免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。......阅读全文
免疫组化技术实验原理及分类
免疫组化技术实验原理： 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某
6年免疫组化经验总结
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有 6 年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，在论
IHC免疫组化常见问题分析
分析一下免疫组化实验中一些常见的问题和解决措施： 常见问题一：所有切片呈阴性 原因分析：a.缓冲液内含叠氮化钠，抑制酶的活性； b.染色未完全按照操作步骤进行； c.漏加一种抗体或抗体失活； d.复染或脱水剂使用不当； e.底物中加入的过氧化氢少或失活。
免疫组化实验原理和步骤（二）
免疫组化问题解答1、染色过强 a 抗体浓度过高戒孵育时间过长 。降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时、或4度过夜 b 孵育温度过高超过37度。 一般在室温20-28度 c DAB显色时间过长戒浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准。2、非特异性背景染色a 操作过程中冲洗不充分 ：
免疫组化的基本原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学
免疫组化具体操作步骤
免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素） 显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技
关于免疫组化的临床应用介绍
近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。
6年免疫组化经验总结
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有 6 年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的
免疫组化SABC法与SV法
实验概要本文介绍了免疫组化SABC法与SV法。实验原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。亲和素(Avidin)存在于鸡蛋中，分子量67000。是一种碱性蛋白质，具有对生物素近乎于共价键的结合力。链霉亲和
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学
免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。
免疫组化常见问题的处理
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，
免疫组化实验原理和步骤（三）
免疫组化技术的关键问题1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损戒弥漫，防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所
免疫组化常见问题的处理
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。 对照/标本无染色 ①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。 ③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测
免疫组化中抗体选择要求
1、一抗选择要点 （1）选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，
免疫组化为什么山羊血清封闭
封闭是血清与非特异性位点结合，以消除非特异性染色，提高目的蛋白的准确性和降低背景。并非所有的免疫组化都由山羊血清封闭，因为一般二抗是羊抗X，所以采用山羊血清，其与使用二抗来源有关。
免疫组化常见问题的处理
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色 ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。 ③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
材料二甲苯 酒精（100％，95％） EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用） 0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用） DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜 2.
免疫组化实验原理和步骤（一）
实验原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部
免疫组化常见问题的处理
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。 对照/标本无染色 ①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。 ③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗
简述免疫组化实验所用的抗体
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
免疫组化实验结果的分析和判断
⒈ 必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。
免疫组化实验DAB显色时间如何把握
DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；
石蜡切片免疫组化染色实验操作流程
1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。① 二甲苯 、II，各 10 分钟。② 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2 O2 ，室温 10 分
免疫组化技术的原理、分类和优点
一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半
免疫组化方法免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶
免疫组化染色具体操作步骤
免疫组化染色具体操作步骤介绍 （以美国ZYMED公司SP试剂盒为例） 1、石蜡切片脱蜡至水。 2、3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 4、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）。 5、 5~10%正
免疫组化SP（streptavidinperosidase）法步骤
SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二
免疫组化（Elivison二步法）
（1）石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。（2）取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲