常用DAN探针制备的方法介绍末端标记

末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性而缺乏5'→3'外切酶活性的 Klenow 片段;具有5'→3'聚合酶活性和较强的3'→5'外切酶活性的 T4 DNA 聚合酶;具有催化 ATP 的磷酸转移到 DNA 或 RNA 5'-OH 末端的T4多核苷酸激酶;具有催化单链 DNA 或 RNA 5'-磷酸基团与单链 DNA 或 RNA 3'-羟基连接的 T4 RNA 连接酶等。采用化学方法将 RNA 3'端用过碘酸盐氧化,以一个二胺(或多胺)或细胞色素 c 为桥连接生物素,制备生物......阅读全文

融合基因的制备方法介绍

1、进行目的基因的克隆:根据基因序列互补原则,设计合适的引物序列,以cDNA为模板,利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。2、在载体中进行重组:通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收,然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接,并克隆到高表达质粒载体中,构建重组质粒。3、

硝酸铝的制备方法介绍

一种硝酸铝的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:将煤矸石破碎成细小颗粒,与盐酸溶液以1:2.15的质量比反应于耐腐蚀容器中;过滤由所述煤矸石与盐酸溶液生成的氯化铝、氯化铁及少量的氯化物混合溶液,得到滤饼及滤液,并将所述滤液用氢氧化铝进行净化,产生氯化铝及氢氧化物沉淀;过滤所述用氢氧化铝净化的

乙醇酸的制备方法介绍

  1. 由氯乙酸与氢氧化钠反应,在硫酸作用下,用甲醇酯化,再水解,经减压蒸馏回收甲醇得到羟基乙酸成品。   2. 用甲醛和氧化碳在硫酸或三氟化硼等酸性催化剂存在下,在约70MPa的压力和160-200℃高温条件下,缩合生成羟基乙酸。

卵磷脂的制备方法介绍

卵磷脂生产一般采用以下几种工艺:乙醇萃取:原理是卵磷脂溶于乙醇,其他磷脂:脑磷脂、肌醇磷脂不溶于乙醇。层柱析法:原理是吸附剂对脑磷脂、肌醇磷脂、卵磷脂的吸附能力不同。Co2超临界萃取:原理是超临界点Co2与卵磷脂异常平衡行为和传递性能。在改变温度和压力的情况下分离出不同组分。膜分离法:原理是利用不同

脂质体的制备方法介绍

注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。

酶的制备主要方法介绍

酶的制备主要有2种方法,即直接提取法和微生物发酵生产法。早期的酶制剂是以动植物作为原料,从中直接提取的。由于动植物生长周期长,又受地理、气候和季节等因素的影响,因此原料的来源受到了限制,不适于大规模的工业生产。目前生产上应用的酶制剂中,虽然动、植物来源的酶制剂还在发挥着不可忽视的作用,占很少的一部分

关于吲哚的制备方法介绍

  吲哚及其同系物可用多种方法合成,其中以费歇尔合成法最普遍,它是用酮或醛的芳香腙在酸性条件作用,发生重排反应而制成。在这一反应中,所用的酮必须有一个一级碳原子与羰基相连,才能得到吲哚。简易制法:可由煤焦油的220℃~260℃馏分分出,或由靛红用锌粉还原而制得。

融合蛋白的制备方法介绍

基于重复结构的融合蛋白大多为短肽,不具有复杂的空间结构,因此只需简单的多肽合成过程即可获得目标蛋白。由单个氨基酸合成多肽主要通过两个氨基酸之间脱水形成肽键来实现,主要包括以下基本步骤:首先对两性离子结构的氨基酸进行相应的氨基或羧基保护,其次将羧基活化为活性中间体,待耦合过程结束后,对肽链上氨基酸的保

关于甲萘醌的制备方法介绍

  维生素K3的制备方法:以邻甲基萘醌为原料,经氧化、加成而得。  1、甲基萘用铬酐氧化  将2-甲基萘溶解于冰醋酸中,搅拌冷却到40℃以下,缓缓加入铬酐与等量水的混和液,使温度维持在35-40℃。加毕,在40℃保温0.5h,升温到70℃保温45min,再升温到85℃保温15min,将反应物倾入大量

亮氨酸的制备方法介绍

氨基酸的制造是从1820年水解蛋白质开始的。1908年日本人Ikeda发现谷氨酸钠是鲜味的强化剂,开始了工业化生产氨基酸的历史。1957年日本开始运用微生物进行谷氨酸发酵生产,从此揭开了微生物发酵方法生产氨基酸的历史新篇章。20世纪六十年代左右,关于L一亮氨酸生物合成以及其代谢调节机制相继阐明。这为

淀粉水解的制备方法介绍

  1、酸解法  以酸(无机酸或有机酸)为催化剂,在高温高压下将淀粉水解转化为葡萄糖的方法。  优点:  生产简易,由淀粉逐步水解为葡萄糖的整个化学反应过程,仅在一个高压容器内进行,水解时间短,设备生产能力大。  如采用10oBe`浓度淀粉,在0.294 Mpa压力下需20min;在0.343 Mp

甘露糖的制备方法介绍

  甘露糖,是一种有机化合物,分子式为C6H12O6,分子量为180.156,无色或白色结晶粉末。是一种糖类,在人体代谢过程中,尤其在特定蛋白的糖基化过程中起到重要作用。  D-甘露糖可由富含D-甘露糖的聚糖(象牙棕榈子、酵母甘露聚糖等)水解制备。也可由D-甘露醇(海带制碘工业的副产品)在亚铁离子存

月桂酸的制备方法介绍

1.工业生产方法可归纳为两类:一是从天然植物油脂经过皂化或高温高压下分解得到;二是从合成脂肪酸中分离。日本主要以椰子油和棕榈核仁油为原料制取月桂酸。用来制取十二酸的天然植物油有:椰子油、山苍子核仁油、棕榈核仁油及山胡椒仁油等。其他植物中,如棕仁油、擦树籽油、樟树籽油等亦可服务业制取十二酸。提取十二酸

亮氨酸的制备方法介绍

氨基酸的制造是从1820年水解蛋白质开始的。1908年日本人Ikeda发现谷氨酸钠是鲜味的强化剂,开始了工业化生产氨基酸的历史。1957年日本开始运用微生物进行谷氨酸发酵生产,从此揭开了微生物发酵方法生产氨基酸的历史新篇章。20世纪六十年代左右,关于L一亮氨酸生物合成以及其代谢调节机制相继阐明。这为

关于咪唑的制备方法介绍

  1、由乙二醛经环合、中和而得。将乙二醛、甲醛、硫酸铵投入反应锅,搅拌加热至85-88℃,保温4h。冷至50-60℃,用石灰水中和至pH为10以上。加热至85-90℃,排氨1h以上,稍冷,过滤,滤饼用热水洗涤,滤液减压浓缩至无水蒸出时,继续减压蒸馏至低沸物全部蒸完,收集105-160℃(0.133

关于乙炔的制备方法介绍

  1、电石法  由电石(碳化钙)与水作用制得。  实验室中常用电石跟水反应制取乙炔。与水的反应是相当激烈的,可用分液漏斗控制加水量以调节出气速度。也可以用饱和食盐水。  原理:电石发生水解反应,生成乙炔。装置:烧瓶和分液漏斗(不能使用启普发生器)。烧瓶口要放棉花,以防止泡沫溢出。  试剂:电石(C

随机引物法介绍DNA探针的标记方法

变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段,作为引物,当后者与单链DNA多个部位互补结合后,按碱基互补原则不断在其3'-OH端添加同位素标记的单核苷酸,这样也可以获得放射性比活性很高的DNA探针。

电子探针显微分析的方法介绍

  电子探针分析有两种基本分析方法:定性分析和定量分析。  (1)定性分析  定性分析是对试样某一选定点(区域) 进行定性成分分析,以确定点区域内存在的元素。  定性分析的原理:用光学显微镜或在荧光屏显示的图像上选定需要分析的点,使聚焦电子束照射在该点上,激发该点试样元素的特征X射线。用X射线谱仪探

探针台的使用方法相关介绍

  1.将样品载入真空卡盘,开启真空阀门控制开关,使样品安全且牢固地吸附在卡盘上。  2.使用卡盘X轴/Y轴控制旋钮移动卡盘平台,在显微镜低倍物镜聚焦下看清楚样品。  3.显微镜切换为高倍率物镜,在大倍率下找到待测点,再微调显微镜聚焦和样品x-y,将影像调节清晰,带测点在显微镜视场中心。  4.待测

滴丸制备的常用载体有哪些

(1)水溶性:聚乙二醇(PEG) 类,以PEG4000或6000为宜。它们的熔点低(55-60℃),毒性较低,化学性质稳定(在100℃以上才分解)。能与多数药物配伍,具有良好的水溶性,亦能溶于多种有机溶剂,能使难溶性药物以分子状态分散于载体中。在溶剂蒸发过程中,粘度逐渐增大,可阻止药物分子聚集。(2

常用试剂的性质与制备纯化

常用试剂的性质与制备纯化有机化学实验经常用到大量的试剂,包括无机试剂和有机试剂,市售的试剂有分析纯(A.R)、化学纯(C.P)、工业级(T.P)等级别,其中分析纯的纯度较高,工业级则带有较多的杂质。在某些有机反应中,对试剂或溶剂的要求较高,即使微量的杂质或水分的存在,也会对反应的速率、产率和产品纯度

离子探针方法

离子探针方法是将质谱测定技术与离子发射显微镜技术相结合的现代仪器分析方法。能提供一般质谱分析所不能提供的试样微区质谱。由于它能对固体物质作微区、微量及深度成分分析,在某些条件下检测灵敏度可达ppb数量级,因此被广泛地应用于半导体、冶金、地质和生物研究等部门。其原理是利用聚焦的高能一次离子束轰击试样表

核酸探针标记的简介

  核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。

应用激酶交换反应的末端标记

应用激酶交换反应的末端标记1.在置冰浴中的1.5ml微量离心管内依次加入:50 pmol合成寡核苷酸2.5μl 10×反应缓冲液1.5μl ADP(300μmol/L终浓度)10μl γ-[32P]ATP(33pmol)1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)蒸馏水加至25μl2.37℃水浴温育30分

常用的电泳分析方法介绍

常用的电泳分析方法主要有:醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳、毛细管电泳。

关于针刺活检的常用方法介绍

  ①穿刺抽吸活检:适用于具有一定体积,表面有正常组织覆盖的实性肿瘤。临床多用空注射器刺入瘤体,然后回抽注射器芯,造成负压,将瘤组织碎屑吸入空针内,将此微量组织涂于载玻片上,经细胞室医生进行固定、染色等处理,在显微镜下观察作出诊断。其操作简便、安全、无需麻醉,对恶性肿瘤的诊断符合率达80%以上。  

色谱柱的常用填充方法介绍

固定相填充的好坏,将直接影响柱效率。通常多用泵抽填充法,即把色谱柱的一端塞上玻璃棉,接真空泵,另一端接一漏斗,在抽吸下加入固定相,边装边敲打色谱柱,至固定相不再进入为止。装好后,塞上玻璃棉。装柱要求要填充得均匀,紧密,切忌有空隙。

关于针刺活检的常用方法介绍

  针刺活检的全称叫针刺活组织检查,系指从身体取活组织进行病理形态学检查,即在显微镜下观察细胞形态及细胞之间的关系。  ①穿刺抽吸活检:适用于具有一定体积,表面有正常组织覆盖的实性肿瘤。临床多用空注射器刺入瘤体,然后回抽注射器芯,造成负压,将瘤组织碎屑吸入空针内,将此微量组织涂于载玻片上,经细胞室医

常用的几种细胞破碎方法介绍

细胞破碎方法简述   随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质,必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一

检测环境雌酮的常用方法介绍

检测环境雌酮的常用方法为仪器分析法,主要包括气相色谱法、气质联用法、液相色谱法、高效液相法等。这些方法虽然灵敏度高, 操作简便,但需要昂贵的专门设备, 且样品的前处理操作较繁琐, 单个样品的检测时间很长, 不能快速提供检测结果, 因此寻找灵敏度高、快速简便、费用低的检测方法对样品粗筛、现场检测、临床