脉冲场凝胶电泳的应用领域
脉冲场凝胶电泳在生物基因分型、分子流行病学研究、细胞凋亡、追踪传染源、兽医流行病诊断辅助、食品和公共健康及染色体DNA分离等研究中有广泛应用。追踪传染源脉冲场凝胶电泳用于评估同一事件中不同来源菌株可能存在的关系，是溯源的有用技术之一。当疫情爆发时， 为了采取有针对性的措施，对该疫情进行合理有效地防控， 需要明确导致疾病爆发的根本原因。脉冲场凝胶电泳技术可以在看上去分散无关系的病例中寻找关键联系，追踪传染源，最终达到预防和控制疾病的目的。 分子分型目前（2012年），脉冲场凝胶电泳是国内外在分子流行病学研究中被广泛接受的方法之一，被认为是细菌分子生物学技术的“金标准”，与核糖体分型相比较，脉冲场凝胶电泳的分型能力更强。脉冲场凝胶电泳分型技术是现阶段霍乱流行病学调查中使用最普遍的分子分型方法。 分子流行病学研究脉冲场凝胶电泳技术由于比表型鉴定和Southern杂交技术在区分亚种时更具优势， 所以已经成为分子流行病......阅读全文
脉冲场凝胶电泳的应用领域
脉冲场凝胶电泳在生物基因分型、分子流行病学研究、细胞凋亡、追踪传染源、兽医流行病诊断辅助、食品和公共健康及染色体DNA分离等研究中有广泛应用。追踪传染源脉冲场凝胶电泳用于评估同一事件中不同来源菌株可能存在的关系，是溯源的有用技术之一。当疫情爆发时， 为了采取有针对性的措施，对该疫情进行合理有效地防控
脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳1）高分子量DNA琼脂糖凝胶块制备和加工1．收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。2．2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。3．稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞
脉冲场凝胶电泳实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 GTBETBE琼脂糖仪器、耗材 电泳仪实验步骤 1. 制备用于水平电泳的1%琼脂糖凝胶，放入电泳装置，其上覆盖以2~3 mm 的GTBE或TBE缓冲液。 2. 加入液体样品。装好蠕动泵用于电泳缓冲液循环。3. 对于微型凝胶调整循环速度至5~10 ml/min 对于
脉冲场凝胶电泳实验
实验概要了解脉冲场凝胶电泳（PFGE）的工作原理，并学习和掌握有关的操作技术。实验原理大分子DNA(一般长度超过20kb，在某些情况下，超过40kb)在电场作用下通过孔径小于分子大小的凝胶时，将会改变无规卷曲的构象，沿电场方向伸直，与电场平行从而才能通过凝胶。此时，大分子通过凝胶的方式相同，迁移率无
脉冲场凝胶电泳的应用
脉冲场凝胶电泳在生物基因分型、分子流行病学研究、细胞凋亡、追踪传染源、兽医流行病诊断辅助、食品和公共健康及染色体DNA分离等研究中有广泛应用。追踪传染源脉冲场凝胶电泳用于评估同一事件中不同来源菌株可能存在的关系，是溯源的有用技术之一。当疫情爆发时， 为了采取有针对性的措施，对该疫情进行合理有效地防控
横向交变场的脉冲场凝胶电泳
实验方法原理 Gardiner 等（1986; Gardiner and Patterson 1989) 使用置于垂直凝胶两侧的两组铂线电极的凝胶电泳装置以分离大的 DNA 片段。在这种横向交变场电泳（transverse alterna
向交变场的脉冲场凝胶电泳
Gardiner 等（1986; Gardiner and Patterson 1989) 使用置于垂直凝胶两侧的两组铂线电极的凝胶电泳装置以分离大的 DNA 片段。在这种横向交变场电泳（transverse alternating field electrophoresis, TAFE) 中 ，当
横向交变场的脉冲场凝胶电泳
实验方法原理 Gardiner 等（1986; Gardiner and Patterson 1989) 使用置于垂直凝胶两侧的两组铂线电极的凝胶电泳装置以分离大的 DNA 片段。在这种横向交变场电泳（transverse alternating field electrophoresis,
脉冲场凝胶电泳（PFGE）概述
脉冲场凝胶电泳（PFGE）的原理大致为:细菌包埋于琼脂块中,用适当的内切酶在原位对整个细菌染色体进行酶切,酶切片段在特定的电泳系统中通过电场方向不断交替变换及合适的脉冲时间等条件下而得到良好的分离。ＰＦＧＥ中内切酶的选用至关重要,所采用的内切酶常为寡切点酶(ｌｏｗｆｒｅｑｕｅｎｃｙｃｌｅａｖａｇｅｒ
脉冲场凝胶电泳（PFGE）概述
脉冲场凝胶电泳（PFGE）的原理大致为：细菌包埋于琼脂块中，用适当的内切酶在原位对整个细菌染色体进行酶切，酶切片段在特定的电泳系统中通过电场方向不断交替变换及合适的脉冲时间等条件下而得到良好的分离。PFGE中内切酶的选用至关重要，所采用的内切酶常为寡切点酶（low frequency cle
脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验
实验概要本实验利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离了大分子DNA。实验原理大分子DNA(一般长度超过20kb，在某些情况下，超过40kb)在电场作用下通过孔径小于分子大小的凝胶时，将会改变无规卷曲的构象，沿电场方向伸直，与电场平行从而才能通过凝胶。此时，大分子通过凝胶的方式相同，迁移率无差别(也称“极
脉冲场凝胶电泳实验——倒转电场
脉冲场凝胶电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的，可分离长至5Mb的DNA分子，其工作原理是DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间取决于它的大小。较小的分子重新定向较快，因而在凝胶中移动也较快，于是不同大小的分子被成功分离。实验材料DNA试剂、试剂盒GTBETBE琼脂糖仪器、耗材电泳
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更好的覆盖范围更广的系列标准是 λ 噬菌体 DNA
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更
箝位匀强电场的脉冲场凝胶电泳
实验方法原理 箝位匀强电场（contour-clamped homogeneous electric field, CHEF) 凝胶电泳中， 电场是由多个电极产生的。这些电极围绕水平凝胶呈四边形或六边形，其电位被箝制在顶先设定的水平（Ch
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更好的覆盖范围更广的系列标准是 λ 噬菌体 DNA 的系列串联体。后面介绍的具
箝位匀强电场的脉冲场凝胶电泳
箝位匀强电场（contour-clamped homogeneous electric field, CHEF) 凝胶电泳中， 电场是由多个电极产生的。这些电极围绕水平凝胶呈四边形或六边形，其电位被箝制在顶先设定的水平（Chuetal. 1986; Vollrath and Davis 1987;
箝位匀强电场的脉冲场凝胶电泳
实验方法原理 箝位匀强电场（contour-clamped homogeneous electric field, CHEF) 凝胶电泳中， 电场是由多个电极产生的。这些电极围绕水平凝胶呈四边形或六边形，其电位被箝制在顶先设定的水平（Chuetal. 1986; Vollrath and
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进，它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母染色体和酵母人工染色体（Y
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进，它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的
脉冲场凝胶电泳能用来进行微生物鉴定吗
你已经得到了这株菌是吗？形态，生理生化结合分子生物学鉴定即可。如果没有形态分类学基础，可以直接先做分子鉴定，比对后看大概属于哪个种后再详细分析。分子鉴定步骤：1.液体培养细菌，一般条件37度24小时即可。2.菌液PCR。扩增16SrDNA序列，所用引物网上都有，查到后，将序列发送生物公司合成。pcr
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。本实验来源「分子克隆实验指南第三
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。实验材料
脉冲电场凝胶电泳的定义
脉冲电场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis），在脉冲电场中，DNA分子的迁移方向随着电场方向的周期性变化而不断改变。
脉冲电场凝胶电泳的定义
PFGE：脉冲电场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis），在脉冲电场中，DNA分子的迁移方向随着电场方向的周期性变化而不断改变。在标准的PFGE中，第一个脉冲的电场方向在另一侧成45°夹角。由于琼脂糖凝胶的电场方向、电流大小及作用时间都在交替变化，使得DNA分子
脉冲场电泳系统的详细描述
脉冲场电泳系统能够提供可程序化的交变电场,用于分离数百万碱基大小的DNA分子,并且获得优化控制后高分辨的电泳谱带,脉冲场电泳系统包括脉冲电源,电泳槽(内置循环泵和温度传感器),恒温循环器,专用制胶器. ·电压梯度：最大9.5V/cm 增量 0.1v/cm ·最大电流：0.5A ·最大功率：
脉冲场电泳仪基本操作
电泳前半小时进行以下工作：1．检查冷凝系统，确认管道连接密闭，不漏气。2．在电泳槽内加入约2.2升合适的电泳液。3．接通主机和冷凝泵电源，开启主机开关，主机自检结束后，开启冷凝系统开关按“set temp”键调节需要的电泳温度，按“actual temp”显示实际温度。调节泵的速度为“100”左右。
交变脉冲电场凝胶电泳
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb的DNA。这是因为在琼脂糖凝胶中，DNA分子的有效直径超过凝胶孔径时，在电场作用下，迫使DNA变形挤过筛孔，而沿着泳动方向伸直，因而分子大小对迁移率影响不大。如此时改变电场方向，则DNA分子必须改变其构象，沿新的泳动方面伸直，而转向时间与DNA分子大小关系极为密