关于siRNA表达框架的介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到，不用一天的时间。因此，SECs成为筛选siRNA的最有效工具，甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点，那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。 这个方法的主要缺点是 ①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题） ②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致......阅读全文
关于siRNA表达框架的介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SE
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol I
siRNA表达框架制备siRNA的方法介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
siRNA表达框架的技术特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
siRNA表达框架制备方法的特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
siRNA表达载体制备siRNA的方法介绍
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
简述siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞
siRNA表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于：（1）作为后基因组时代基因功能分析的有力工具；（2）基因组学、细胞信号传导通路分析；（3）药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RN
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
siRNA表达载体的技术特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
关于siRNA机制的基本介绍
1.长dsRNA（可来自发夹，互补RNA和RNA依赖性RNA聚合酶）被称为Dicer的内切核糖核酸酶切割。Dicer切割长dsRNA以形成短干扰RNA或siRNA；这使得分子能够形成RNA诱导的沉默复合物（RISC）。 2.一旦siRNA进入细胞，它就会被整合到其他蛋白质中以形成RISC。
靶向－EGFR基因－siRNA表达载体的构建
实验材料靶向EGFR基因siRNA试剂、试剂盒pSilencer2.1-U6载体EcoR IBamH IT4 DNA连接酶鼠抗人anti-EGFRFITC标记兔抗小鼠IgGCy3标记兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亚砜仪器、耗材流式细胞仪荧光显微镜二氧化碳细胞培养箱酶标仪培养板盖玻片载玻片利用Lip
siRNA表达载体制备方法的特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
关于siRNA的体外制备的介绍
1、化学合成siRNA 合成siRNA应用广泛，这种方法的得率和纯度都比较高。对合成siRNA还可以进行一系列化学修饰以提高siRNA的稳定性、降低脱靶效应，以及（或者）阻止激活天然免疫反应。多家公司，包括Ambion、Thermo Scientific Dharmacon、QIAGEN和Si
关于小干扰RNA的siRNA设计介绍
最初，siRNA序列的选择是基于实验经验而获得的（Elbashir et al. 2001，2002）。最近，生物信息学工具被用来设计siRNA（表18-1），目前多个数据库收录了经过实验确证的siRNA和shRNA。值得推荐的是，在设计新的siRNA之前可以通过搜索已有的siRNA数据库和科研
关于基因表达的介绍
基因的表达过程是将DNA上的遗传信息传递给mRNA,然后再经过翻译将其传递给蛋白质。在翻译过程中tRNA负责与特定氨基酸结合，并将它们运送到核糖体，这些氨基酸在那里相互连接形成蛋白质。这一过程由tRNA合成酶介导，一旦出现问题就会生成错误的蛋白质，进而造成灾难性的后果。值得庆幸的是，tRNA分子
关于瞬时表达的优点介绍
①简单快速。转化基因可在转化的一周内进行分析，避免了组织培养等繁杂过程； ②表达水平高。当单链的T-DNA进入植物细胞后，许多未整合到植物基因组中的游离外源基因同样可以表达。 ③安全有效。不受植物生长发育过程的影响，不产生可遗传的后代，结果可靠直观，不存在基因漂移的风险。常用基因枪转化和农杆
关于表达载体的组成介绍
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。 表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表
siRNA的制备方法介绍
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
siRNA制备方法介绍
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
关于基因表达的折叠的介绍
刚从mRNA序列翻译过来的蛋白质都是未折叠或无规卷曲的多肽,没有任何的三维结构。氨基酸彼此相互作用使得多肽从无规卷曲折叠成其特征性和功能性三维结构。氨基酸序列决定l了蛋白质的三维结构,且正确的三维结构对于功能至关重要,尽管功能蛋白的某些部分可能仍未展开。伴侣蛋白的酶有助于新形成的蛋白质获得折叠,
关于蛋白表达系统的基本介绍
蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成： 1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表达蛋白的种类也不相同。 2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
关于LacZ基因的时空表达介绍
转基因小鼠实验系统已被广泛用于单一基因功能的研究，如组织特异表达和发育程序的调控。产生转基因小鼠最普遍的方法是将DNA通过显微注射注入受精卵的原核中。在研究小鼠胚胎发育过程中外源基因的时空表达方面，将融合基因注射进入小鼠受精卵原核中更是一条行之有效的途径。 通过上述方法，将SV40早期启动子和
关于基因表达反式作用的介绍
与“顺式作用”相对，反式作用指的是其作用范围可以影响到不同DNA链上的基因（顺式作用的调控仅限于同一条链上的基因），故名。 反式作用的调控原理是借助产生有调控功能的蛋白质而进行的。由于蛋白质合成之后的选择性结合不限于表达它的这条DNA链，所以相比于顺势作用，反式作用的调控范围更广。 例如，某
关于基因表达顺式作用的介绍
顺式作用是生物体进行基因表达调节的方式之一，与“反式作用”相对。顺式作用指的是，调节因子是与被调节基因同处于一条DNA链上的另一端DNA片段而进行的调节。 以二倍体生物为例，对于某一位置的基因，两条同源染色体上会有一对等位基因和一对相应的顺式调节因子。如果其中一个顺式调节因子发生突变而产生
关于苯的结构和表达的介绍
(1)苯的结构 近代物理方法证明：苯分子的六个碳原子和六个氢原子都在一个平面内，因此它是一个平面分子，六个碳原子组成一个正六边形，碳键键长是均等的，约为140 pm，介于单键和双键之间。碳氢键键长为108pm，所有的键角都为120°。 (2)苯的芳香性 从结构上看，苯具有平面的环状结构，键
关于瞬时表达的基本信息介绍
瞬时表达，即瞬时转染后的初期，质粒或DNA片段是游离在细胞中的，能够进行表达，称为瞬时转染表达。随后，游离在细胞中的质粒或DNA片段有两种归化，一种是被降解，还有一种是插入染色体中而能够持续地稳定地表达。