA复制和重组过程中非同源染色体偶尔出现的DNA碱基错配,错配的碱基可被错配修复酶识别后进行修复。
错配修复的特点
错配修复(mismatch repair,MMR):在含有错配碱基的DNA分子中,使正常核苷酸序列恢复的修复方式;主要用来纠正DNA双螺旋上错配的碱基对错配修复的过程需要区分母链和子链,做到只切除子链上错误的核苷酸,而不会切除母链上本来就正常的核苷酸。
细胞化学词汇DNA错配
DNA错配是指DNA双链核酸分子中存在的非互补性碱基配对的现象,即一条链上的碱基与另一条链上相应的碱基不是互补的。DNA双螺旋结构中碱基之间的配对不是随意的,总是 腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)配对,鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)配对的原则。若出 现了 A与C或G配对,或T与G或C配对,也称为碱基错配。