酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。 (一) 酶制剂及其底物 凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。 由于辣根过氧化物酶(H......阅读全文
酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
酶标记抗体的概述
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的酶(如
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记抗体技术方法（三）
3. 结果判定： 除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。 IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62 4. 试剂及器材: (1) 0.1M NaIO４：称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。 (2
酶标记抗体技术方法（二）
三、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶标记抗体技术方法（一）
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质
酶标抗体标记效果测定
酶标抗体标记效果测定：测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
酶免疫技术抗体的酶标记方法
用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
酶标记抗体HRP标记抗体戊二醛二步法
实验概要本实验介绍了酶标记抗体-HRP标记抗体中的戊二醛二步法的操作流程。实验原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。主要试剂1. 0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
酶标记抗体或抗原的制备
标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。 1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂 （1）一步法：连接AP。 ①优点：操作简便、有效，重复性好。 ②缺点：交联时分子间比例不严格，大小
简述酶标记抗体的方法步骤
1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶标记抗体或抗原的制备
标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂（1）一步法：连接AP。 ①优点：操作简便、有效，重复性好。②缺点：交联时分子间比例不严格，大小不一，影响效果。（
酶标记抗体技术的注意事项
1.在具备高质量HRP的条件下，所要标记的抗体也要活性高,效价高(最低1∶16),纯度高，亲和力好，这是保证标记物效价高，免疫活性好的首要条件。 2.所使用试剂的PH和浓度及用量必须严格掌握。所用试剂，最好(或必需)新鲜配制。如在戊二醛标记法中所用戊二醛应为新鲜纯品，因戊二醛储存过久可形成缩和
非标记抗体酶法PAP法
PAP复合物是离体制备的HRP抗HRP复合物，它的制备方法较多，现简介其中之一。（1）制备抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射灭活的卡介苗（共lOmg），2周后重复1次，刺激机体免疫系统功能，1周后于背部脊柱两旁皮内多点注射1．Oral乳剂[福氏完全佐剂，含HRP3。3m
酶标记抗体试剂及器材的介绍
(1)0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸馏水至200ml。 (2)1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50μl与PH6.8的PBS1ml混合。 (3)1M PH9.5碳酸盐缓冲液：取1M
用于标记抗体或抗抗体的酶有哪些特性？
用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)（3）移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中，4℃透析过夜，更换三次缓冲液，注意避光。 （4）吸取上述醛化好的HRP溶液3ml，加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml，室温轻搅2-3小时，避光；加入5m
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1
目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖
关于酶标记抗体实验的结果判定介绍
(1)定性及效价滴定：用特异性抗原(或抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。 (2)定量和克分子比值测定：可用分光
酶标记抗体技术的工作浓度的选择
在免疫酶技术中，首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小变化，便可导致试验结果产生很大的波动。另外，由于浓度过高，可使非特异性反应增加，而浓度过低又可影响测定的敏感性。因此，正式试验前必须准确滴定其工作浓度。 酶标记抗体的滴定方法是：将抗原(或抗体)物理吸附于固相载体
关于酶标记抗体的酶制剂及其底物
凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹
抗体标记方法
Biotinylation of Antibody ( Contributed by Nanci Donacki) Antibody labeling (House Ear Institute)Labeling protocols using affinity markers. Coupling
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」，将它们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。其基本流程为：抗原+特异性抗体 → 第二抗体（桥抗）→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2（显色）。因为桥抗
关于酶标记抗体简易过碘酸钠法介绍
本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70%的HRP和Ig结合，99%的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是最常用的方法。 原理 经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交
非标记抗体免疫酶组织化学实验——酶桥法
由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫
酶标记抗体免疫组化染色知识点
（一）直接法：将酶直接标记在特异性抗体上，与组织细胞内相应的抗原进行特异性反应，形成抗原-抗体-酶复合物，最后用酶底物显色。直接法的优点在于操作简便及特异性强，缺点是敏感性低，制备的抗体种类有限。 （二）间接法：将酶标记在第二抗体上，先将第一抗体（特异性抗体）与相应的组织抗原结合，形成抗原抗体
改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体
HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成Schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残留的a-和e-氨基。酶与抗体的结合反应后，再加入硼氢化钠还原成稳定的结合物。 (1) 取HRP 5mg溶
抗体的标记方法
荧光色素标记抗体1．准备好凝胶滤柱以便完成结合反应后用于分离标记抗体和游离的荧光色素。分离球形蛋白使用排除极限为20 000～50 000的凝胶介质和细粒级凝胶（直径约50μm）。所需凝胶滤柱的大小可根据偶联反应的总体积×20来确定。依据厂家说明准备好滤柱，用20倍柱床体积的PBS灌注滤柱，直至缓冲