不对称PCR技术的定义和方法介绍
不对称PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50——100:1。在PCR反应的最初10——15个循环中，其 扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后，非限制性引物(高浓度引物)引导的PCR 就会产生大量的单链DNA。不对称PCR的关键是控制限制性引物的绝对量，需多次摸索优化两条引物的比例。还有一种方法是先用等浓度的引物PCR扩增，制备双键 DNA，(dsDNA)，然后以此dsDNA为模板，再以其中的一条引物进行第二次PCR，制备ssDNA。不对称PCR制备的ssDNA，主要用于核酸序列测定。......阅读全文
不对称PCR技术的定义和方法介绍
不对称PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50——100:1。在PCR反应的最初10——15个循环中，其 扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后，非限制
原位PCR技术的定义和方法介绍
1.概述：原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等.2.其基本方法为
重组PCR技术的定义和原理介绍
1.定义：使两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR(recombinant PCR)。Mullis等于1986年报道了由PCR扩增的两个DNA片段通过重组合后再经延伸而制备出新的DNA分子。2. 其基本原理：将突变碱基，插入或缺失片段，或一种物质的几个基因片段均设计在引物中，先分段对
RTPCR技术的定义和检测方法
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA 模板。 RNA扩增包括两个步骤：在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引
标记PCR和彩色PCR技术的定义及特点介绍
标记PCR(Labelled Primers，LP-PCR) 是利同位素或荧光素对PCR引物的5‘端进行标记，用来检测靶基因是否存在。彩色PCR(Color Complementation assay PCR，CCAPCR)，是LP-PCR的一种，它用不同颜色的荧光染料；标记引物的5'端，因
反向PCR（Inverse－PCR）技术的定义和特点
1.概述：反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物
巢氏PCR（Nested－PCR）技术的定义和特点
1.定义：也称套式PCR是指利用两套PCR引物（巢式引物）进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。在这种技术中，首先用一对外引物进行第1轮PCR，然后再使用第1对引物扩增的DNA 序列内部的一对引物再次扩增。2.优点：由于巢式PCR反应
免疫PCR(immunoPCR)技术的定义及特点介绍
1.定义：免疫-PCR(immuno-PCR) 它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原，尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应，②与嵌合连接分子结合，③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。
PCR的定义和历史
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，
多重PCR技术的定义特点及用途介绍
1.概述：多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。 2.特点: ①高效性，在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或
兼并引物PCR技术的定义
1.概述：兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低，产物特异性越强。2.设计引物原则：尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR；次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。
RTPCR技术的定义
RT-PCR，反转录·聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是将RNA的反转录（reverse transcription ）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。
不对称转录的定义
不对称转录有两重含义:一是指双链DNA只有一股单链用作模板,二是指同一单链上可以交错出现模板链和编码链。不对称转录RNA转录时,一个转录子内是只转录一条链的DNA上的信息,表现为不对称转录。而DNA上遗传信息以基因为单位(真核),可以在不同的单链上。RNA在转录后,加工编辑的过程中,有些情况下会把不
多重PCR的定义和特点
1.概述：多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合 ，它是在同一 反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的 反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般 相同。2.特点:①高效性，在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是
不对称标记的定义
中文名称不对称标记英文名称asymmetric labeling定 义(1)对分子中具有手性(不对称性)结构部分的标记。(2)对核酸(DNA、RNA)互补双链中一条单链的选择性标记。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
什么是不对称PCR？
不对称PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50——100:1。在PCR反应的最初10——15个循环中，其扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后，非限制性
甲基化特异PCR技术的定义及特点介绍
甲基化特异PCR是用对苯二酚和亚硫酸氢钠处理氢氧化钠变性的基因组DNA，使得未甲基化的C转化为T。按照C转换T后的基因序列设计出来的引物扩出目的基因。由于甲基化CpG岛中的C不能被转化为T，用以上的引物将不会扩出目的基因。通过上述手段就能达到识别基因组DNA甲基化与否的目的。
PCR技术（十一）：PCR片段拼接的SOE和SDL方法
PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操 作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两
巢式PCR(Nested－PCR)定义、原理和步骤
巢式PCR的定义巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通 PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。巢 式PCR的好处
逆转录－PCR的定义和主要影响因素介绍
逆转录 PCR（Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR）是一种以 RNA 为样本，RNA链被逆转录成为互补 DNA（cDNA），再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。在实际应用中，RT-PCR 分为一步法 RT-PCR 和两步法 RT-PCR。整个反转录实验过程有三
荧光定量PCR技术的检测原理和方法
1.SYBRGreenⅠ法：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR定量PCR扩增荧光曲线图PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明P
RTPCR的定义与检测方法
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
重组PCR的定义和基本原理
1.定义：使两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR(recombinant PCR)。Mullis等于1986年报道了由PCR扩增的两个DNA片段通过重组合后再经延伸而制备出新的DNA分子。2.其基本原理：将突变碱基，插入或缺失片段，或一种物质的几个基因片段均设计在引物中，先分段对模
原位PCR定义
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辨鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
比色法的定义和常用方法介绍
定义 以生成有色化合物的 显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种 定量分析的方法，开始于19世纪30～40年代。 比色分析对 显色反应的基本要求是：反应应具有较高的 灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和 显色剂的颜色差
筛选的定义和方法
筛选是利用筛子使物料中小于筛孔的细粒物料透过筛面，而大于筛孔的粗粒物料滞留在筛面上，从而完成粗、细料分离的过程。该分离过程可看作是物料分层和细粒透筛两个阶段组成的。物料分层是完成分离的条件，细粒适筛是分离的目的。
杂交的定义和技术应用
杂交（hybridization；cross；crossing）定义：两条单链DNA或RNA的碱基配对。遗传学中经典的也是常用的实验方法。通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体的方法。一般情况下，把通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交；而把由体细胞相互融合达到这一
关于PCR技术的介绍
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，[1]PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大