高效液相色谱的紫外检测波长如何选取
一般选目标物质的最大吸收波长如果是DAD检测器,全扫描一遍就ok了检测单一物质,一般选择该物质的最大吸收波长。你现在同时检测的是三种成分物质,要参考这三种物质的最大吸收波长,以此选择一个合适的波长使三种物质的检测限和灵敏度都能达到一个合适的要求。检测波长的选择涉及到以下2方面的因素:1,目标物质在该波长处有较大(往往不是最大)吸收,用PDA检测可以测出。2,与目标物质同时经过检测器流通池的其他物质(主要是流动相与样品溶剂)在该波长有较小吸收,此时可以进行校正。......阅读全文
高效液相色谱柱如何选择填料粒度
Shim-pack VP-ODS液相色谱柱在进行分析法开发及有效性检查过程中,对于色谱柱制造均一性的要求已经越来越高。而Shim-pack VP-ODS正是为了满足这一需求而开发出来的产品。 高效液相色谱柱如何选择填料粒度呢? 色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,粒度越小,填
如何用高效液相色谱进行手工积分
现在基本没有手工积分了,基本都是通过计算机自己完成的,估计你说的是通过工作站的手动积分。
高效液相色谱跑梯度如何平衡基线?
首先,当梯度完成时,基线漂移是正常的,但是基线漂移的严重性可以通过以下措施来改善1.梯度前,最好用纯有机溶剂冲洗高效液相色谱柱,或使用新高效液相色谱柱,以防止高效液相色谱柱中的残留物导致基线漂移。2.试剂纯度优选为普通色谱纯试剂。如果纯度不够,梯度过程中也会出现基线漂移。3.控制室或柱温,防止温度波
高效液相色谱填料应如何选择(2)
二、聚合物填料 聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要优点是在pH值为1~14均可使用。 相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。 现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
高效液相色谱填料应如何选择(3)
三、其它无机填料
高效液相色谱回收率如何计算
回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1ppm,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度.意义就是回收率能反应该方法对我们测试的项目损失多少,当然回收率也有可能在100%以上空白
高效液相色谱填料应如何选择(1.1)
高效液相色谱是 目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流 动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体
高效液相色谱填料应如何选择(1.2)
2、反相色谱 反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。 样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反相填料有:C18(ODS)、C8
如何提高高效液相色谱的分离效果
调流动相的比例、流动相的PH
液相色谱的分类和高效液相色谱用途
制备型加压液相色谱,按照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠,没有统一、明确的标准。 1、快速色谱 柱压通常为2bar(或30psi)左右,对于那些容易分离的简单混
高效液相色谱的色谱柱
填料和流动相的组分应按各品种项下的规定,常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。在用
高效液相色谱如何检测果汁中维生素C含量
维生素C又称抗坏血酸,是水溶性维生素,不但可以美容,更是抗氧化,保护细胞,甚至能有效抗癌,是知名度最高的营养素。它普遍存在于蔬菜水果中,本文采用高效液相色谱检测果汁中维生素C含量,分析结果快速、准确。果汁中的维生素C在ODS柱上可以得到分离,并在206nm波长下,维生素C有吸收。液相色谱仪检测果汁中
如何减小高效液相色谱中色谱柱柱污染
增加预柱(保护柱)。改善样品前处理。如果使用过于频繁,应该多冲洗。
高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件
这个问题很大,不是一句两句就能解决的,因为一个方法的开发与优化是个系统性的工作,应该不断的尝试与改进。就一般情况来说,你想确定合适的液相分析方法,应该首先搞清楚你检测的物质中都含哪些物质,根据它们的分子式及结构物性,物理化学性质来选择合适的分析条件。比如是否怕水,有无紫外吸收,分子量大小,极性大小,
高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件
在高效液相色谱分析中,分离条件的优化是指在选定的色谱柱上(即柱容量恒定条件下)来实现:(1)在保证一定分离度的条件下,实现分析速度的最优化。(2)在保证一定分析时间的条件下,实现难分离物质对分离度的最优化。 在色谱分析中,分离度、分析速度和柱容量三者之间的关系,呈现幻想的三角形,即其中任一因素
高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件
这个问题很大,不是一句两句就能解决的,因为一个方法的开发与优化是个系统性的工作,应该不断的尝试与改进。就一般情况来说,你想确定合适的液相分析方法,应该首先搞清楚你检测的物质中都含哪些物质,根据它们的分子式及结构物性,物理化学性质来选择合适的分析条件。比如是否怕水,有无紫外吸收,分子量大小,极性大小,
高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件
在高效液相色谱分析中,分离条件的优化是指在选定的色谱柱上(即柱容量恒定条件下)来实现:(1)在保证一定分离度的条件下,实现分析速度的最优化。(2)在保证一定分析时间的条件下,实现难分离物质对分离度的最优化。 在色谱分析中,分离度、分析速度和柱容量三者之间的关系,呈现幻想的三角形,即其中任一因素
如何用高效液相色谱(HPLC)进行蛋白质的纯度检测
寻找钙蛋白质的标样配置不同浓度京HPLC分析后作一条工作曲线,然后取待测样品测试,根据工作曲线可以求出样品中该蛋白质的真实含量,从而计算出纯度/含量;至于分子量,需要用凝胶渗透色谱(GPC)进行测定。
高效反相液相色谱
反相色谱(reversed phasc chromatography, RPC)是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高,在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式,在生物大分子的反相液
高效液相色谱原理
采用高效液相色谱(HPLC)法分离单糖和寡糖,较多采用氨基柱,乙腈和水作为流动相,此法具有完全分离麦汁、发酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和麦芽三糖的优点。本文采用Hypersil NH2柱分析麦汁、发酵液和啤酒中三糖以内的可发酵糖。至今尚未见到采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离测
高效液相色谱分类
按照分离原理分类,大概可以分为:1.吸附色谱:基于各组分对固定相的吸附能力不同而实现分离的方法。比较常见的色谱柱是火星硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等。用于测定结构异构体。2.分配色谱:基于样品在流动相和固定相之间溶解度不同的原理实现分离。比较常见的正相氰基柱(正相)和极为普遍的C18色谱柱(
反相高效液相色谱
方案1 蛋白质 RP-HPLC 的标准色谱条件 方案2 填充 RP-HPLC 毛细管微柱 方案3 不易分离的大分子量多肽的纯化实验 方案4 用 RP-HPLC 对固相合成的多肽进行纯化实验 方案5 用 RP-HPLC 技术对多肽和蛋白质混合
高效液相色谱原理
以高压下的液体为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。构造可分为高压输液泵,色谱柱,进样器,检测器以及数据获取与处理系统等部分。与气相色谱法相比,液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制,只要求把样品制成溶液即可,非常适合于分离生物大分子、离子型化合物,不稳定的天然产物以
高效液相色谱原理
色谱法是一种分离技术,试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动,称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体(气体或液体),称为流动相。 当流动相中携带的混合物流经固定相时,其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质
高效液相色谱积分
正常操作不建议手工积分,手工积分会人为的带来误差,同一次测定的对照品和样品的色谱图最好是在设定一个固定的积分条件进行积分计算,积分参数一致的情况下进行可减少人为主观意识上的误差。
高效液相色谱原理
液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪,具有常规HPLC的基本性能,并扩展了更多智能化的功能,能很好的满足用户的各类不同的应用要求,使用户能更加轻松的使用,并获得准确的分析数据。一、原理:高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论,色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成
高效液相色谱柱
一、怎样选择色谱柱 现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。 (1)硅胶基质填料: 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(
高效液相色谱原理
液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪,具有常规HPLC的基本性能,并扩展了更多智能化的功能,能很好的满足用户的各类不同的应用要求,使用户能更加轻松的使用,并获得准确的分析数据。一、原理:高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论,色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成
高效液相色谱基线
高效液相色谱基线色谱基线也常被称作背景噪音,是在无样品组分通过色谱检测器时,检测器响应信号的随机分布。基线噪音的大小直接影响色谱分析方法的检测灵敏度以及对杂质的检出能力,如纯度测试以及痕量物质残留检测方法等。对于液相色谱而言,等度洗脱模式下,由于流动相的组成保持一致,其折光率不变,因而基线比较平坦,
高效液相色谱柱
一、怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。(1)硅胶基质填料:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,C