双酶双底物的双重免疫染色—淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记
实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水(若用含汞固定液固定的组织,则需用内含 0.5% 碘的乙醇溶液脱汞 5 min,乙醇浓度为 70%,经自来水洗后以 2.5% 硫代硫酸钠浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自来水洗,蒸馏水洗,入 PBS(0.01mol/L,pH 7.2)洗。3. 滴加正常羊血清 1:10,湿盒,室温,10 min,不洗。4. 加一抗(抗人κPcAb 与抗人 McAb 的混合液)1:200,湿盒,37℃,45 min 或更长。5. PBS 洗 5 min×3。6. 加二抗(GARG+GAMG 混合液 1:200),湿盒,37℃,30 min。7. PBS 洗 5 min×3。8. 加酶-抗酶抗体复合物(兔 PAP+鼠 PAP-AP 混合液 1:100)湿盒 37℃,30 min。9. PBS 洗 5 min×3。10. 过氧化物酶显色反应:以 DAB/H2O2 液显色 ......阅读全文
双酶双底物的双重免疫染色—淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记
实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水(若用含汞固定液固定的组织,则需用内含 0.5% 碘的乙醇溶液脱汞 5 min,乙醇浓度为 70%,经自来水洗后以 2.5% 硫代硫酸钠浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自来水洗,蒸馏水洗,入 PBS(0.01mol/L
双酶双底物的双重免疫染色—多种组织抗原配对的双重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色(间接法)——Ki-67-CK20 等多种组织抗原配对的双重酶实验步骤1. 恒冷切片或石蜡切片,厚 4~6 μm,常规处理。2. 0.1%NaN3+0.3%H2O2/TBS(50 mmol/L,pH 7.8)或 0.3%H2O2/甲醇,
双链酶试验的正常值
局部不出现红肿反应者阴性,硬结直径>5mm者为阳性。
双链酶皮内试验的简介
细胞免疫皮肤试验(简称皮试)是测定体内免疫功能的方法。此法简便易行,对于过敏性疾病、传染病、免疫缺陷病及肿瘤的诊断与防治有重要意义。
双链酶试验的临床意义
意义SK-SD试验阴性者,很可能是细胞免疫功能低下,亦可能是被检者未受相应链球菌的感染。此外,尿毒症者对SK -SD试验反应常较正常人为低。
限制酶切割双链DNA的方式
限制酶切割双链DNA的方式有两种,产生的末端也有两种:第一种是交错切割,即两条链的切点不在同一水平而是相隔数个碱基,故断口产生两小段自身互补的单链,这种末端容易互补连接,称为粘性末端(cohesive terminus);第二种为平整切割。
双侧双重带状疱疹病例分析
1 病历摘要患者女,64 岁。 因左侧头面及右侧腰腹部出现簇 集水疱伴疼痛 7 d 至我院就诊。患者 7 d 前无明显诱因 左侧头皮、额面部疼痛不适,呈间歇性刺痛,不久左侧 头皮、额部开始出现片状红斑,其上见散在丘疱疹、水 疱,且右腰腹开始出现簇集丘疱疹,疼痛明显,无明显 发热等症状。未行相关治疗,
光镜下双/多重免疫标记实验——双重免疫荧光染色
实验步骤1. 古兹菲德-雅各氏病(CJD)病人的尸解脑组织,4% 中性甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,厚 5 μm(贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏合剂)。2. 常规脱蜡,水化。3. 抗原修复(柠槺酸盐缓冲液 pH 6.0 中,高压灭菌器加热 100℃,20 min)及 96% 甲酸孵育 2 m
光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITCFITC
双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理,在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物,或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物,达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分(定性、定位、定撤),分析不同抗原成分相互间功能的增消关系,操作遵循的原则与要求同单
双链DNA探针标记法
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
双链DNA探针标记法的介绍
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到
双链酶试验的注意事项有哪些
一、抽血前的注意事项 1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。 2、体检前一天的晚八时以后,应禁食,以免影响第二天空腹血糖等指标的检测。 3、抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。 二、抽血后应注意 1、抽血后,需
双链酶皮内试验的正常值
阴性为(-):无红肿、硬结或硬结直径15mm。
双链酶试验抽血前的注意事项
1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。 2、体检前一天的晚八时以后,应禁食,以免影响第二天空腹血糖等指标的检测。 3、抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。
关于酶标记抗体的酶制剂及其底物
凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶,原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求:(1)来源方便,易于纯化;(2)比活性高,性质稳定;(3)酶活性和量能用简单方法测定。在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹
免疫学实验双链酶试验介绍
双链酶试验介绍: 用从溶血性链球菌培养液中提取的链激酶(SK)及链道酶(SD)制成的抗原。 双链酶试验正常值: 局部不出现红肿反应者阴性,硬结直径>5mm者为阳性。 双链酶试验临床意义: 意义SK-SD试验阴性者,很可能是细胞免疫功能低下,亦可能是被检者未受相应链球菌的感染。此外,尿毒
双链DNA探针标记法介绍
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料 限制性内切核酸酶 T4 噬菌体 DNA 聚合酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 醋酸氨
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲液适当的
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料 限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒 醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲
精准检测去泛素化酶活性新型双泛素底物的使用
泛素-蛋白酶体(ubiquitin-proteasome system,UPS)途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制。负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统。泛素启动酶系统负责活化泛素,并将其结合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵(10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料 限制性内切核酸酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA 试剂、试剂盒
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵(10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚
双重荧光素酶报告基因优缺点
双重荧光素酶报告基因优点是具有灵敏度高,缺点是需要多次实验。双荧光素酶报告基因检测系统因其具有灵敏度高、无细胞内源性表达干扰等优势,现已被广泛用于基因表达调控的研究中,同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔,并且引入另一个报告基因作为内参。双荧光素酶报告基因检测是以荧光
标记双链DNA的3突出端
实验材料限制性内切核酸酶小牛胸腺末端转移酶模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵乙醇酚氯仿末端转移酶缓冲液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵(10 mol/L )乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲液适当的限制性内切核酸酶小牛胸腺末端转移酶5X 末端
临床化学检查方法介绍双链酶试验介绍
双链酶试验介绍: 用从溶血性链球菌培养液中提取的链激酶(SK)及链道酶(SD)制成的抗原。双链酶试验正常值: 局部不出现红肿反应者阴性,硬结直径>5mm者为阳性。双链酶试验临床意义: 意义SK-SD试验阴性者,很可能是细胞免疫功能低下,亦可能是被检者未受相应链球菌的感染。此外,尿毒症者对SK-
双脱氧ATP末端标记双链DNA的3突出端
实验材料 限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵
双链酶试验的正常值及临床意义
正常值 局部不出现红肿反应者阴性,硬结直径>5mm者为阳性。 临床意义 意义SK-SD试验阴性者,很可能是细胞免疫功能低下,亦可能是被检者未受相应链球菌的感染。此外,尿毒症者对SK -SD试验反应常较正常人为低。
双链酶试验的抽血后注意事项有哪些
1、抽血后,需在针孔处进行局部按压3-5分钟,进行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血肿。 2、按压时间应充分。各人的凝血时间有差异,有的人需要稍长的时间方可凝血。所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫,可能会因未完全止血,而使血液渗至皮下造成青淤。因此按压时间长些,才能完全止血。如有出血倾向,