常用DAN探针制备的方法介绍末端标记
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性而缺乏5'→3'外切酶活性的 Klenow 片段;具有5'→3'聚合酶活性和较强的3'→5'外切酶活性的 T4 DNA 聚合酶;具有催化 ATP 的磷酸转移到 DNA 或 RNA 5'-OH 末端的T4多核苷酸激酶;具有催化单链 DNA 或 RNA 5'-磷酸基团与单链 DNA 或 RNA 3'-羟基连接的 T4 RNA 连接酶等。采用化学方法将 RNA 3'端用过碘酸盐氧化,以一个二胺(或多胺)或细胞色素 c 为桥连接生物素,制备生物......阅读全文
酶最常用的纯化方法介绍
酶的纯化属于一种后处理工艺，包括粗制工艺与精制工艺，对超酶液进行浓缩精制是生产高质量酶制剂的重要环节。其提纯手段一般是依据酶的分析大小、形状、电荷性质、溶解度、专一结合位点等性质而建立。要得到纯酶,一般需要将各种方法联合使用。最常用的纯化方法有根据溶解度特性的沉淀法;根据电荷极性的离子交换层析、等电
常用的固相杂交方法介绍
常用的固相杂交方法有斑点杂交法、夹心杂交法和原位杂交法等。下面简单介绍几种常用的核酸分子固相杂交方法。①斑点杂交法（dot blot hybridization）：最常用的杂交模式．将样品DNA直接点在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，在严格的条件下杂交后进行检测。斑点杂交法简单、迅速，不需要限制性核酸内切酶
核酸探针标记
实验概要核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因
RNA标记
RNA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求： 1. 操作简单，灵敏度高 2. 不影响碱基配对的特异性 3. 不影响RN
Southern印迹杂交实验原理和方法3
真空转移法的最大优点是迅速，可在转膜的同时进行DNA变性与中和整个过程约需30～60分钟。但在操作中应注意两个问题，一是真空压力不能太大，若压力过大，凝胶被压缩，转移效率会降低；二是真空转移液要密封严，防止漏气影响压力的产生。下表列出了不同的印迹方法。表10－2 不同印迹方法的比较表五、探针标记用于
凝胶迁移实验中需要用到什么试剂？
凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe/sup系统
关于细胞凋亡检测—原位末端标记技术的基本介绍
细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位
分子杂交技术－－1
互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方
关于苯酚的制备方法的介绍
苯酚最早是从煤焦油回收，目前绝大部分是采用合成方法。到20世纪60年代中期，开始采用异丙苯法生产苯酚、丙酮的技术路线，已发展占世界苯酚产量的一半，目前采用该工艺生产的苯酚已占世界苯酚产量的90%以上。其他生产工艺有甲苯氯化法、氯苯法、磺化法。我国的生产方法有异丙苯法和磺化法两种。由于磺化法消耗大
一种原子力显微镜探针及其制备方法与流程
背景技术：传统的原子力显微镜探针是由微电子机械技术加工而成，其材料成分为硅或者氮化硅，其缺点是缺乏韧性，容易破损。本发明引入聚合物通过紫外固化、并引入金、镍纳米颗粒，使得探针既有一定硬度，亦有一定的韧性。技术实现要素：目的：为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一种原子力显微镜探针及其制备方法，既可以增
李峰团队发现蛋白质AIE纳米点光学探针制备方法
2001年，香港科技大学教授唐本忠团队发现了一种与传统聚集淬灭相反的现象，称为聚集诱导发光（aggregation-induced emission， AIE）现象，其主要原理是由于分子内运动受到限制，导致非辐射衰减渠道被抑制，辐射衰变增强而发光。与传统的有机染料相比，AIE荧光材料具有抗光漂白
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
基因探针的标记方法
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
SECM探针的清洗方法
1.快速循环伏安法 设置足够的阴极电位区间，在1M H2SO4溶液中做一个快速的循环伏安曲线，使金属表面循环吸氢放氢。同样地，如果电位区间是足够的阳极电位区间，铂表面会形成氧化层，然后在还原过程中会被清除。电位快速扫描将帮助清洁铂表面。典型的电位范围是-0.65VSCE~0.85VSCE
IL2质粒DNA探针制备的操作步骤
实验概要本实验介绍了IL-2质粒DNA探针制备的详细步骤。实验步骤1. 含IL-2质粒DNA探针的提取 1) 取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基(含100μg/ml Amp)，37℃ 220r/min 振摇过液(约16h )； 2) 取10ml菌液加200ml LB培
金相镶嵌机常用方法介绍
1．机械镶嵌法 机械镶嵌法系试样放在钢圈或小钢夹中，然后用螺钉和垫块加以固定。该方法操作简便，适合于镶嵌形状规则的试样。 2．树脂镶嵌法 树脂镶嵌法是利用树脂来镶嵌细小的金相试样，可以将任何形状的试样镶嵌成一定尺寸的试样。树脂镶嵌法可分为热压和浇注镶嵌法两类。 1）热压镶嵌法。热压镶嵌法（常
电泳分析常用方法介绍
(一)醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少
关于电子探针的定性分析方法介绍
1. 定点分析： 将电子束固定在要分析的微区上，用波谱仪分析时，改变分光晶体和探测器的位置，即可得到分析点的X射线谱线；用能谱仪分析时，几分钟内即可直接从荧光屏（或计算机）上得到微区内全部元素的谱线。 镁合金中的析出相CaMgSi的鉴别 Spectrum1 位置析出相富含Ca、Mg、Si元
介绍DNA探针的同位素标记方法
1.缺口平移法(nick translation)缺口平移法是最常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如
以大肠杆菌为材料探讨转基因植物检测的探针制备方法
以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液2μL,质粒 DNA10
关于薄膜蒸发制备方法的介绍
使液体形成薄膜而进行的蒸发叫作薄膜蒸发。薄膜蒸发能加速蒸发的原理是在减压条件下，液体形成薄膜而具有极大的汽化表面积，热量传播快而均匀，没有液体协压的影响， 能较好地防止物料过热现象。它具有使提取液受热温度低、时间短、蒸发速度快、可连续操作和缩短生产周期等优点。薄膜蒸发的进行方式有两种： 一是使浓
关于甘露糖的制备方法介绍
D-甘露糖可由富含D-甘露糖的聚糖（象牙棕榈子、酵母甘露聚糖等）水解制备。也可由D-甘露醇（海带制碘工业的副产品）在亚铁离子存在下,用过氧化氢氧化合成。也可由D-葡萄糖差向异构化,或由D-阿拉伯糖增长碳链等方法制备。
关于菜豆蛋白的制备方法介绍
1、从白芸豆中提取菜豆素； 2、用曲霉（Aspergillus sojae）为诱导剂，诱导红芸豆产生菜豆素； 3、从刺桐（Erythrina addisoniae）中分离得到； 4、采用功能性寡糖（例如壳寡糖、果胶寡糖、纤维二糖、褐藻酸寡糖等）作为诱导剂，激发芸豆生成菜豆素。
关于马尿酸的制备方法介绍
由苯甲酰氯与氨基乙酸在氢氧化钠溶液中反应得到苯酰氨基乙酸钠，然后用盐酸酸化制得。将氨基乙酸溶于氢氧化钠溶液中，在30℃以下同时滴入苯甲酰氯及氢氧化钠溶液，使反应液始终呈碱性。加毕，搅拌30min。然后加盐酸酸化至pH为2，滤出粗品，用水重结晶，得马尿酸。原料消耗定额：氨基乙酸（90%）610kg
薄荷醇的制备方法介绍
工业上从薄荷中提取薄荷油和薄荷脑采用水蒸汽蒸馏法和有机溶剂提取法，前者提取效率低，后者存在有机溶剂残留的毒性。采用超临界二氧化碳从薄荷中提取的薄荷脑（薄荷醇），则可消除上述两种方法所产生的弊端。其得率比水蒸汽蒸馏法约高5倍，比有机溶剂法约高3倍，产品保持纯天然特征，质量好，纯度高，无溶剂残留毒性，易
关于酪蛋白的制备方法介绍
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。可溶
催化剂的制备方法介绍
制造催化剂的每一种方法，实际上都是由一系列的操作单元组合而成。为了方便，人们把其中关键而具特色的操作单元的名称定为制造方法的名称。传统的方法有机械混合法、沉淀法、浸渍法、溶液蒸干法、热熔融法、浸溶法（沥滤法）、离子交换法等，现发展的新方法有化学键合法、纤维化法等。 1、机械混合法 将两种以
益母草碱的制备方法介绍
柱色谱法：硅胶柱色谱法是常用的方法，在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用是由于硅胶表面与溶质分子之间的范德华力、硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键产生作用，这种方法分离效果好，处理量大是天然产物提取有效成分的常用手段。张琳等应用硅胶柱色谱对益母草碱提取分离。 大孔吸附树脂法
概述γ氨酪酸的制备方法介绍
1993年有学者第一次通过化学合成的方法成功研制出了GABA。此后的相关研究日益丰富。为了获得更多的GABA，科研人员开始了各种尝试，并获得了诸多成果。 [2] 化学合成法 比较重要的化学合成主要有以下几种：第一种是采用邻苯二甲酰亚氨钾以及γ-氯丁氰或丁内酯作为制作GABA的原料，剧烈反应并
苯的制备方法介绍蒸汽裂解
蒸汽裂解是由乙烷、丙烷或丁烷等低分子烷烃以及石脑油、重柴油等石油组份生产烯烃的一种过程。其副产物之一裂解汽油富含苯，可以分馏出苯及其他各种成分。裂解汽油也可以与其他烃类混合作为汽油的添加剂。裂解汽油中苯大约有40-60%，同时还含有二烯烃以及苯乙烯等其他不饱和组份，这些杂质在贮存过程中易进一步反应生