为什么电泳的一个泳道出现两条条带
应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多，比如引物设计的特异性不好，或者退火温度不合适等。......阅读全文
Western－Blot归一化看家蛋白与总蛋白
做Western Blot的小伙伴，是不是还在为归一化方法而纠结呢？今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。 看家蛋白归一化 使用看家蛋白的最大缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化，必须先花费时间和精力来验证内参的选择。 使用看家
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义和原理
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是根据寡核苷酸的大小来分离，因此可将全长产物与不完整的短分子分开。电泳时通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸，电泳后在紫外灯下定位寡核苷酸条带，将长度正确的寡核苷酸从凝胶上切下。原理：蛋白质或多肽与SDS结合，经热变性和二硫键的还原，形成所带负电荷相对一致的非折叠
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的相关介绍
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是根据寡核苷酸的大小来分离，因此可将全长产物与不完整的短分子分开。电泳时通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸，电泳后在紫外灯下定位寡核苷酸条带，将长度正确的寡核苷酸从凝胶上切下。原理：蛋白质或多肽与SDS结合，经热变性和二硫键的还原，形成所带负电荷相对一致的非
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液常见问题
问题 原因 对策 背景高 SDS及盐类等杂质未除尽 电泳结束后，取胶放入双蒸水或去离子
western－blot－显影结果连成一条线是什么原因
western blot 显影结果连成一条线很有可能是1.上样量太大了——将上样量至少减一半2.拔掉梳子后，你是否将上样孔整理漂亮了——将孔与孔之见的胶检查下3.曝光时，在胶片与膜放在一起时是否一次压下，未有任何相对位移——一定要一次压下4.建议转膜结束后用丽春红之类的做一下非特异的蛋白染色，看下其
半干电转印法
实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜，然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间，采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜，但使用100次后必须更换)制成的，也可以是铂金的(这种子板价格较贵，但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至
基于－PCR－的基因分型实验——无放射性的多重分析SSLP
实验材料模板DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液混合引物Taq DNA 聚合酶轻矿物油Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen）2X 甲酰胺载样缓冲液M13序列泳道内标TBE 缓冲液预杂交液地高辛标记的探针Oligo 清洗缓冲液阻滞液碱性磷酸盐连接的抗地高辛Fab片段检测
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠胚胎干细胞（Choi et al. 1993) 时是非
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠
安捷伦靶向序列富集系统支持样本条形码标记及索引
进一步提升测序效率，降低测序成本高达16倍 2010年2月24日，安捷伦科技公司(纽约证交所：A)在基因组生物学技术进展年会 (AGBT)宣布：安捷伦SureSelect 靶向序列富集系统，可以根据用户所选择的不同新一代测序平台，实现每泳道12-16个样本的并行DNA测序，从而降低测序成本
蛋白质测定仪与两种传统测定法相比优势尽显
随着社会经济的发展以及人们生活水平的提高，“健康”成为了我国大部分百姓的生活指标。而其中，饮食健康较为重点，如今的消费者不仅要求饮食的安全性，对食物的营养均衡更是有极大的追求。正如蛋白质含量，因其是人体不可或缺的营养物质，所以在许多食物营养价值中都占据着举足轻重的地位。因此，现如今有
Wes全自动蛋白印迹技术助力微量蛋白样品的检测
科学家经常通过蛋白质的表达及修饰情况来揭示对应样品的生理或病理状态。WesternBlot是进行蛋白检测的最经典技术。核酸检测对样品量的要求极低，因为DNA或RNA具备体外扩增的性质。而蛋白质检测只能受限于能够获得的原始样品量。传统WesternBlot每个泳道所需的蛋白总量达10-100μg，
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案4
技术和方案4 酵母蛋白质的抽提试剂、试剂盒NaOHPAGE 样品缓冲液Tris-HCl甘油β-巯基乙醇溴酚蓝实验步骤1.从液体培养物中或用细菌接种环在平板表面刮菌，收集大约 2.5 OD的细胞量（大约 2.3 mg 湿重）。将细胞重悬于 100ul 蒸馏水中，加入 100ul O.2mol/L Na
关于免疫固定电泳技术的概述
免疫固定电泳技术是一种区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术。基本原理是待测蛋白质在凝胶介质上经电泳分离后，将抗血清加上己分离的蛋白质泳道上或将已加抗血清的滤纸贴于其上。经孵育后，在适当位置产 生抗原抗体复合物并沉淀下来。 固定后的电泳凝胶在洗脱液中漂洗除去未结合的蛋白质，仅保留抗原抗体复合物，经
电泳分离技术－鬼带现象的形成原因
“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时,常会出现在泳道顶端(有时在浓缩胶中)的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀,主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性,致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合,聚合成大分子,其分子量要比目标条带大,有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相
免疫固定电泳的原理有哪些？
可用于各种蛋白质的鉴定。原理：将待检样品在凝胶板上作区带电泳，将蛋白质分离成不同区带，然后在其上覆盖抗血清，当抗血清与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合，便形成抗原抗体复合物而沉淀。最后通过漂洗和染色，并与蛋白质参考泳道对照分析，可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。 本法可用于迁移率近似的蛋白和M
什么是“鬼带”？如何处理？
“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相
聚丙烯酰氨凝胶电泳出现鬼带的原因分析和处理办法
“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相
杆状病毒系统蛋白质表达实验
基本方案 小规模表达 辅助方案1 蛋白质生产高峰期的确定 辅助方案2重组蛋白的代谢标记 基本方案2 重组蛋白大规模生产 实验方法原理
杆状病毒系统蛋白质表达实验——小规模表达
实验方法原理分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7 水平转
杆状病毒系统蛋白质表达实验
实验方法原理 分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料 草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒 PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7
蛋白质N端测序样品要求
检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 一、 蛋白质N端测序的主要应用: 1.样品：蛋白质，多肽样品的氨基酸序列测定 2.优势：能连续测定 60 个以上的氨基酸序列 3.来源:天然提取（动物/植物/微生物）；合成多肽；重组蛋白等 二、 样品要求:
蛋白质N端测序样品要求
检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 一、 蛋白质N端测序的主要应用:样品：蛋白质，多肽样品的氨基酸序列测定2.优势：能连续测定 60 个以上的氨基酸序列3.来源:天然提取（动物/植物/微生物）；合成多肽；重组蛋白等二、 样品要求:纯度:>95（基于摩尔数）2.含量:50-100pm
简述DNA测序的测序规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅
DNA测序的规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅
DNA测序技术的测序的规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。在可以区分长度仅差一个核苷酸
串联体化实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签连接酶实验步骤 实验方案 A 和 B1.将切下并纯化的双标签连接为串联体:2.在 16t℃ 下孵育 2 h。3.将双标签串联体上取样于 8% 的聚丙稀酰胺凝胶的一个泳道，用 100bpladder 作为分子量标准，在室温、80℃ 电泳 3 h。4.EB
过载染色－SDS－凝胶扫描法估测纯度实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液实验步骤 试剂考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液(配方，见“试剂的配制”，PP.184~189)操作程序1) 按实验 4(pp.159~160) 所述，取一较纯蛋白质的若干稀释的样品（约含 1、3、10 和 30ug 的总蛋白), 于小型 SDS-聚丙
串联体化实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 连接酶 实验步骤 实验方
DNA测序技术的测序规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。在可以区分长度仅差一个核苷酸