末端标记的定义
定义1:如借助多核苷酸激酶将ATP的γ位32PO4基团或克列诺酶将生物素标记的单核苷酸加到核酸的末端,以供作示踪检测等。定义2:在DNA或RNA链末端(3'或5'端)添加放射性或其他可检测的标记。......阅读全文
末端标记的定义
定义1:如借助多核苷酸激酶将ATP的γ位32PO4基团或克列诺酶将生物素标记的单核苷酸加到核酸的末端,以供作示踪检测等。定义2:在DNA或RNA链末端(3'或5'端)添加放射性或其他可检测的标记。
末端标记DNA探针技术
现以Klenow片段标记3'末端为例说明末端标记的方法。1、材料:待标记的双链含凹缺3'末端的DNA。2、设备:高速台式离心机,水浴锅等。3、试剂:(1)3种不含标记的dNTP各为200mmol/L。(2)合适的限制酶。(3)[α-32P] dNTP:3000Ci/mmol, 10m
应用激酶交换反应的末端标记
应用激酶交换反应的末端标记1.在置冰浴中的1.5ml微量离心管内依次加入:50 pmol合成寡核苷酸2.5μl 10×反应缓冲液1.5μl ADP(300μmol/L终浓度)10μl γ-[32P]ATP(33pmol)1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)蒸馏水加至25μl2.37℃水浴温育30分
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液 MgCl2 二硫苏糖醇 牛血清白蛋白 ddH20 TE 缓冲液 EDTA 聚核苷
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液MgCl2二硫苏糖醇牛血清白蛋白ddH20TE 缓冲液EDTA聚核苷酸激酶引物放射性化合物仪器、耗材 放射性化合物离心机和转子丙烯酸防护板离心管架废弃物容器盖革计数器QuickSpin 柱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂5X 激酶缓冲液0.25mol/LTris-H
引物设计和末端标记实验
对 SSCP 解析能力和局限性的系统分析揭示灵敏度和片段长度有显著的相关性。当DNA 长度为 150~200bp 时,突变的检出率最高。本方案应用了高专一性的放射性同位素,并且包含一个纯化步骤用于去除未利用的核苷酸,从而降低了整个反应的放射能量。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,
常用DAN探针制备的方法介绍末端标记
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记,只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针,因为携带的标记分子较少,所以标记比活性不高。
原位末端标记技术检测细胞凋亡的介绍
细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单
关于细胞凋亡检测—原位末端标记技术的基本介绍
细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物 酶及其缓冲液 AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶 循环测序缓冲液 热稳定的 DNA 聚合酶
T4多核苷酸激酶末端标记
用T4标记的5’末端1.无菌的1.5ml为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分:50 pmol合成的寡核苷酸2.5μl 10×反应缓冲液10μl γ-[32P]ATP(33pmol)1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)灭菌双蒸水加至25μl2.37℃温育30min。3.当反应物正温育时,以2000×g
双脱氧ATP末端标记双链DNA的3突出端
实验材料 限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵
基于-PCR-的基因分型实验——用末端标记的引物-PCR-扩增-SSLP
试剂、试剂盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶缓冲液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 扩增缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶轻矿物油2 X 甲酰胺载样液仪器、耗材96孔微量板热循环仪用旧的X光胶片或者 Whatman 3MM 的过滤纸实验步骤展
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物酶及其缓冲液AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶循环测序缓冲液热稳定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA仪器、耗材 小离心管 或者微孔板热循环仪实验步骤 材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停,而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试
T4-RNA连接酶的基本信息介绍
T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接,连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接,也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。 T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接,单核苷酸必须为5'和3
坏死的定义
以酶溶性变化为特点的活体内局部组织细胞的死亡称为坏死(necrosis)。
多胚性的定义
中文名称多胚性英文名称polyembryony定 义由一个卵子形成两个或多个个体的现象。应用学科遗传学(一级学科),发育遗传学(二级学科)
磷脂的定义
磷脂:甘油磷脂(卵磷脂、脑磷脂)、鞘磷脂(神经细胞中含量丰富)。
亲脂性的定义
亲脂性是指一个化合物融解在脂肪、油、脂质或非极性溶剂的能力。
盐析的定义
向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定
糖脂的定义
糖脂:糖与脂类通过糖苷键连接起来的化合物(共价键),如霍乱毒素。
质谱法的定义
质谱法(Mass Spectrometry,MS)即用电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子、分子或分子碎片,有分子离子、同位素离子、碎片离子、重排离子、多电荷离子、亚稳离子、负离子和离子-分子相互作用产生的离子)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出离子准确质量即可确定离子的化合物组成。这是由于核
孢囊的定义
孢囊(cyst)是Azotobacter vinelandii(棕色固氮菌)等一些固氮菌在外界缺乏营养的条件下,由整个营养细胞外壁加厚,细胞失水而形成的一种抗干旱但不抗热的圆形休眠体。
β折叠的定义
在β折叠中,两条以上氨基酸链(肽链),或同一条肽链之间的不同部分形成平行或反平行排列,成为“股”。
细胞的定义
细胞(英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。
超滤的定义
rightleder 莱特.莱德超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的,膜孔径在20-1000A°之间。中空纤维超滤器(膜)具有单位容器内充填密度高,占地面积小等优点。 超滤是一种加压膜分离技术,即在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜,而使大分子
光谱的定义
光谱(spectrum) :是复色光经过色散系统(如棱镜、光栅)分光后,被色散开的单色光按波长(或频率)大小而依次排列的图案,全称为光学频谱。光谱中最大的一部分可见光谱是电磁波谱中人眼可见的一部分,在这个波长范围内的电磁辐射被称作可见光。光谱并没有包含人类大脑视觉所能区别的所有颜色,譬如褐色和粉红色
胞苷酸的定义
中文名称胞苷酸英文名称cytidylic acid定 义胞苷的磷酸酯。视磷酸连接部位不同,有胞苷2′-磷酸(2′-胞苷酸)、胞苷3′-磷酸(3′-胞苷酸)和胞苷5′-磷酸(5′-胞苷酸)三种。体内的胞苷酸通常为5′-磷酸酯。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)