iPS细胞的制备方法

最初由山中伸弥团队发现的iPS细胞制备(诱导)方法是以通过慢病毒载体转入数个转录因子为核心,在导入四种转录因子后,小鼠的成纤维细胞经过一定时间就会转变为状态类似于胚胎干细胞的iPS细胞。使用这种方法制备iPS细胞,首先需要一个特殊的转基因小鼠品系。这种转基因小鼠的Fbx15基因下游转入了一个βgeo元件。该元件由β-半乳糖苷酶基因和新霉素抗性基因(NeoR)融合而成。如果基因表达环境与胚胎干细胞相似,Fbx15基因就会表达。而在一般的成体细胞中,Fbx15基因表达处于关闭状态。对这种品系的转基因小鼠来说,细胞如果处于一种与胚胎干细胞相似的状态,Fbx15基因下游的βgeo元件也随Fbx15基因会一同表达,βgeo元件中的NeoR基因会使这种细胞获得对药物G-418的抗性,而一般的体细胞仍然对G-418敏感。加入G-418后,对G-418敏感的成体细胞会死亡,而与胚胎干细胞状态相似的细胞因具有G-418抗性,会在筛选中存活[1][......阅读全文

iPS细胞的制备方法

最初由山中伸弥团队发现的iPS细胞制备(诱导)方法是以通过慢病毒载体转入数个转录因子为核心,在导入四种转录因子后,小鼠的成纤维细胞经过一定时间就会转变为状态类似于胚胎干细胞的iPS细胞。使用这种方法制备iPS细胞,首先需要一个特殊的转基因小鼠品系。这种转基因小鼠的Fbx15基因下游转入了一个βgeo

日本开发出iPS细胞大量制备新方法

  据日本媒体4月25日报道,京都大学中迁宪夫教授等与日产化学工业组成的研究小组开发成功利用功能性聚合物大批量制备iPS细胞和ES细胞的新方法。   目前,iPS细胞制备主要有粘结培养法和悬浮培养法。粘结培养法不适合大量制备;利用悬浮培养法制备时,因细胞块的大小不均,易导致细胞坏死和自我分化。新方

iPS细胞操作方法

操作规程一、复苏1、事先用Matrix进行培养皿/板的包被处理。平时Matrix保存在-20℃,使用之前放在4℃冰箱或冰上进行解冻。待Matrix解冻后,按1:100的比例迅速用PBS液体稀释。按6孔板每孔加1ml,150px皿加2ml,250px皿加3ml的量加入,加入后迅速摇动皿/板,使加入的M

iPS细胞面临的问题

iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦,也带来了新的挑战,细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景,然而,未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题:第1,效率问题。目前,诱导产生iPS细胞的率仍然很低,这与基因导人的方式整合位点

iPS细胞建立的过程

(1)分离和培养宿主细胞;(2)通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的基因导入宿主细胞;(3)将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并于ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进重编程;(4)出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定(细胞形态、表观遗传学、体外分

iPS细胞的性质介绍

iPS细胞性质与胚胎干细胞相似,但在一些方面又存在差异。培养iPS细胞的环境与胚胎干细胞相似。传统的培养方法是将iPS细胞培养在经丝裂霉素或射线灭活的小鼠胚层成纤维细胞(MEF)组成的饲养层(feeder)上,并使用含有血清及白血病抑制因子(LIF)的培养基中。目前亦已有方法可以将iPS细胞培养在化

新方法或可鉴别iPS细胞质量

  诱导多功能干细胞(iPS细胞)能够发育成各种组织和器官,在医疗领域有广泛应用前景。但部分iPS细胞存在癌变风险,日本一项新研究说,有种新方法能鉴定iPS细胞的质量,有助选出适用的iPS细胞。   京都大学iPS细胞研究所教授山中伸弥率领的研究小组在新一期美国《国家科学院学报》网络版上报告说,他

iPS细胞建立的过程介绍

(1)分离和培养宿主细胞;(2)通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的基因导入宿主细胞;(3)将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并于ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进重编程;(4)出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定(细胞形态、表观遗传学、体外分

-Nature:iPS细胞的活体生成

  Manuel Serrano 及同事首次发现,体细胞被经典“Yamanaka因子”Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc重新编程为具有多能性的过程可以在活体中实现。对从小鼠的胃、小肠、胰腺和肾脏细胞在活体中诱导生成的“诱导多能干”(iPS) 细胞所做分析显示,它们比在体外生成的iPS细

日开发出用iPS细胞进行安全治疗的方法

  诱导多功能干细胞(iPS细胞)拥有发育成各种细胞的能力,但也存在发育成癌细胞的危险,而日本研究人员日前开发的一种新方法解决了这个难题。   日本庆应义塾大学和京都大学研究人员在新一期美国《国家科学院学报》上发表报告说,他们先调查iPS细胞发育成癌细胞的风险,发现了一种安全性很高

日本拟建iPS细胞库

日本京都大学教授山中伸弥5月11日在京都举行的诱导多功能干细胞(iPS细胞)国际研讨会上透露了日本建iPS细胞库的计划。 据日本《每日新闻》5月12日报道,日本规划中的细胞库将储存iPS细胞以及由其分化出来的各种脏器细胞。据山中伸弥介绍,培养iPS细胞相当耗费时日。比如,用于治疗脊髓损伤时,在患者受

iPS细胞缓步走向临床

  2006年,日本科学家山中伸弥用4种基因将小鼠体细胞在体外重编程为诱导多能干细胞(即iPS细胞)。从此,iPS细胞研究改变了基础研究的面貌,山中伸弥也因“在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献”,成为2012年诺贝尔生理或医学奖共同得主。   iPS细胞与胚胎干细胞一样,在体内可分化为3个胚层来源

IPS细胞培养过程

诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS cells)最初是日本人山中申弥(Shinya Yamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子(Oct4, Sox2, Klf4 和c-Myc)的组合转入分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚

关于iPS细胞的基本研究介绍

  iPS细胞的出现,在干细胞研究领域、表观遗传学研究领域以及生物医学研究领域都引起了强烈的反响,这不仅是因为它在基础研究方面的重要性,更是因为它为人们带来的光明的应用前景。  在基础研究方面,它的出现,已经让人们对多能性的调控机制有了突破性的新认识。细胞重编程是一个复杂的过程,除了受细胞内因子调控

关于iPS细胞建立的过程介绍

  (1)分离和培养宿主细胞;  (2)通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的基因导入宿主细胞;  (3)将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并于ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进重编程;  (4)出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定(细胞形态、表

iPS细胞与胚胎干细胞的关系

众所周知,胚胎干细胞在所有干细胞中,拥有着独一无二的地位。胚胎干细胞是一种高度未分化细胞,它具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。但是同时也面临一些问题,对于胚胎干细胞来说,胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式,任何一个胚胎都是有机会发育成完整的个体,进行胚胎干细胞研究就必

iPS细胞抗癌新进展

  日本京都大学诱导多能干细胞(iPS细胞)研究所近日宣布,该所研究人员利用iPS细胞,培养出了可定向攻击癌细胞的“杀手T细胞”,朝着癌症免疫疗法实用化更进一步。  T细胞是一种免疫细胞,是免疫系统与病毒和癌细胞等作战的主力,也被称为“杀手T细胞”。京都大学研究人员早在几年前就成功利用iPS细胞培养

PNAS:iPS细胞成功生成软骨

  Duke 大学医学院的研究人员利用诱导多能干细胞iPS生成了软骨,这种软骨能够成功生长并且可以进行分选,有望用于软骨组织修复。通过这一模式人们还可以得出患者个人的疾病研究模型,用于关节损伤和关节炎等疾病的研究。文章于十月二十九日提前发表在美国国家科学院院刊PNAS杂志的网站上。   诱导多

国际iPS细胞库正在筹建

  克隆羊多利的缔造者、英国科学家伊恩·维尔穆特日前在日本表示,英美日法等国正联合筹建一个国际iPS细胞库,推进iPS细胞在再生医疗领域的应用。   iPS细胞的全称是诱导多能干细胞,是通过对成熟细胞进行“重新编程”培育出的干细胞,拥有与胚胎干细胞相似的分化潜力,有望用于培育人体组织和器官,治疗多

iPS细胞诱导中会出现细胞克隆

  记者近日从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员裴端卿、副研究员陈捷凯等准确定位了多能干细胞诱导过程中一个极为重要的障碍,破解了产生障碍的原因并找到了清除这个障碍的办法。该研究历时4年,成果12月2日在线发表在《自然―遗传学》上。   随着2012年度诺贝尔生理或医学奖的揭晓,iPSc

iPS细胞与胚胎干细胞的功能介绍

iPS细胞与胚胎干细胞拥有相似的再生能力,理论上可以分化为成体的所有器官、组织。而相比胚胎干细胞,iPS细胞面临的伦理道德争议较小,且应用该技术可以产生基因型与移植受体完全相同的干细胞,规避了排异反应的风险,因而iPS细胞在一定程度上冲击了胚胎干细胞在再生医学中的地位,被认为在再生医学及组织工程方面

iPS细胞与胚胎干细胞的功能差异

iPS细胞与胚胎干细胞拥有相似的再生能力,理论上可以分化为成体的所有器官、组织。而相比胚胎干细胞,iPS细胞面临的伦理道德争议较小,且应用该技术可以产生基因型与移植受体完全相同的干细胞,规避了排异反应的风险,因而iPS细胞在一定程度上冲击了胚胎干细胞在再生医学中的地位,被认为在再生医学及组织工程方面

细胞膜的制备方法实验——从悬浮细胞中制备细胞膜

实验材料胶原酶试剂、试剂盒EDTAHBSS胶原酶溶液阳离子硅胶贮存液仪器、耗材离心机实验步骤一、用胶原酶/EDTA 释放细胞1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理(1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液:5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS,不含二价阳离子。(2) 在单层细胞上加 1%

多能干细胞(ES/iPS)冻存和复苏方法

多能干细胞(ES/iPS)冻存是干细胞扩增传代过程中重要的一环,但是多能干细胞不同于普通细胞系,其增殖扩增过程中需要聚团生长,为保持其细胞活性,不建议单细胞传代。而且使用血清+DMSO冻存方法,不能很好的保持细胞活性,且复苏细胞成活率较低。本文就重点介绍多能干细胞进行冻存以及解冻的标准化步骤。介绍使

多能干细胞(ES/iPS)冻存和复苏方法

多能干细胞(ES/iPS)冻存是干细胞扩增传代过程中重要的一环,但是多能干细胞不同于普通细胞系,其增殖扩增过程中需要聚团生长,为保持其细胞活性,不建议单细胞传代。而且使用血清+DMSO冻存方法,不能很好的保持细胞活性,且复苏细胞成活率较低。本文就重点介绍多能干细胞进行冻存以及解冻的标准化步骤。介绍使

日用鼠iPS细胞培育出角膜细胞

日本科学家成功用实验鼠的诱导多功能干细胞(iPS细胞)培育出了鼠角膜上皮细胞,这项成果将有助于解决为患者移植他人角膜后出现的排异反应问题。 据日本《读卖新闻》报道,日本庆应大学教授坪田一男等研究人员向实验鼠的iPS细胞内添加特殊的蛋白质等物质并加以培养,从而使iPS细胞分化成另一种细胞。 分化出

科学家利用皮肤细胞获得iPS细胞

  据报道,圣保罗大学医疗系的科研人员最近取得了利用改造皮肤基因获取诱导多功能干细胞(iPS细胞)的科研成果。  该科研项目的指导教师、圣保罗大学医疗系的迪玛斯·塔德乌·科瓦斯评价这项科研成果时说:“这项研究成果使巴西处于世界科研的突出地位。”这项由比尔基尼亚·皮坎波和卡斯特罗共同进行的博

iPS细胞有助治疗“渐冻症”

  医学界一直对俗称“渐冻症”的肌萎缩侧索硬化症束手无策。日本京都大学最新研究结果说,利用诱导多功能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞,然后移植给渐冻症实验鼠,能将其寿命延长约10天。   “渐冻症”是运动神经元病的一种,患者逐渐丧失运动机能甚至瘫痪,其中最著名的是英国科学家霍金。这种病被认为与神经胶

PNAS:iPS细胞治疗获重要进展

  青光眼是世界上最常见的致盲原因之一,属于致盲性的神经退行性疾病。这种疾病的风险因子包括眼内压升高(IOP)、年龄增大、遗传学变异等。目前人们主要通过眼药水、激光手术或传统手术来治疗青光眼。  爱荷华大学的研究团队在美国国家科学院院刊PNAS杂志上发表文章指出,干细胞有望修复青光眼的“排水系统”,

红细胞保养液的制备方法

阿氏液(Alsever):即红细胞保养液枸橼酸钠(5H2O) 0.80g枸橼酸(H2O) 0.055g葡萄糖 2.05g氯化钠 0.42g双蒸水 加至 100 ml将以上试剂加热溶解于双蒸水中,调整pH至6.8,115℃灭菌10min,4℃保存备用。2. 0.5% 鸡红细胞制备方法先用灭菌注射器吸取