基因扩增PCR的扩增出现片状拖带或涂抹带的原因和对策
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。......阅读全文
基因扩增PCR的扩增出现片状拖带或涂抹带的原因和对策
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。
基因扩增PCR的扩增出现片状拖带或涂抹带的原因和对策
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。
基因扩增PCR的扩增出现片状拖带或涂抹带的原因分析
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。
PCR反应出现片状拖带或涂抹带原因分析
1)PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。 2 ) 其对策有： ①减少酶量，或调换另一来源的酶; ②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓度。增加模板量，减少循环次数。
PCR产物出现片状拖带或涂抹带的情况
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量，减少循环次数。
基因扩增PCR的扩增出现非特异性扩增带的原因和解决办法
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一
PCR反应出现非特异性扩增带的原因与对策
PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。可能出现的原因有以下几点： 1)引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体; 2)Mg2+离子浓度过高、退火温度过低及PCR循环次数过多有关; 3)其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特
PCR扩增后出现非特异性条带的原因
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源
PCR空白对照出现目的扩增产物的原因和对策
原因： 靶序列或扩增产物的交叉污染对策： 1、操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外； 2、除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。 3、各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存
基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因
出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个
PCR常见问题总汇(一）
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR常见问题总（1）
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
pcr需要注意的问题
1、PCR产物的电泳检测时间：一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。2、假阴性，不出现扩增条带模板：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。模板核酸变性不彻底。在酶和引物质
聚合酶链反应的常见问题介绍
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。假阴性不出现扩增条带。PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及溴乙锭的使用， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板
PCR中常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型就会出现不规则，甚至消失。 1 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
PCR产物的电泳检测
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下： 一、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板
PCR产物的电泳检测时间
一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③
PCR产物的电泳检测可能出现那些问题
一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有：①模板核酸的制备。②引物的质量与特异性。③酶的质量及。④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质。②模板中含有Taq酶抑制剂。③模板中蛋白质
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
PCR反应结束无扩增曲线出现的原因
扩增效率问题：电泳检测qPCR反应产物，观察是否有目的条带出现。如果没有，则需要逐一排查引物、模板以及反应条件问题；确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性，以排除引物降解的可能性；模板浓度太低或目标基因表达丰度过低：减少稀释度，重复实验，一般未知浓度的样品。通常基因表达
PCR疑难解决办法总结
问题1:不出现扩增条带引物：引物质量是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。对策为：①选定合适的引物合成单位；②引物的浓度不仅要看OD值，zui好用引物原液做琼脂糖凝胶电泳，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应与引物合成单位协商解决，如一条引物亮度高，一条引物亮度低
PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增
PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。 【材料和试剂】（1）PCR仪（2）Taq酶（3）氯仿（4）琼脂糖 【
PCR扩增带异常的原因及解决方案
使用PCR时，最常碰到的问题就是会出现扩增带有异。借此机会，我们与大家探讨一下PCR扩增条带有异时的原因及解决方案。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备；②引物的质量与特异性；③酶的质量；④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有T
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白
PCR实用大全2
几种常用特殊PCR技术几种常用特殊pcr技术一、逆转录PCR（Reverse transcription－PCR,RT-PCR）RNA经逆转录后可作为PCR的模板。逆转录PCR（RT－PCR）常用于基因表达研究（定量pcr）和逆病毒检测。设计RT－PCR引物时，应使引物分别位于不同的外显子中，以便区
基因扩增的定义和原因
基因扩增（gene amplification）是指某一个特定基因的拷贝数选择性地增加而其它基因的拷贝数并未按比例增加的过程 [1] 。基因扩增产生的可能原因：1）由错误的DNA复制和修复导致的基因复制；2）自私遗传元件偶然捕获而导致的DNA重复；3）人工聚合酶链式反应（PCR）扩增。