转录依赖的扩增系统的主要特点

TAS的主要特点是扩增效率高,因为其RNA拷贝数呈10的指数方式增加,只需6个循环靶序列的拷贝数就能达到2×106。它的另一个特点是特异性高,由于TAS只能进行6次温度循环,错掺率低,加之用葡聚糖珠夹心杂交,因而特异性也高。虽然本法有较高的特异性和敏感性,但其循环过程复杂,需重复加入逆转录酶和T7RNA多聚酶,有待进一步研究。......阅读全文

转录依赖的扩增系统的主要特点

TAS的主要特点是扩增效率高,因为其RNA拷贝数呈10的指数方式增加,只需6个循环靶序列的拷贝数就能达到2×106。它的另一个特点是特异性高,由于TAS只能进行6次温度循环,错掺率低,加之用葡聚糖珠夹心杂交,因而特异性也高。虽然本法有较高的特异性和敏感性,但其循环过程复杂,需重复加入逆转录酶和T7R

什么是转录依赖的扩增系统?

转录依赖的扩增系统(Transcript-basedamplification system,TAS),是Kwen等人于1989年研究报道的,主要用于扩增RNA.合成A、B引物,引物A的3‘末端与待扩增RNA互补,其5’端有T7RNA多聚酶的启动子信息.逆转录酶以A引物为起点合成cDNA;引物B与此

转录依赖的扩增系统的定义方法

1.概述:转录依赖的扩增系统(Transcript-based amplification system,TAS),是Kwen等人于1989年研究报道的,主要用于扩增RNA. 合成A、B引物,引物A的3‘末端与待扩增RNA互补,其5’端有T7RNA多聚酶的启动子信息.逆转录酶以A引物为起点合成cDN

依赖ρ因子的转录终止

ρ因子是一种分子量为46kDa的蛋白质,以六聚体为活性形式。

核酸扩增—转录介导的扩增技术(TMA)

  TMA是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下来扩增RNA或DNA的技术,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链RNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RN

依赖核酸序列的扩增技术叙述

  国内外的研究结果均表明,草莓组织中富含多糖等物质,分离优质核酸较困难,核酸巾的杂质影响taq DNA聚合酶的活性,从而影响PCR技术在草莓病毒检测中的应用。为了提高利用PCR技术草莓病毒检测的稳定性,国内外的学者在草莓核酸提取方法做了较多的研究,利用OIAGEN公司生产的植物RNA提取试剂盒(P

依赖核酸序列的扩增技术检测

  1 核酸提取  NASBA 方法的核酸提取可按照常规的RNA提取方法进行,根据实际需要可以采取不同的方法。  2 核酸扩增  将纯化的RNA 加到标准的NASBA 反应体系中后,先在65 ℃条件下作用5 min 去除RNA 的二级结构,然后在恒温的42 ℃条件下开始扩增反应。  3 产物的检测 

依赖核酸序列的扩增技术简述

  该技术的检测反应有赖于AMV逆转录酶、噬菌体T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、两种特别设计的特异性寡核苷酸引物和分子信标探针共同协作而完成。  NASBA全称是nucleic acid sequence-based amplification,即依赖核酸序列的扩增技术。 依赖核酸序列的扩增技术,是

依赖核酸序列的扩增技术相关

  NASBA的简要过程如下:1.RNA模板链进入反应混合物后,第一个引物首先与模板链的3'端结束。2. 反转录酶,合成反义的补偿的DNA链。3. RNA 酶H(一种核糖核酸内切酶,能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链,但不能消化单链或双

依赖核酸序列的扩增技术解析

1.概述:依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-basedamplification,NASBA),又称自主序列复制系统(self-sustainedsequence replication,3SR)或再生长序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术.NA

依赖核酸序列的扩增的基本方法

基本方法为:将引物,标本加入扩增反应液,65℃1min使RNA分子二级结构打开,降温至37℃加入逆转录酶,T7rna聚合酶和RNaseH,并在37℃反应1——1.5小时,其产物经琼脂 糖电泳,溴乙锭染色即可在紫外仪下看到条带.NASBA的特点为操作简便,不需特殊仪器,不需温度循环.整个反应过程由三种

依赖ρ因子的转录终止的功能介绍

依赖ρ因子的转录终止:在依赖ρ因子终止的转录中,产物RNA的3'-端会依照 DNA 模板,产生较丰富而且有规律的C碱基。ρ因子正是识别产物 RNA 上这些终止信号序列,并与之结合。结合 RNA后的ρ因子和 RNA pol都可发生构象变化,从而使RNA pol的移动停顿,ρ因子中的解旋酶活性使

依赖核酸序列的扩增技术的定义和原理

1.概述:依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA),又称自主序列复制系统(self- sustainedsequence replication,3SR)或再生长序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术.

最杰出的等温扩增方法之一——解旋酶依赖性扩增HDA

解旋酶依赖性扩增技术(helicase-dependent amplification,HDA)于2004年发明,是模拟动物体内DNA的复制机制的一种体外恒温基因扩增技术。随着技术的发展,在反应速度、特异性和灵敏度上也不断被提升,至少有三代HAD技术,整个系统比较简单,高效。 系统核心组成:解旋酶,

逆转录病毒的主要特点

1)病毒为球形,直径100~120纳米,衣壳20面体立体对称,有包膜;2)基因组为二倍体(唯一基因组非单倍体的病毒),两个相同+ssRNA;3)含有逆转录酶和整合酶;4)复制通过DNA中间体,并与宿主细胞的染色体整合(唯一会主动整合的病毒);5)具有gag、pol、env编码基因,以及长末端重复序列

逆转录PCR,扩增出的条带怎样区分

区分你的模板里面是否有基因组污染的方法:在做逆转录反应的同时,做一个阴性对照,其他所有都和实验组相同,除了不加入逆转录酶。得到RT-PCR产物后跑胶,如果该阴性对照里也扩增出来明显条带的话,你的模板就是有基因组污染,否则就是正常。

无菌隔离系统的主要特点

  1、选用透明PVC膜组成的软舱体结构,整机结构及操作平台选用316L不锈钢,顶端整体封闭式 结构设计,灭菌系统、集成控制单元、进出风系统、空气过滤单元等,更加美观大方,易于清洁维护;  2、 西门子触摸式显示屏设计,提高操作人员的舒适度。  3、操作舱6手套标准操作口设计,主、次操作面分别有4只

无菌隔离系统的主要特点

  1、选用透明PVC膜组成的软舱体结构,整机结构及操作平台选用316L不锈钢,顶端整体封闭式 结构设计,灭菌系统、集成控制单元、进出风系统、空气过滤单元等,更加美观大方,易于清洁维护;  2、 西门子触摸式显示屏设计,提高操作人员的舒适度。  3、操作舱6手套标准操作口设计,主、次操作面分别有4只

开尔文探针系统的主要特点

  (1)全球第一台商用的完全意义上的开尔文探针系统;  (2)最高分辨率的功函数和表面势,最好的稳定性和数据重现性;  (3)非零ZL技术(Off-null,ON)——ON信号探测系统在高信号水平下工作,与基于零信号原理(null-based,LIA)的系统相比,不会收到噪声的影响拥有高灵敏度; 

低丰度核酸反转录及扩增实验

实验材料 核酸试剂、试剂盒 dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1.  用过氧化物酶,蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2.  配置如下一步反应体系(总体积100 μl)(1)0.5 μl 100 μmol/l 正向引物(终浓度0.5 μmol/l

应用mRNA反转录扩增cDNA(RTPCR)

RT-PCR技术可应用于:(1)构建大容量cDNA文库;(2)鉴 定已转录序列是否发生突变及呈现多态性;(3)测定基因表达的强度。实验方法原理酶促催化使RNA反 转 录 为cDNA第一链。 一 条寡聚脱氧核苷酸引物先 与 mRNA杂交,然 后 由RNA依赖的DNA聚合酶催化合成相应互补的cDNA拷贝

应用mRNA反转录扩增cDNA(RTPCR)

实验方法原理 反转录 PCR ( reversetranscriptase'PCR,RT-PCR ) 是一种从 RNA 扩增 cDNA 拷贝的方法。RT-PCR 对于获得与克隆 mRNA 的5'、3' 末端序列和从非常少量的 mRNA 样品构建大容量的 cDNA 文库

应用mRNA反转录扩增cDNA(RTPCR)

            实验方法原理 酶促催化使RNA反 转 录 为cDNA第一链。 一 条寡聚脱氧核苷酸引物先 与 mRNA杂交,然 后 由RNA依赖的DNA聚合酶催化合成相应互补的cDNA拷贝,后者能进一步 用 于PCR扩增。依据实验的不同目的,针对单链cD

EMA扩增检测系统优势

  EMA扩增检测系统优势:   快速:从取样到出结果仅需35分钟;   简便:操作简便,试剂常温保存,常温运输,常温检测,结果可视化;   检测对象广泛:可同时检测DNA和RNA;   多指标:针对单一样本,可以同时检测多种不同的病原体;   耐受性强:对PCR扩增的抑制剂耐受性较强,比

铁路供电系统的主要特点

1.铁路供电系统的接线清晰        铁路供电系统的接线比较清晰,像铁路的轨迹一样,各个变电所分布在铁路沿线,并且彼此都有连接。常用的连接线有两种:一种是贯通形式的线型;另一种是自闭形式的线型。在铁路实际的运行中,主要的线路使两种一起工作,而在支线上,可能只是某一种。供电线路使各变电所相连接,也

主要特点./无菌隔离系统

1、选用透明PVC膜组成的软舱体结构,整机结构及操作平台选用316L不锈钢,顶端整体封闭式结构设计,灭菌系统、集成控制单元、进出风系统、空气过滤单元等,更加美观大方,易于清洁维护; 2、西门子触摸式显示屏设计,提高操作人员的舒适度。 3、操作舱6手套标准操作口设计,主、次操作面分别有4只、2只,传递

逆转录PCR(RTPCR)扩增基因特异片段

逆转录PCR(RT-PCR)扩增基因特异片段 一、实验原理RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中R

激活的热稳定-DNA-聚合酶进行反转录和-DNA-扩增实验

试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye仪器、耗材 琼脂糖凝胶的电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂琼脂糖二甲基亚砜(见注释 1)(DMSO)溴化乙锭

激活的热稳定-DNA-聚合酶进行反转录和-DNA-扩增实验

本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dy

激活的热稳定-DNA-聚合酶进行反转录和-DNA-扩增实验

            试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物 脱氧核苷三磷酸 RT RNA PCR 酶 AccuRT 缓冲液 UNG 琼脂糖 溴化乙锭