脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。实验材料 细胞或组织样品试剂、试剂盒 EDTAL 缓冲液磷酸缓冲盐液红细胞裂解缓冲液TE仪器、耗材 低熔点琼脂糖Sorvall SS-34 或相当的转头纱布玻璃匀浆器细胞计数板LeucoPrep 细胞分离管研钵和研杵水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液EDTA ( 0.5 mol/L, pH 8.0)L 缓冲液（0.1 mol/L EDTA (pH 8.0)，0.01 mol/L Tris-Cl（pH 7.6)，0.02 mol/L NaCl，4℃ 贮存）含蛋白酶 K 和十二烷基肌氨酸钠（Sarkosyl) 的 L缓冲液磷酸缓冲盐液（PBS......阅读全文
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。本实验来源「分子克隆实验指南第三
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明：从胞核制备 DNA 没有优点，因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。实验材料
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进，它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母染色体和酵母人工染色体（Y
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
实验方法原理 制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进，它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母
从哺乳动物细胞或组织分离DNA
1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次，用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中，将细胞悬液转移到冰浴的离心管中，用 1 mlTBS 冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。于 4℃ 以
纯化DNA实验_从哺乳动物细胞或组织分离DNA
基因纯化，可以用于（1）对大量提取的质粒DNA进行纯化；（2）常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。实验材料细胞试剂、试剂盒TBS抽提缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择的液体缓冲液。
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择
哺乳动物－DNA－的快速分离
根据本方案制备的哺乳动物 DNA 约 20~50 kb，适于作 PCR 反应的模板。DNA 产量在 0.5 到 3.0 μg/mg 组织之间变化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理根据本方案制备的哺乳动物 DNA 约 20~50 k
哺乳动物－DNA－的快速分离
实验方法原理 根据本方案制备的哺乳动物 DNA 约 20~50 kb，适于作 PCR 反应的模板。DNA 产量在 0.5 到 3.0 μg/mg 组织之间变化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。实验材料 无 DNase 的 RNase蛋白酶 K哺乳动物组织或全血试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液乙
哺乳动物－DNA－的快速分离
实验方法原理 根据本方案制备的哺乳动物 DNA 约 20~50 kb，适于作 PCR 反应的模板。DNA 产量在 0.5 到 3.0 μg/mg 组织之间变化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。
哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠胚胎干细胞（Choi et al. 1993) 时是非
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠胚胎干细胞（Choi et al. 1993) 时是非常有效的。本实验来源「
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠
脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳1）高分子量DNA琼脂糖凝胶块制备和加工1．收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。2．2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。3．稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞
从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改进而成，是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每个孔产生的基因组 DNA 足以做数次聚合酶链反应（PCR) 或者一次 Southern 杂交。对于制备用于 PCR 反
从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA
本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改进而成，是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每个孔产生的基因组 DNA 足以做数次聚合酶链反应（PCR) 或者一次 Southern 杂交。对于制备用于 PCR 反应的基因组 DNA 的最佳
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 D
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。 实验材料
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。实验材料 DNA 大小标准基因组 DNA试剂、试剂盒 溴化乙锭酚：氯仿仪器、耗材 水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液溴化
动物组织中DNA的制备
（一）原 理DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合，形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后，这两种核蛋白将混杂在一起。因此，要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影响蛋白酶 K 的活性。本实
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质
动物细胞基因组DNA的制备
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞（如HeLa细胞）中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组
脉冲场凝胶电泳实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 GTBETBE琼脂糖仪器、耗材 电泳仪实验步骤 1. 制备用于水平电泳的1%琼脂糖凝胶，放入电泳装置，其上覆盖以2~3 mm 的GTBE或TBE缓冲液。 2. 加入液体样品。装好蠕动泵用于电泳缓冲液循环。3. 对于微型凝胶调整循环速度至5~10 ml/min 对于