有限稀释法的基本介绍

有限稀释法是一种常用的克隆方法,是指将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数,计出1mL的细胞数。常用来筛选融合的动物细胞。 用HT培养液稀释, 使细胞浓度为50~60个/mL,于96孔培养板中每孔加0.1mL(5.5个细胞/孔)。接种2排,剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释,再接种2排,如此类推,直至使每孔含半个或一个细胞。培养7~10天后,选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。一般需要如此重复3~5次,直至达100%阳性孔率时即可,以确保抗体由单个克隆所产生。......阅读全文

有限稀释法的基本介绍

  有限稀释法是一种常用的克隆方法,是指将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数,计出1mL的细胞数。常用来筛选融合的动物细胞。  用HT培养液稀释, 使细胞浓度为50~60个/mL,于96孔培养板中每孔加0.1mL(5.5个细胞/孔)。接种2排,剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释,再接种2排

有限稀释法克隆抗体的过程介绍

1.材料(1)微量培养盘,盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万~4万。(2)HT培养基2.操作方法(1)取出抗体阳性孔细胞,用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色,计数。(2)用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。(3)用吸管将细

关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍

  1.材料  (1)微量培养盘,盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万~4万。  (2)HT培养基  2.操作方法  (1)取出抗体阳性孔细胞,用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色,计数。  (2)用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和

单克隆抗体的克隆化方法有限稀释法介绍

1.材料(1)微量培养盘,盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万~4万。(2)HT培养基2.操作方法(1)取出抗体阳性孔细胞,用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色,计数。(2)用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。(3)用吸管将细

有限稀释的定义

中文名称有限稀释英文名称limiting dilution定  义按倍数逐渐将溶液或细胞稀释的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞培养与细胞工程(二级学科)

关于稀释法药敏试验的基本介绍

  稀释法药敏试验是指将一定浓度的抗菌药物按照指南进行稀释后与肉汤或琼脂混合制成培养基,再接种受试菌株,经孵育培养后观察细菌生长情况,进行药敏结果分析。此法较少应用于临床检测,多用于罕见耐药的调查。在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列(对倍)稀释后,定量接种待检菌,35摄氏度孵育24小时后观察。抑制待

有限稀释技术定义

中文名称有限稀释技术英文名称limiting dilution technique定  义一种细胞学技术。即通过不断稀释,至每个组分仅包括1个细胞,从而制备单个细胞组分。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

有限稀释技术的特点

中文名称有限稀释技术英文名称limiting dilution technique定  义一种细胞学技术。即通过不断稀释,至每个组分仅包括1个细胞,从而制备单个细胞组分。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

有限稀释技术的定义

中文名称有限稀释技术英文名称limiting dilution technique定  义一种细胞学技术。即通过不断稀释,至每个组分仅包括1个细胞,从而制备单个细胞组分。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

有限稀释技术的定义

中文名称有限稀释技术英文名称limiting dilution technique定  义一种细胞学技术。即通过不断稀释,至每个组分仅包括1个细胞,从而制备单个细胞组分。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

细胞单克隆的分离方法(有限稀释法与软琼脂法)

一、有限稀释法材料:a、96孔细胞培养板等;b、HT培养基;c、活力强的杂交瘤细胞;d、小鼠腹腔细胞。方法:a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液,用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。c、按每毫升加入5×104-

单-克-隆-抗-体-的-制-备——有限稀释克隆法

实验步骤 附 加 材 料(其他材料见基本方案 2)候 选 杂 交 瘤 系(见辅助方案 2)克隆和扩增用培养基(见辅助方案 4)微 孔 板 观 察 镜(由 Flow 实验室或 Dynatech 公司提供),可选的1.重悬候选杂交瘤所在孔中的细胞(见 辅 助 方 案 2 , 步 骤 4),用血细胞计数器

核素稀释法的基本原理

结构相同的标记物与非标记物混合后,两者在分离纯化过程中行为相同,标记物被稀释的倍数可从比放射性下降的倍数计算出来,只要知道两者中任何一个的量,就可根据比放射性的变化求出另一者的量。核素稀释法灵敏度不很高,但由它派生出来的求整体代谢库的稀释法及求标记物含量的反稀释法仍有广泛用途。

药物敏感试验的稀释法介绍

  稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时

单克隆抗体技术:克隆化(有限稀释法、软琼脂克隆化、...

经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早,太早细胞性状不稳定,数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞,经

关于药敏试验的稀释法的介绍

  稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时

关于稀释法药敏试验的步骤介绍

  稀释法药敏试验主要有试管肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法等方法,其主要区别为培养基不同,但试验步骤基本一致。  1.药物稀释  按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)制订的指南进行药物原液制备和稀释。  2.菌液制备  挑取培养好的受试菌制备成0.5麦氏单位菌悬液。  3.菌株接种  菌

同位素稀释法的相关介绍

  同位素稀释法是一种应用放射性同位素(或稳定同位素)进行化学分析的一种方法。将一定量已知放射性比度(稳定同位素则用比丰度)的同位素或标记化合物加入试样中,与被测物质均匀混和,待交换完全后,再用化学力一法分离出被测元素或化合物,提纯并测定其放射性比度(或比丰度),按其放射性比度(或比丰度)的改变,根

关于同位素稀释法的应用介绍

  同位素稀释法已广泛用于生物化学方面,如维生素、抗生素等复杂物质的分析;有机化学方面,如氨基酸、脂肪酸、杀虫剂、聚合物等复杂混合物的分析;无机化学方面,特别是对性质类似不易分离的稀土元素的定量测定。

X射线光谱仪的稀释法介绍

  稀释法,在共存元素的影响大时,有适当的物质稀释来减少其影响的方法,此方法多被用于试液试样,但也有用于粉末试样,还有为了增加稀释效应而用原子序数大的物质来稀释(重元素稀释),玻璃熔片法和点滴法对减少共存元素的影响有限。

稀释法克隆培养

            实验方法原理 低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。 实验材料 CHO细胞

稀释法克隆培养

实验方法原理低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞胰蛋白酶仪器、耗材培养基吸管培养皿血细胞计数器实验步骤1. 细胞用胰蛋白酶(胰蛋白酶,0.25 %,1 : 250或相当活性)消化制备单细胞悬液。消化不充分会

cems稀释法原理

完全抽取法是先将烟气从烟道抽取出来,然后送进分析仪器进行分析。一般采用较为成熟的分析法为红外吸收法,可实现多组分的同时测量。根据抽取过程的不同,又可分为冷抽取法和热抽取法,两种抽取方法均需把样气进行加热,然后经过滤器滤除烟尘。不同的是,热抽取法是直接把高温样气送入分析仪的光学腔内进行分析;冷抽取法则

稀释法克隆培养

实验方法原理低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞                                                                  胰蛋白酶        

关于稀释法药敏试验的注意事项介绍

  1.保证抗菌药物质量  抗菌药物应直接从厂商或相关机构获取,实际浓度依据说明书进行换算,药品应按照说明书要求或于-20℃下干燥冷藏,制备好的药液应无菌并至少为-60℃冷冻保存,融化后应24小时内使用,未使用的不可再次使用。  2.培养基的要求  肉汤稀释法中,非苛养菌可选择阳离子调节的MH肉汤,

亚计量同位素稀释法的相关介绍

  由于以上各方法都需要测定放射性比度,其中分出部分的定要应用一般化学分析法。如果能设法避免测定放射性比度这一手续,则一方面可使分析方法简便,另一方面可使同位素稀释法的灵敏度不受善通化学分析法的限制。1957一1958年,弗来米林(Fremilin),阿里阿加(Arriaga)和齐马柯夫分别提出了这

病毒的滴定实验——稀释法

实验步骤1.  以维持液(0.5% 水解乳蛋白Hank's 液)将病毒作连续10 倍稀释(每一稀释度换一新吸管)。2.  如选择滴定的稀释度为l0-6~10-8,则于试管架上排列8 支试管。l0-1~10-5共5 支管,每管如入1.8 毫升维持液;l0-6~10-8共3 管,每支加入4.5

稀释平板测数法

一、实验目的了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法,认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量

稀释平板测数法

一、实验目的了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法,认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理      稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的系列

同位素稀释法的发展阶段的介绍

  同位素稀释法的优点是避免了复杂混合物体系定量分离、纯化的困难。同位素稀释法发展到现在,基本上可分为三个阶段 [1] :  1.测定放射性比度的同位素稀释;  2.亚计量同位素稀释;  3.亚一超当量通用同位素稀释。  这三个发展阶段不是截然分开的,而是至今仍在交错继续发展。  所用的分离方法,除