末端标记的定义
定义1:如借助多核苷酸激酶将ATP的γ位32PO4基团或克列诺酶将生物素标记的单核苷酸加到核酸的末端,以供作示踪检测等。定义2:在DNA或RNA链末端(3'或5'端)添加放射性或其他可检测的标记。......阅读全文
末端标记的定义
定义1:如借助多核苷酸激酶将ATP的γ位32PO4基团或克列诺酶将生物素标记的单核苷酸加到核酸的末端,以供作示踪检测等。定义2:在DNA或RNA链末端(3'或5'端)添加放射性或其他可检测的标记。
末端标记DNA探针技术
现以Klenow片段标记3'末端为例说明末端标记的方法。1、材料:待标记的双链含凹缺3'末端的DNA。2、设备:高速台式离心机,水浴锅等。3、试剂:(1)3种不含标记的dNTP各为200mmol/L。(2)合适的限制酶。(3)[α-32P] dNTP:3000Ci/mmol, 10m
应用激酶交换反应的末端标记
应用激酶交换反应的末端标记1.在置冰浴中的1.5ml微量离心管内依次加入:50 pmol合成寡核苷酸2.5μl 10×反应缓冲液1.5μl ADP(300μmol/L终浓度)10μl γ-[32P]ATP(33pmol)1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)蒸馏水加至25μl2.37℃水浴温育30分
引物设计和末端标记实验
对 SSCP 解析能力和局限性的系统分析揭示灵敏度和片段长度有显著的相关性。当DNA 长度为 150~200bp 时,突变的检出率最高。本方案应用了高专一性的放射性同位素,并且包含一个纯化步骤用于去除未利用的核苷酸,从而降低了整个反应的放射能量。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液MgCl2二硫苏糖醇牛血清白蛋白ddH20TE 缓冲液EDTA聚核苷酸激酶引物放射性化合物仪器、耗材 放射性化合物离心机和转子丙烯酸防护板离心管架废弃物容器盖革计数器QuickSpin 柱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂5X 激酶缓冲液0.25mol/LTris-H
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液 MgCl2 二硫苏糖醇 牛血清白蛋白 ddH20 TE 缓冲液 EDTA 聚核苷
常用DAN探针制备的方法介绍末端标记
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记,只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针,因为携带的标记分子较少,所以标记比活性不高。
原位末端标记技术检测细胞凋亡的介绍
细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单
关于细胞凋亡检测—原位末端标记技术的基本介绍
细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物 酶及其缓冲液 AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶 循环测序缓冲液 热稳定的 DNA 聚合酶
T4多核苷酸激酶末端标记
用T4标记的5’末端1.无菌的1.5ml为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分:50 pmol合成的寡核苷酸2.5μl 10×反应缓冲液10μl γ-[32P]ATP(33pmol)1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)灭菌双蒸水加至25μl2.37℃温育30min。3.当反应物正温育时,以2000×g
双脱氧ATP末端标记双链DNA的3突出端
实验材料 限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵
基于-PCR-的基因分型实验——用末端标记的引物-PCR-扩增-SSLP
试剂、试剂盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶缓冲液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 扩增缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶轻矿物油2 X 甲酰胺载样液仪器、耗材96孔微量板热循环仪用旧的X光胶片或者 Whatman 3MM 的过滤纸实验步骤展
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停,而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物酶及其缓冲液AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶循环测序缓冲液热稳定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA仪器、耗材 小离心管 或者微孔板热循环仪实验步骤 材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到
T4-RNA连接酶的基本信息介绍
T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接,连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接,也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。 T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接,单核苷酸必须为5'和3
糖基的定义
糖基是指单糖与其他不是糖类的分子结合,单糖的部分,叫做这个物质的糖基。
超滤的定义
rightleder 莱特.莱德超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的,膜孔径在20-1000A°之间。中空纤维超滤器(膜)具有单位容器内充填密度高,占地面积小等优点。 超滤是一种加压膜分离技术,即在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜,而使大分子
贫血的定义
贫血:是指人体外周血红细胞容量减少,低于正常范围下限的一种常见的临床症状。由于红细胞容量测定较复杂,临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。我国血液病学家认为在我国海平面地区,成年男性Hb
β转角的定义
β-转角是一种常见的蛋白质二级结构,它通常出现在球状蛋白表面,因此含有极性和带电荷的氨基酸残基。已经发现的蛋白质的抗体识别、磷酸化、糖基化和羟基化位点经常出现在转角和紧靠转交。在β-转角中第一个残基的C=O与第四个残基的N-H氢键键合形成一个紧密的环,使β-转角成为比较稳定的结构,多处在蛋白质分子的
Rohs的定义
RoHS是由欧盟立法制定的一项强制性标准,它的全称是《关于限制在电子电气设备中使用某些有害成分的指令》(Restriction of Hazardous Substances)。该标准已于2006年7月1日开始正式实施,主要用于规范电子电气产品的材料及工艺标准,使之更加有利于人体健康及环境保护。该标
“癌症”的定义
在医学上,癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤,是恶性肿瘤中最常见的一类。相对应的,起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。有少数恶性肿瘤不按上述原则命名,如肾母细胞瘤、恶性畸胎瘤等。一般人们所说的“癌症”习惯上泛指所有恶性肿瘤。肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下,局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控
配子的定义
配子是指生物进行有性生殖时由生殖系统所产生的成熟性细胞,简称生殖细胞。配子分为雄配子(male gamete)和雌配子(female gamete),动物和植物的雌配子通常称为卵细胞(ova,或egg),而将雄配子称为精子(sperm)。精子相当小,但能够运动,呈蝌蚪状进入卵细胞,而卵细胞体积相当大
雌酮的定义
雌酮(Estrone)、雌二醇(17-β-Estradiol)和雌三醇(Esrtiol)为人体和动物体内天然的雌激素,能够维持雌性个体的第二生理特征及正常的内分泌系统,经常被添加到化妆品中,可以防止皮肤老化增加皮肤弹性 。存在于其他妊娠动物的卵巢或其卵泡液、人的胎盘和牡马的尿中。在17β-羟甾类脱
光谱的定义
光谱(spectrum) :是复色光经过色散系统(如棱镜、光栅)分光后,被色散开的单色光按波长(或频率)大小而依次排列的图案,全称为光学频谱。光谱中最大的一部分可见光谱是电磁波谱中人眼可见的一部分,在这个波长范围内的电磁辐射被称作可见光。光谱并没有包含人类大脑视觉所能区别的所有颜色,譬如褐色和粉红色
细胞的定义
细胞(英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。
胞苷酸的定义
中文名称胞苷酸英文名称cytidylic acid定 义胞苷的磷酸酯。视磷酸连接部位不同,有胞苷2′-磷酸(2′-胞苷酸)、胞苷3′-磷酸(3′-胞苷酸)和胞苷5′-磷酸(5′-胞苷酸)三种。体内的胞苷酸通常为5′-磷酸酯。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
质谱仪的定义
质谱仪又称质谱计。分离和检测不同同位素的仪器。即根据带电粒子在电磁场中能够偏转的原理,按物质原子、分子或分子碎片的质量差异进行分离和检测物质组成的一类仪器。质谱仪按应用范围分为同位素质谱仪、无机质谱仪和有机质谱仪。按分辨本领分为高分辨、中分辨和低分辨质谱仪;按工作原理分为静态仪器和动态仪器。
色温的定义
色温是表示光线中包含颜色成分的一个计量单位。从理论上说,黑体温度指绝对黑体从绝对零度(-273℃)开始加温后所呈现的颜色。黑体在受热后,逐渐由黑变红,转黄,发白,最后发出蓝色光。当加热到一定的温度,黑体发出的光所含的光谱成分,就称为这一温度下的色温,计量单位为“K”(开尔文)。