荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。其原理简述如下：（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。......阅读全文
荧光素和荧光素酶是什么
荧光素也就是FDAFDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488nm和530nm。荧光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统
荧光素酶的分析
萤光素或萤光素酶不是特定的分子，而是对于所有能够产生萤光的底物和其对应的酶的统称，虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的萤光素酶来催化不同的发光反应。最为人所知的发光生物是萤火虫，而其所采用不同的萤光素酶与其他发光生物如萤光菇（发光类脐菇，Omphalotus oleariu'
双荧光素酶验证
miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 结合双荧光素酶验证方案 一、 检测原理全基因合成 miR 潜在结合位点上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及结合位点的突变形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位点处
荧光素酶的测定
实验方法原理 荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋光光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的式中，H 是 Planck 常量；v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低（［ATP］
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
荧光素酶的测定实验
实验方法原理荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋光光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的式中，H 是 Planck 常量；v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低（［ATP］＜
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
荧光素酶的测定实验
基本方案 实验方法原理 荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋
荧光素酶检测（Luciferase－assay）
Introduction Luciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters, and/or the transfection efficiency. Aims You will be prov
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
荧光素酶互补（Luc）实验
【导入】基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海参荧光素酶（Renilla luciferase）。两者可与各自的底物发生氧化作用产生生物荧光，产生的荧光值即表示两种酶的表达量多少。图片来源
“荧光素，荧光素酶，能态，基态”是什么意思
免疫荧光法免疫荧光法的基本原理是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。常用的荧光素有①异硫氰酸荧光素（fluorecein isothiocyante，FITC
关于荧光素酶的基本介绍
萤光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中最有代表性的是一种学名为Photinus pyrali'的萤火虫体内的萤光素酶，萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期，这一现象被认为是发展生物分
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
荧光素酶的种类以及应用
在细胞和基因的微观世界中研究探索，遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具，具有广泛的应用。荧光素酶（萤光素酶）以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。荧光素酶不是特定的分子，是一类中能催化产生生物发光的酶的统称，不同来源的荧光素酶各有特点，可催化底物发出不同颜色的光，有的还
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光