电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作步骤
样品制备 样品可以是任何包含蛋白质或核酸的材料。 如果需要,可以将分析样品与化学变性剂混合,通常将SDS用于蛋白质,将尿素用于核酸。 SDS是一种阴离子去污剂,可使二级和非二硫键连接的三级结构变性,并根据其质量成比例地对每种蛋白质施加负电荷。尿素打断核酸碱基对之间的氢键,使组成链退火。将样品加热到至少60°C会进一步促进变性。 可以将跟踪染料添加到溶液中。它通常具有比分析物更高的电泳迁移率,以允许实验人员在电泳过程中跟踪溶液通过凝胶的过程。 聚丙烯酰胺凝胶的制备 凝胶通常由丙烯酰胺,双丙烯酰胺,可选的变性剂(SDS或尿素)和pH值已调整的缓冲液组成。 出于特殊目的,可以改变双丙烯酰胺与丙烯酰胺的比例,但通常为35的约1份。凝胶的丙烯酰胺浓度也可以改变,通常在5%至25%的范围内。 较低百分比的凝胶更适合解析分子量非常高的分子,而解析较小的蛋白质则需要更高百分比的丙烯酰胺, 凝胶通常在凝胶浇铸机中的两个玻璃板......阅读全文
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作步骤
样品制备 样品可以是任何包含蛋白质或核酸的材料。 如果需要,可以将分析样品与化学变性剂混合,通常将SDS用于蛋白质,将尿素用于核酸。 SDS是一种阴离子去污剂,可使二级和非二硫键连接的三级结构变性,并根据其质量成比例地对每种蛋白质施加负电荷。尿素打断核酸碱基对之间的氢键,使组成链退火。将样
SDS-PAGE电泳的操作步骤
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可
SDS-PAGE电泳的操作步骤
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离,鉴定和纯化生物聚合物的标准方法,因为这两种凝胶本质上都是多孔的。 聚丙烯酰胺凝胶是通过丙烯酰胺与交联剂(通常为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺)的聚合反应而形成的化学交联凝胶。 该反应是自由基聚合,通常以过硫酸铵为引发剂和N,N,N′,N′-四甲基
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的应用
测量分子量。肽图分析。蛋白质大小的估计。确定蛋白质亚基或聚集结构。蛋白质纯度的估计。蛋白质定量。监测蛋白质完整性。比较不同样品的多肽组成。多肽亚基的数量和大小的分析。电泳后应用,例如蛋白质印迹。不含有机溶剂和乙酸的考马斯G-250凝胶中的蛋白质染色。通过重复使用商业磁带来浇铸和运行蛋白质凝胶。使用C
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的仪器要求
丙烯酰胺溶液(用于分离和堆叠凝胶)。 异丙醇/蒸馏水。 凝胶上样缓冲液。 运行缓冲区。 染色,脱色溶液。 蛋白质样品 分子量标记。 进行SDS-PAGE所需的设备和用品包括: 电泳仪和电泳仪电源。 玻璃板(短板和顶板)。 铸框 铸造台 梳子
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的优势、缺点
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的优势 稳定的化学交联凝胶 更大的分辨能力(尖锐频段) 可以容纳大量DNA,而不会显着降低分辨率 从聚丙烯酰胺凝胶中回收的DNA非常纯净 聚丙烯酰胺凝胶的孔径可以通过改变两种单体的浓度以容易且可控的方式改变。 适合分离低分子量片段 聚丙烯酰胺凝胶电泳(
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)实验原理和操作步骤
实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
原理 聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PAA)凝胶是丙烯酰胺(acry—lamide,Acr),在交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,Bis)的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物。 Acr的聚合作用只有在自由基存在时才能发生,需要一个催化诱发剂系
聚丙烯酰胺凝胶电泳操作步骤
样品制备样品可以是任何包含蛋白质或核酸的材料。如果需要,可以将分析样品与化学变性剂混合,通常将SDS用于蛋白质,将尿素用于核酸。SDS是一种阴离子去污剂,可使二级和非二硫键连接的三级结构变性,并根据其质量成比例地对每种蛋白质施加负电荷。尿素打断核酸碱基对之间的氢键,使组成链退火。将样品加热到至少60
SDSPAGE的操作步骤
(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。(主要分为浓缩胶和分离胶,配方可自己上网查下)(2) 样品处理在收集
SDS-PAGE电泳法的实验步骤
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamidegelelectrophoresis,简称page)作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n,n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamidegelelectrophoresis,简称page)作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n,n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)实验
【实验原理】聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应。和琼脂糖凝胶相
双向电泳操作步骤——双向电泳操作步骤
实验方法原理双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料细胞样品试剂、试剂盒ddH2O溴酚蓝指示剂
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的要求
丙烯酰胺溶液(用于分离和堆叠凝胶)。异丙醇/蒸馏水。凝胶上样缓冲液。运行缓冲区。染色,脱色溶液。蛋白质样品分子量标记。进行SDS-PAGE所需的设备和用品包括:电泳仪和电泳仪电源。玻璃板(短板和顶板)。铸框铸造台梳子
SDS-PAGE电泳所需仪器及步骤介绍
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶
NativePAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理、方法步骤与...
Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理、方法步骤与常见问题问题和解答1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗?预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率,不加任何物质,一般30-60分
RNA电泳操作步骤
试剂: 琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。 步骤 一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1、称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。 2. 加700mL DEPC水溶解
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂和操作步骤
实验试剂:试剂贮备液:1、 1mol/L HCl48ml,Tris36.6g,TEMED0.23ml,加蒸馏水配成100ml,pH8.9。2、 1mol/L HCl48ml,Tris5.98g,TEMED0.46ml,加蒸馏水配成100ml,pH6.7。3、 Acr28g,Bis0.735g,加蒸馏
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度
一)原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH
聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE胶的配制
各种浓度PAGE胶的配制(DNA电泳用) 50ml体系: 丙烯酰胺 有效分离(bp) 二甲苯青 溴酚蓝 丙烯
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的应用介绍
测量分子量。 肽图分析。 蛋白质大小的估计。 确定蛋白质亚基或聚集结构。 蛋白质纯度的估计。 蛋白质定量。 监测蛋白质完整性。 比较不同样品的多肽组成。 多肽亚基的数量和大小的分析。 电泳后应用,例如蛋白质印迹。 不含有机溶剂和乙酸的考马斯G-250凝胶中的蛋白质染色。 通
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide-gel-electrophoresis,PAGE)
配制 Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积( ml )凝胶液中各成分所需体积( ml ) 5 10 15 20 25 30 4
电泳技术RNA电泳操作步骤
试剂: 琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。 步骤 一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。 2. 加700mL
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理和操作步骤
实验目的:测定蛋白质亚基的分子量及纯度 实验原理:在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后,蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚及分子量的大小,而电荷因素可以被忽略。当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时,电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系,可以用来测定蛋白质亚基的分子量。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度1
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度2
④ 浓缩胶缓冲液:称取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,调pH6.7,用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶内,4℃贮存。⑤ 浓缩胶贮液:称Acr10g,Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml,过滤后置棕色瓶内,4℃贮存。⑥ 40%
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度3
4.加样作为分析用的PAGE加样量仅需几微克,2-3ul血清电泳后就能分出几十条蛋白区带。为防止样品扩散,应在样品中加入等体积40%蔗糖(内含少许溴酚兰)。用微量注射器取5ul上述混合液,通过缓冲液,小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部,待所有凹形样品槽内都加了样品,即可开始电泳。5.电泳将直流稳压电