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实验方法原理低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞 胰蛋白酶 &......阅读全文
3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死，在无菌操作下取组织，放 在 4°C无血清培养基中，最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得
特殊培养法1）二倍体细胞培养法二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：1. 吸除旧培养液注入另瓶中。2. 用温BSS冲洗1次。3.
融合后的细胞在孔里生长时，一般并不是一个单纯的克隆（一般是两个或者多个克隆，就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆，但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的），如果直接将其扩大培养将会产生两个问题：一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的，并且都分泌抗体，那么就有可
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。 血清质量的鉴定一般包括以下几个方面： ●理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 &
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交
材料与方法 1．抗原动物及免疫方法抗原为哈尔滨兽医研究所保存的马传贫病毒株培养物制备的可溶性抗原。免疫动物为6～8周龄的Balb/c鼠。初次免疫用含完全佐剂抗原0.2ml（病毒含量为1.0×108／ml制备的可溶性抗原）腹腔接种，经2周再次免疫接种，应用不完全佐剂抗原0.2ml腹腔接种，再
克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细
克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
（4）融合 ①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm,8min;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。 ②90s内加入37℃预温的
β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备 目前，在我国奶牛养殖业中，青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商户滥用抗生素以及未严格遵守休药期，致使牛奶中抗生素残留超标，乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限
融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛
实验概要本文介绍了单克隆抗体的克隆化方法，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。实验原理经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细
抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。 选择与所用骨髓瘤细胞同源的B
第三节 微生物的分离经富集培养以后的样品，目的微生物得到增殖，占了优势，其他种类的微生物在数量上相对减少，但并未死亡。富集后的培养液中仍然有多种微生物混杂在一起，即使占了优势的一类微生物中，也并非纯种。例如同样一群以油脂为碳源的脂肪酶产生菌，有的是细菌，有的是霉菌，有的是芽孢
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠
β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备目前，在我国奶牛养殖业中，青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商户滥用抗生素以及未严格遵守休药期，致使牛奶中抗生素残留超标，乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限量抗生素的原
实验原理经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细
一、材料和试剂1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M PH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20
多孔塑料培养板单细胞克隆法： （1）消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。 （2）低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，最适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。 （3）接种：先
实验材料 载体和酵母菌 试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 SD
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。实验材料 TY试剂、试剂盒 储存液溶菌酶干粉细菌裂解缓冲液甘油水溶液实验步骤 一、材料与设备1. 2X TY：16 g 蛋白胨，10 g 酵母提
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌
1986年，美国FDA批准了第一个单克隆抗体药物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超过40个治疗用抗体药物被批准上市，每年实现超过600亿美元的销售额。在国际及国内形成了抗体药物开发热潮。巨大的市场前景和现存的技术问题及壁垒并存的现实不可避免地引发抗体药物新一轮技术革命。而其结果又将毫无疑问地改
将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法
摘要： 细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一,所用材料为细胞计数板、巴氏吸管和显微镜,步骤如下. 一、细胞计数 这是细胞培养中常用的基本技术之一.所用材料为细胞计数板.巴氏吸管和显微镜.步骤如下. 取清洁计数板和专用盖玻片,用丝绸布轻轻擦干. 取