传代细胞的介绍
幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养,而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞,它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂。......阅读全文
细胞传代
实验概要去除死细胞和生长状况不佳的细胞,获得下一代细胞实验原理游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态,细胞质回缩,胞体呈圆球形。贴壁期:细胞附着于底物上,游离期结束。血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白,这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子吸附于底物,悬浮细胞再与吸附因子附着。潜伏期:
细胞传代实验
细胞培养技术 消化法 实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长
悬浮细胞传代
实验方法原理从悬浮细胞培养物中吸取样品,细胞计数,接种适量的悬浮细胞至新培养瓶的新鲜培养基中,使细胞浓度与开始培养时一致。实验材料起始培养物仪器、耗材生长培养基吸管离心管培养瓶搅拌瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤1. 准备好超净台,将试剂及材料放于超净台上准备开始实验。2
细胞传代实验
细胞培养技术 消化法 实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长
悬浮细胞传代
实验方法原理 从悬浮细胞培养物中吸取样品,细胞计数,接种适量的悬浮细胞至新培养瓶的新鲜培养基中,使细胞浓度与开始培养时一致。 实验材料 起始培养物
细胞传代实验
实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。实验材料 细胞试剂、试剂盒 D-Hanks液小牛血清RPMI1640双抗胰蛋白酶EDTANHCl
传代细胞的概述
传代细胞是适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞。例如幼年动物的肾、肺等组织的细胞是比较容易培养的,而神经细胞非常难培养了。幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养,而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞,它与原代细胞具有相同核型。
传代细胞的介绍
幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养,而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞,它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂。
传代细胞的种类
按照常规的组织学分类方法,脊椎动物和人体细胞类型约有200余种。 这些细胞在人体中呈现有序的空间分布。 细胞是人体的结构和功能单位。共约有40万--60万亿个,细胞的平均直径在10--20微米之间。 除成熟的红血球外,所有细胞都有一个细胞核,是调节细胞作用的中心。 最大的是成熟的卵细胞,
原代细胞传代技术
一、贴壁细胞的消化法传代1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。4、用吸管将贴壁的细胞吹打
细胞技术专题:细胞传代实验
根据细胞生长的恃点,传代方法有3种:悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)、贴壁生长细胞传代。实验方法细胞培养技术 消化法 实验方法原理培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代
传代细胞培养实验
实验方法原理 当初代培养成功,细胞生长增殖形成单层细胞后,进而扩展汇合,占满一切空间,此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代,细胞会因增殖过度,培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。实验材料 细胞试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶EDTA培养液
单层细胞的传代
实验方法原理去除培养基,加人胰蛋白酶短暂作用,孵育,以培养基分散细胞,计数,稀释并再接种。实验材料A549细胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS试剂、试剂盒70%乙醇喷壶仪器、耗材生长培养基吸管离心管培养瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤1. 准备超净工作台,将试剂及材
单层细胞的传代
实验方法原理 去除培养基,加人胰蛋白酶短暂作用,孵育,以培养基分散细胞,计数,稀释并再接种。 实验材料 A549细胞 WI-38
单层细胞的传代
实验方法原理去除培养基,加人胰蛋白酶短暂作用,孵育,以培养基分散细胞,计数,稀释并再接种。实验材料A549细胞 WI-38
细胞传代培养
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。二、材料和试剂1、细胞:贴壁细胞株2、试剂
单层细胞的传代
实验方法原理 去除培养基,加人胰蛋白酶短暂作用,孵育,以培养基分散细胞,计数,稀释并再接种。实验材料 A549细胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS试剂、试剂盒 70%乙醇喷壶仪器、耗材 生长培养基吸管离心管培养瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤 1. 准备超净工作台,
原代细胞传代基本技术
1. 选用原代细胞生长状态好(90-95%),生长数量大于5×10⁵进行传代。2. 吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2次。3. 3ml细胞消化液加入细胞培养瓶,轻轻摇动,使细胞消化液覆细胞培养瓶底。(建议使用赛奥斯的原代细胞消化液。)4. 细胞培养瓶置于5%CO2
传代细胞培养实验
实验方法原理 当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒,如果不及时的减少细胞密度,细胞将逐渐衰老死亡
关于悬浮细胞的传代
关于悬浮细胞的传代 1. 悬浮细胞无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。通常有两种方法:直接给带传代的培养瓶中补充一定量的新鲜培养基,然后分装。先通过离心弃掉营养匮乏的旧培养基,再用适量的新鲜培养基重悬细胞沉淀。2. 至于何时传代,准确的是根据细胞密度来确定。
如何传代贴壁细胞?
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞成单
传代细胞的培养步骤
1、附着型胞(adherentcell)(1)吸掉旧培养液。(2)用D-PBS洗涤细胞一至二次。(3)加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用数分钟,于倒立显微镜下观察,当细胞将要分离而呈现圆粒状时,吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去tryps
细胞传代培养
实验概要 细胞生长至高密度时,即须分殖至新的培养瓶中,一般稀释比例为1:3 至1:6,依细胞种类而异。实验材料 无菌磷酸生理缓冲液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,GibcoBRL 21600-010)
贴壁细胞传代方法
多数细胞系和原代细胞都会以一种单层的形式生长(单层细胞)或者覆盖在玻璃或经处理的塑料物体表面。为了保持细胞的健康与活跃增殖,通常需要对细胞进行有规律的传代。最常见的传代方法是使用蛋白酶如胰酶或胶原酶破坏细胞间以及细胞与培养介质间的连接。当细胞被解离成单细胞悬液时,再将它们稀释并分发至新的培养容器中。
如何传代贴壁细胞?
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞成单
细胞传代实验_消化法
实验方法原理用胰蛋白酶消化细胞,用于贴壁细胞传代培养。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶酒精PBS仪器、耗材超净工作台酒精灯酒精棉球培养箱显微镜吸管离心管离心机实验步骤一、传代前准备 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精
传代细胞培养实验
实验方法原理当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒,如果不及时的减少细胞密度,细胞将逐渐衰老死亡。因此需要将培养物按照比例重新接种到新的培养器皿(瓶)内进行
细胞传代、培养的方法
实验原理:将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时 也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养
原代细胞如何传代接种?
原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的
细胞传代实验——细胞培养技术
细胞传代实验可用于:(1)医学研究;(2)提供细胞种。(3)进行细胞生物学研究。实验方法原理培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。实验材料细胞试剂、