关于酶标记抗体的酶制剂及其底物
凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。 由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinhei......阅读全文
关于酶标记抗体的酶制剂及其底物
凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹
酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
酶标记抗体的概述
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的酶(如
关于酶标记抗体实验的结果判定介绍
(1)定性及效价滴定：用特异性抗原(或抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。 (2)定量和克分子比值测定：可用分光
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶免疫技术抗体的酶标记方法
用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化
真核生物中典型的呼吸酶及其底物
真核生物中典型的呼吸酶及其底物呼吸酶氧化还原对中点电位（伏）NADH脱氢酶NAD/NADH−0.32琥珀酸脱氢酶FMN或FAD/ FMNH2或FADH2−0.20细胞色素bc1复合体辅酶Q10ox/ 辅酶Q10red+0.06细胞色素bc1复合体细胞色素box/ 细胞色素bred+0.12复合体IV
酶标记抗体技术方法（三）
3. 结果判定： 除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。 IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62 4. 试剂及器材: (1) 0.1M NaIO４：称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。 (2
酶标记抗体技术方法（二）
三、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶标记抗体技术方法（一）
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质
酶标抗体标记效果测定
酶标抗体标记效果测定：测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
酶标记抗体或抗原的制备
标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。 1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂 （1）一步法：连接AP。 ①优点：操作简便、有效，重复性好。 ②缺点：交联时分子间比例不严格，大小
酶标记抗体或抗原的制备
标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂（1）一步法：连接AP。 ①优点：操作简便、有效，重复性好。②缺点：交联时分子间比例不严格，大小不一，影响效果。（
简述酶标记抗体的方法步骤
1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
关于酶标记抗体简易过碘酸钠法介绍
本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70%的HRP和Ig结合，99%的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是最常用的方法。 原理 经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交
真核生物中典型的呼吸酶及其底物介绍
真核生物中典型的呼吸酶及其底物呼吸酶氧化还原对中点电位（伏）NADH脱氢酶NAD/NADH−0.32琥珀酸脱氢酶FMN或FAD/ FMNH2或FADH2−0.20细胞色素bc1复合体辅酶Q10ox/ 辅酶Q10red+0.06细胞色素bc1复合体细胞色素box/ 细胞色素bred+0.12复合体IV
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
酶标记抗体技术的注意事项
1.在具备高质量HRP的条件下，所要标记的抗体也要活性高,效价高(最低1∶16),纯度高，亲和力好，这是保证标记物效价高，免疫活性好的首要条件。 2.所使用试剂的PH和浓度及用量必须严格掌握。所用试剂，最好(或必需)新鲜配制。如在戊二醛标记法中所用戊二醛应为新鲜纯品，因戊二醛储存过久可形成缩和
酶标记抗体试剂及器材的介绍
(1)0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸馏水至200ml。 (2)1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50μl与PH6.8的PBS1ml混合。 (3)1M PH9.5碳酸盐缓冲液：取1M
酶标记抗体HRP标记抗体戊二醛二步法
实验概要本实验介绍了酶标记抗体-HRP标记抗体中的戊二醛二步法的操作流程。实验原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。主要试剂1. 0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
用于标记抗体或抗抗体的酶有哪些特性？
用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。
酶标记抗体技术的工作浓度的选择
在免疫酶技术中，首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小变化，便可导致试验结果产生很大的波动。另外，由于浓度过高，可使非特异性反应增加，而浓度过低又可影响测定的敏感性。因此，正式试验前必须准确滴定其工作浓度。 酶标记抗体的滴定方法是：将抗原(或抗体)物理吸附于固相载体
关于抗原–抗体反应的类型—免疫酶技术是以酶为标记物的介绍
免疫酶技术是以酶为标记物，即用酶标记抗体(或抗原)检测相对应的抗原(或抗体)的一种定位、定性和定量的技术。用化学方法使酶与抗原或抗体结合，形成酶标记物。当酶标记物与相应的抗原或抗体反应而形成酶标记物–抗原(或抗体)的免疫复合物后，与相应的酶底物作用时可生成有色的产物；酶降解底物的程度与所呈现的色
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)（3）移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中，4℃透析过夜，更换三次缓冲液，注意避光。 （4）吸取上述醛化好的HRP溶液3ml，加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml，室温轻搅2-3小时，避光；加入5m
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1
目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖
非标记抗体酶法PAP法
PAP复合物是离体制备的HRP抗HRP复合物，它的制备方法较多，现简介其中之一。（1）制备抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射灭活的卡介苗（共lOmg），2周后重复1次，刺激机体免疫系统功能，1周后于背部脊柱两旁皮内多点注射1．Oral乳剂[福氏完全佐剂，含HRP3。3m
双酶双底物的双重免疫染色—淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记
实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水（若用含汞固定液固定的组织，则需用内含 0.5％ 碘的乙醇溶液脱汞 5 min，乙醇浓度为 70％，经自来水洗后以 2.5％ 硫代硫酸钠浸洗 1 min，水洗）。2. 0.3％H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min，自来水洗，蒸馏水洗，入 PBS（0.01mol/L
酶制剂发展及其对策
酶制剂工业是21世纪最有希望的新兴产业之一，为了适应这个发展趋势，笔者认为，我国酶制剂工业以后5-8年的发展，主要考虑在现有应用领域提高基础上，重点发展的应用领域是：动物饲料工业、低聚糖工业、棉纤维与纺织加工、洗涤剂、焙烤工业、防护用品、蛋白质水解、淀粉改良、纸浆、造纸用酶等。只有这样，才能赶上国际
HRP底物分类及其操作步骤
底物范围较广，包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。二氨基联苯胺／金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑