常用DAN探针制备的方法介绍末端标记
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性而缺乏5'→3'外切酶活性的 Klenow 片段;具有5'→3'聚合酶活性和较强的3'→5'外切酶活性的 T4 DNA 聚合酶;具有催化 ATP 的磷酸转移到 DNA 或 RNA 5'-OH 末端的T4多核苷酸激酶;具有催化单链 DNA 或 RNA 5'-磷酸基团与单链 DNA 或 RNA 3'-羟基连接的 T4 RNA 连接酶等。采用化学方法将 RNA 3'端用过碘酸盐氧化,以一个二胺(或多胺)或细胞色素 c 为桥连接生物素,制备生物......阅读全文
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
生物素酰化探针的制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤 1. 混合以下物质于100 μl 反应体积：（1）10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液（2）10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
高地辛标记的DNA探针制备实验
基本方法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
荧光原位杂交（FISH）探针的制备
实验概要本实验介绍了荧光原位杂交（FISH）探针的制备原理及技术。实验原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和
核苷的制备方法介绍
核苷可从水解核酸来制备。用吡啶水溶液、氧化铝或酶促水解核糖核酸RNA，可得到核糖核苷；用氧化铝或酶水解脱氧核糖核酸DNA可得到脱氧核糖核苷。核苷也可用化学方法合成。适当保护的核糖或脱氧核糖与碱基衍生物缩合，可得到相应的核糖核苷和脱氧核糖核苷。或在糖的C1上先形成碳－氮和碳－碳键，然后闭环成杂环碱基而
siRNA的制备方法介绍
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
硅酸的制备方法介绍
实验室制法实验室采用水玻璃（硅酸钠水溶液）和盐酸反应或者硅酸钠和二氧化碳和水反应制得硅酸胶体。 化学方程式：Na2SiO3+2HCl=2NaCl+H2SiO3↓电离平衡常数：K1=2.2*10-10(30℃)工业制法1、盐酸法将细孔球形硅胶用盐酸浸泡4～6h后用纯水洗涤，烘干72h以上，用纯水洗涤后
肽的制备方法介绍
传统法主要有：微生物发酵法、酸法、碱法、电法、人工嫁接法、基因表达法、酶解法等。·微生物发酵法：微生物发酵法的生产工艺技术主要是通过现代微生物发酵技术将大分子球蛋白转化为小分子肽，通过控制微生物的代谢和发酵条件可生产不同氨基酸排序和分子量不同的肽。在发酵过程中，产生的游离氨基酸被微生物再次吸收利用，
分子杂交技术（二）
四、核酸探针的标记和检测 分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是
分子杂交技术（二）
四、核酸探针的标记和检测 分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是
选择合适的标记方法
地高辛（DIG）产品选择指南——选择合适的标记方法标记DNA探针如果您有足够量的高纯度模板，建议您采用随机引物标记方法的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I 和II。这两个试剂盒包含了标记、封闭、杂交和检测所需要的所有试剂，是
常用的物质分离方法介绍
1、分液：分离两种不互溶的液体，如分离油和水。2、萃取：加入适当溶剂把混合物中某成分溶解及分离，如庚烷、取水溶液中的碘。3、蒸馏：溶液中分离溶剂和非挥发性溶质，如海水中取得纯水。4、分馏：离两种互溶而沸点差别较大的液体，如液态空气中分离氧和氮、石油的精炼。5、升华：离两种固体,其中只有一种可以升华，
基因转移常用的方法介绍
外源基因的转移：基因转移（gene transfer）是将外源基因导入细胞内，其转移方法较多，常用的要有下列几类：1）化学法：将正常基因DNA（及其拷贝）与带电荷物质和磷酸钙、DEAE－葡萄糖或与若干脂类混合，形成沉淀的DNA微细颗粒，直接倾入培养基中与细胞接触，由于钙离子有促进DNA透过细胞有作用
siRNA制备方法介绍
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
蛋白制备方法介绍
胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。1．待标记蛋白溶液的制备 将待标记蛋白预先对0.005Mo
基因探针基因探针的基本介绍
基因探针基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 1．探针的来源 DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe
realtime－PCR－常用仪器和探针
SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。 2.Taqman探针：
realtime－PCR－常用仪器和探针
1.SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。2.Taqman探针：
采用热扫描探针光刻和激光直写相结合的方法快速制备
制造高品质的固态硅基量子器件要求高分辨率的图形书写技术，同时要避免对基底材料的损害。来自IBM实验室的Rawlings等人利用SwissLitho公司生产的3D纳米结构高速直写机NanoFrazor，结合其高分辨热探针扫描技术和率的激光直写功能，制备出一种室温下基于点接触隧道结的单电子晶体管
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA
常用RNA标记方法介绍
RNA标记方法：按反应机制分如下四类：直接标记法，加尾标记法，基于逆转录反应的标记方法，基于RNA克隆扩增的标记方法。常用于RNA标记的方法按标记物性质分为：放射性同位素标记：32P、35S、3H非放射性标记：半抗原荧光素化学发光物质地高辛地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DI
破乳常用方法介绍
长时间静置将乳浊液放置过夜，一般可分离成澄清的两层。水平旋转摇动分液漏斗当两液层由于乳化而形成界面不清时，可将分渡漏斗在水平方向上缓慢地旋转摇动，这样可以消除界面处的"泡沫"。促进分层。用滤纸过滤对于由于有树脂状、粘液状悬浮物存在而引起的乳化现象，可将分液漏斗中的物料，用质地密致的滤纸，进行减压过滤
实验室六种常用纯化制备纯水的方法
实验室纯水的制备方法有多种，最常用的为离子交换、活性炭吸附、微孔过滤、超滤、反渗透、紫外线照射等六种。 1 .离子交换法 离子交换法是以圆球形树脂(离子交换树脂)过滤原水，水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透
转基因植物检测的探针制备过程
转基因植物检测的探针制备以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液
甲硫氨酸的制备方法介绍
⒈可用酪蛋白经水解、精制而得。⒉也可由甲硫醇与丙烯醛经斯特雷克合成反应制备（由甲硫醇和丙烯醛加成后再与氰化钠和氯化铵反应，生成a-氨基腈，再经水解得到a-氨基酸）。
氧化镝的制备方法介绍
一种高纯度氧化镝的制备方法，具体步骤为：第一步：将250g规格99.5％的氧化镝原料投入到1500mL带有搅拌装置的去离子水中，持续搅拌下缓慢加入300mL质量浓度为5％的精制剂(电子级硝酸用去离子水配成溶液)，所得混合物室温下搅拌，速度控制在1200rpm，搅拌时间6h；第二步：将第一步所得的混合
融合蛋白的制备方法介绍
基于重复结构的融合蛋白大多为短肽，不具有复杂的空间结构，因此只需简单的多肽合成过程即可获得目标蛋白。由单个氨基酸合成多肽主要通过两个氨基酸之间脱水形成肽键来实现，主要包括以下基本步骤:：首先对两性离子结构的氨基酸进行相应的氨基或羧基保护，其次将羧基活化为活性中间体，待耦合过程结束后，对肽链上氨基