常用DAN探针制备的方法介绍末端标记
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性而缺乏5'→3'外切酶活性的 Klenow 片段;具有5'→3'聚合酶活性和较强的3'→5'外切酶活性的 T4 DNA 聚合酶;具有催化 ATP 的磷酸转移到 DNA 或 RNA 5'-OH 末端的T4多核苷酸激酶;具有催化单链 DNA 或 RNA 5'-磷酸基团与单链 DNA 或 RNA 3'-羟基连接的 T4 RNA 连接酶等。采用化学方法将 RNA 3'端用过碘酸盐氧化,以一个二胺(或多胺)或细胞色素 c 为桥连接生物素,制备生物......阅读全文
原子力显微镜探针、原子力显微镜及探针的制备方法
原子力显微镜探针、原子力显微镜及探针的制备方法。原子力显微镜探针包括探针本体和设置在探针本体的针尖一侧的接触体，接触体具有连接段和接触段，接触段具有接触端面；接触段为二维材料，且接触端面为原子级光滑且平整的单晶界面。本发明ZL技术的原子力显微镜探针可精确地检测受测样品的各种性质。介绍随着微米纳米科学
基因探针的标记方法介绍
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
关于探针标记方法的介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同时在3´；端修复加入被标记核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀，多用于大分
基因探针的标记方法介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同时在3´端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分子DNA标记,(>100
流式细胞术常用样品的制备方法
实验概要流式细胞术的实验检测对象是单细胞悬液，因此，在组织化学和免疫组织化学实验中欲对待测样品细胞进行分类计数，也需把样品制备成细胞悬液，并要求被检细胞大小为0.2～80pm，每个样品中至少有20 000个细胞，细胞浓度为105～107个／ml。制备成的单细胞悬液经荧光或免疫荧光标记即可上机检测。本
实验常用试剂的几种制备与储藏方法
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸
常用来制备胶体金颗粒的方法
1．枸橼酸三钠还原法（1）10nm胶体金粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸橼酸三钠水溶液3ml，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色。（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸橼酸三钠水溶液2ml，加热煮沸15min～30m
DNA探针标记常用试剂的配制
（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。 （2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl,pH7.4； 11mmol/L
扫描电镜生物样品常用制备方法
扫描电镜在观察生物样品时，具有以下特点：多角度观察样品的表面结构；不需要将样品切成薄片；景深大、图像立体感强；放大倍数从几十倍到几十万倍连续可调；在观察形貌的同时可以对微区的成分进行定量和定性分析。而能否获得真实、清晰、理想的扫描电镜观察结果，样品的制备过程是关键。 生物样品含水直接观察，会对扫描电
末端标记的定义
定义1：如借助多核苷酸激酶将ATP的γ位32PO4基团或克列诺酶将生物素标记的单核苷酸加到核酸的末端，以供作示踪检测等。定义2：在DNA或RNA链末端(3'或5'端)添加放射性或其他可检测的标记。
地高辛标记RNA常用的方法介绍
地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶T7、SP6经体外转录合成标记RNA。此法多用于RNA探针的制备，一般每20~25个核苷酸可引入一个地高辛分子。5'末端标记法5'末端标记法是通过化学
关于基因探针标记的方法介绍
探针的标记方式有放射性标记和非放射性标记。标记物质有放射性元素（如32P等）和非放射性物质（如生物素、地高辛等）。32P是最常用的核苷酸标记同位素，被标记的dNTP本身就带有磷酸基团，便于标记。特点是比活性高，可达9000Ci/mmol；发射的β射线能量高。用它标记的探针自显影时间短，灵敏度高。
探针标记方法的主要类型介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同时在3´端修复加入被标记核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀，多用于大分子DNA标记，(>1000b
DNA基因探针的克隆方法介绍
对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质，然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列，然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选，阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所
PCR扩增制备带标记探针
实验概要用标记脱氧单核苷酸部分代替PCR反应体系中的脱氧核苷酸（一般是带标记的dUTP代替dTTP），经PCR扩增后标记基团随机搀入扩增产物－DNA探针中。这样使探针浓度高，可检测标记基团量多，灵敏度高，与缺口平移法制备探针相比，具有方便简捷的特点，并且由于具高灵敏度因此在检测低丰度，低拷贝数的目的
生物大分子制备常用的样品浓缩方法
1、减压加温蒸发浓缩通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 2、空气流动蒸发浓缩空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液，表面不断通过空气流；或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室，用电扇对准吹风，使透过膜外的溶剂不沁
目前六种常用纯化制备纯水的方法
一、离子交换法离子交换法是以圆球形树脂（离子交换树脂）过滤原水，水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透（RO）处理之前，先将水质硬度降低的一种前处理程序。软化机里面的球状树脂，以两个钠离子交换一个钙离子或镁离子的方式来软化水质。
LSCM常用的检测内容及其荧光探针
胞内游离钙 共聚焦激光扫描显微镜常用的有Fluo-3、Rhod-1、Indo-1、Fura-2等，前两者为单波长激光探针，利用其单波长激发特点可直接测量细胞内Ca2+动态变化，为钙定性探针；后两者为双波长激发探针，利用其双波长激发特点和比率技术，能定量细胞内i，为钙定量探针。定量细胞内[Ca2+]i
标记抗体、配体等常用的荧光探针
标记抗体、配体等常用的荧光探针 共聚焦激光扫描显微镜不仅可用免疫荧光分析固定的细胞或组织切片，还可用于分析活细胞，得到特异性抗体或其他荧光免疫探针识别靶分子的表达、定位、分布变化等信息。标记抗体、配体或蛋白质等较通用的有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate，FITC
常用的灭菌方法介绍
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类：即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料
常用的脱气方法介绍
1.抽真空脱气法：此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。2.吹氦脱气法：利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液
扫描电镜生物样品制备常用干燥方法
1. 自然干燥法 自然干燥法是指样品中的水分在大气中自然蒸发，或样品经脱水处理后脱水剂自然挥发而干燥的方法。 对干种子、果壳、某些干花粉、昆虫标本等来说，自然干燥法是一个简易实用有效的方法，虽然在自然干燥过程中，样品体积有所收缩，但却保留了样品的基本形态。适用于外表坚硬的样品，如外表有壳的昆虫，木材
常用样品制备技术
色谱样品采集后要尽快的制备成适合色谱分析的样品，以便进行色谱分析。适合色谱分析的样品是指制备好的样品能满足：①所选用色谱柱的进样要求；②所选用色谱方法的分离能力（即能将欲测组分和其他组分分离开，如分离不开，则要进行预分离）；③所选用色谱方法的检测能力。样品制备就是采用一些物理化学的方法去处理采集到的
关于cDNA文库的筛选鉴定的介绍
1．核酸杂交 是最常用，最可靠的方法之一，可大规模地分析文库的克隆子。 1．同源探针：至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列，常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆。 2．部分同源探针：探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列相关但不相同，常用于克隆家族基因。 3．总cDNA
常用层析方法介绍
◆吸附层析吸附剂的吸附力强弱，是由能否有效地接受或供给电子，或提供和接受活泼氢来决定。被吸附物的化学结构如与吸附剂有相似的电子特性，吸附就更牢固。常用吸附剂的吸附力的强弱顺序为：活性炭、氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙、磷酸钙、石膏、纤维素、淀粉和糖等。以活性炭的吸附力最强。吸附剂在使用前须先用加热脱水
常用采样方法介绍
1、三层五点法：按堆形和面积大小采用分区设点，或按食品堆高度采用分层采样、分区设点，每区面积不超过50m2，各设中心四角共五点；区数在两个以上的两区界线上的两个点为共有点。将样品分为上、中、下三层，在各层的四角和中间各取等量样本混合后，再取检验所需样本。2、刮涂法：在酒精灯火焰下燃烧灭菌的小刀（放凉
常用浓缩方法介绍
在一些实验中，一些被测物经分离、净化后，样液的量比较多，被测定成分含量极其微小。例如痕量测定实验，在测定前需要浓缩样液，提高浓度，这样能提高分析的灵敏度。但是存在于这些被测物中的污染物存在性质不稳定，易氧化分解，浓缩过程一定应注意防止氧化分解，尤其是在浓缩至近干的时候，极易发生氧化、分解，这时需要在
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
生物素酰化探针的制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤 1. 混合以下物质于100 μl 反应体积：（1）10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液（2）10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器