华人夫妇颠覆性发现，桥接不同代谢通路的酶
Salk研究所的科学家通过拟南芥研究，发现了生物直接调控化学反应以快速协调器官生长的机制，颠覆了机体各部分如何协调生长的传统观点，为增加农作物产量和开发代谢疾病新疗法带来了重要启示。 代谢是驱动机体内所有基础生命过程(生长、繁殖、消化、感知等)的化学反应，这些反应由酶控制着。迄今为止，人们一般认为各个代谢功能依赖着完全不同的酶通路，而且主要关注的是调节这些通路的基因开关情况。 而这项研究显示，本被认为是完全由基因开关控制的两条不同通路，其实通过一种酶桥接起来，可以实现协同调控。机体通过这两条通路对环境改变进行应答，合成不同激素以快速调整相应部分的生长。由此，单个环境事件通过两种激素同时快速调节了不同组织的生长。该研究发表在本周的Nature Chemical Biology杂志上。 “基因是细胞合成特定酶的指南，但对于应答光照等环境改变来说，要等多种基因来协调基本激素合成就有点太慢了，” 霍华德......阅读全文
NRG1基因编码蛋白质的结构和作用
该基因编码的蛋白质是一种膜糖蛋白，可调节细胞信号传导，并在多器官系统的生长和发育中起到关键作用。通过选择性启动子的使用和剪接，该基因产生了一种不同亚型的特殊变体。这些亚型以组织特异性的方式表达，在结构上有显著差异，分为I型、II型、III型、IV型、V型和VI型。这种基因的失调与癌症、精神分裂症和双
同基因合子蛋白质C缺乏症的简介
同基因合子蛋白质C缺乏症是一种可能致命的罕见疾病，严重缺乏蛋白质C会导致血栓；在皮肤会出现紫斑或坏疽，容易发生于四肢，也可能出现于臀部、腹部、阴囊及头皮。 蛋白质C为肝脏生合成的醣蛋白，具有抗凝血的功能，在人体血液中循环时，为不具活性的酶原（inactive zymogen）。当蛋白质C在血管
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子质
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
关于转座酶基因的作用的介绍
在基因组进化过程中，转座酶基因的作用在许多方面起作用。最明显的效应是转座子能够启动重组，最后导致基因组重排。这种作用与这些转座因子的转座活性无关，而只是由于染色体上有某一转座因子的几份拷贝，于是在同一染色体或不同染色体上有着相同转座因子序列的部位之间发生重组。重组的结果可能会缺失若干个有重要功能
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
基因工程的载体和工具酶2
2、pUC质粒载体1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。结构：（1）来自于pBR322的Ori（2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。但核苷酸序列发生了变化（3） LacZ′基因编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末端。（4）MCS区段是一段用于插入外
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒
查尔酮合成酶基因的克隆
一、实验目的与意义 学习PCR操作技术，利用基因全长引物，扩增出查尔酮合成酶基因的全长，使学生掌握PCR的基本原理和操作。 二、实验原理 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是上世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒
双荧光素酶报告基因检测（一）
双荧光素酶实验是广大科研工作者经常会遇到的实验。双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）为报告基因，以海肾荧光素酶（Renilla luciferase）为内参基因。这样构建的报告系统具备很多优势，包括检测灵敏度高、动态范围广、应用灵活等。同时双荧光素酶实验也有
基因工程的载体和工具酶4
与II型核酸内切酶有关的几个概念粘性末端：cohesive ends是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来。平 末 端 ：Blunt end在识别序列对称处同时切开DNA分子两条链，产生的平齐末端结构。则不易于重新环化。同裂酶
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
双荧光素酶报告基因检测（三）
双荧光素酶报告基因检测（三）萤火虫荧光素酶片段互补成像（LCI）技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法，其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时，荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术，能够在植物细胞内进行实时
基因工程的载体和工具酶1
第一节载体引言基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。作为基因克隆的载体必须具备以下特性：⑴载体必须是复制子。⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。⑶具备多克隆位点（M
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
双荧光素酶报告基因实验原理
双荧光素酶报告基因实验原理具体如下：双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术，通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域，使其与靶基因协同表达。当荧光素基
基因工程的载体和工具酶3
2.M13噬菌体载体的构建 ⑴ 在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段 所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等 这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的D
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子质
双重荧光素酶报告基因优缺点
双重荧光素酶报告基因优点是具有灵敏度高，缺点是需要多次实验。双荧光素酶报告基因检测系统因其具有灵敏度高、无细胞内源性表达干扰等优势，现已被广泛用于基因表达调控的研究中，同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔，并且引入另一个报告基因作为内参。双荧光素酶报告基因检测是以荧光
双荧光素酶报告基因检测（二）
双荧光素酶报告基因检测（二）双荧光素酶实验通常被用来评估miRNA是否与其潜在的靶基因发生相互作用。实验中，预测的miRNA靶标基因的3’-UTR序列被克隆到含有萤火虫荧光素酶的报告基因载体的3’-UTR位置。如果miRNA与插入到质粒中的目标序列发生结合，miRNA将通过抑制该序列的翻译来降低萤火
基因工程的载体和工具酶5
（二）Klenow片段酶Klenow片段是大肠杆菌聚合酶 I 全酶经枯草杆菌蛋白酶处理后产生的大片段酶分子，分子量为76KD 。酶催活性：⑴5’ →3’ 的聚合酶活性 ⑵3’→5’ 的核酸外切酶活性Klenow片段的主要用途（利用5’ →3’ 的聚合酶活性）：⑴修补限制性酶消化DNA形成的3