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iPS细胞的制备方法

最初由山中伸弥团队发现的iPS细胞制备(诱导)方法是以通过慢病毒载体转入数个转录因子为核心,在导入四种转录因子后,小鼠的成纤维细胞经过一定时间就会转变为状态类似于胚胎干细胞的iPS细胞。使用这种方法制备iPS细胞,首先需要一个特殊的转基因小鼠品系。这种转基因小鼠的Fbx15基因下游转入了一个βgeo元件。该元件由β-半乳糖苷酶基因和新霉素抗性基因(NeoR)融合而成。如果基因表达环境与胚胎干细胞相似,Fbx15基因就会表达。而在一般的成体细胞中,Fbx15基因表达处于关闭状态。对这种品系的转基因小鼠来说,细胞如果处于一种与胚胎干细胞相似的状态,Fbx15基因下游的βgeo元件也随Fbx15基因会一同表达,βgeo元件中的NeoR基因会使这种细胞获得对药物G-418的抗性,而一般的体细胞仍然对G-418敏感。加入G-418后,对G-418敏感的成体细胞会死亡,而与胚胎干细胞状态相似的细胞因具有G-418抗性,会在筛选中存活[1][......阅读全文

iPS细胞的制备方法

最初由山中伸弥团队发现的iPS细胞制备(诱导)方法是以通过慢病毒载体转入数个转录因子为核心,在导入四种转录因子后,小鼠的成纤维细胞经过一定时间就会转变为状态类似于胚胎干细胞的iPS细胞。使用这种方法制备iPS细胞,首先需要一个特殊的转基因小鼠品系。这种转基因小鼠的Fbx15基因下游转入了一个βgeo

日本开发出iPS细胞大量制备新方法

  据日本媒体4月25日报道,京都大学中迁宪夫教授等与日产化学工业组成的研究小组开发成功利用功能性聚合物大批量制备iPS细胞和ES细胞的新方法。   目前,iPS细胞制备主要有粘结培养法和悬浮培养法。粘结培养法不适合大量制备;利用悬浮培养法制备时,因细胞块的大小不均,易导致细胞坏死和自我分化。新方

iPS细胞操作方法

操作规程一、复苏1、事先用Matrix进行培养皿/板的包被处理。平时Matrix保存在-20℃,使用之前放在4℃冰箱或冰上进行解冻。待Matrix解冻后,按1:100的比例迅速用PBS液体稀释。按6孔板每孔加1ml,150px皿加2ml,250px皿加3ml的量加入,加入后迅速摇动皿/板,使加入的M

iPS细胞的性质介绍

iPS细胞性质与胚胎干细胞相似,但在一些方面又存在差异。培养iPS细胞的环境与胚胎干细胞相似。传统的培养方法是将iPS细胞培养在经丝裂霉素或射线灭活的小鼠胚层成纤维细胞(MEF)组成的饲养层(feeder)上,并使用含有血清及白血病抑制因子(LIF)的培养基中。目前亦已有方法可以将iPS细胞培养在化

iPS细胞面临的问题

iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦,也带来了新的挑战,细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景,然而,未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题:第1,效率问题。目前,诱导产生iPS细胞的率仍然很低,这与基因导人的方式整合位点

iPS细胞建立的过程

(1)分离和培养宿主细胞;(2)通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的基因导入宿主细胞;(3)将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并于ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进重编程;(4)出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定(细胞形态、表观遗传学、体外分

新方法或可鉴别iPS细胞质量

  诱导多功能干细胞(iPS细胞)能够发育成各种组织和器官,在医疗领域有广泛应用前景。但部分iPS细胞存在癌变风险,日本一项新研究说,有种新方法能鉴定iPS细胞的质量,有助选出适用的iPS细胞。   京都大学iPS细胞研究所教授山中伸弥率领的研究小组在新一期美国《国家科学院学报》网络版上报告说,他

Nature:iPS细胞的活体生成

  Manuel Serrano 及同事首次发现,体细胞被经典“Yamanaka因子”Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc重新编程为具有多能性的过程可以在活体中实现。对从小鼠的胃、小肠、胰腺和肾脏细胞在活体中诱导生成的“诱导多能干”(iPS) 细胞所做分析显示,它们比在体外生成的iPS细

日开发出用iPS细胞进行安全治疗的方法

  诱导多功能干细胞(iPS细胞)拥有发育成各种细胞的能力,但也存在发育成癌细胞的危险,而日本研究人员日前开发的一种新方法解决了这个难题。   日本庆应义塾大学和京都大学研究人员在新一期美国《国家科学院学报》上发表报告说,他们先调查iPS细胞发育成癌细胞的风险,发现了一种安全性很高

日本拟建iPS细胞库

日本京都大学教授山中伸弥5月11日在京都举行的诱导多功能干细胞(iPS细胞)国际研讨会上透露了日本建iPS细胞库的计划。 据日本《每日新闻》5月12日报道,日本规划中的细胞库将储存iPS细胞以及由其分化出来的各种脏器细胞。据山中伸弥介绍,培养iPS细胞相当耗费时日。比如,用于治疗脊髓损伤时,在患者受