如何计算引物的Tm值?

引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度、碱基组成及所使用缓冲夜的离子强度有关。 长度为25base以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为: Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (GC%) - 600/size *公式中,Size =引物长度。......阅读全文

引物的TM值如何计算

Tm值就是DNA熔解温度,指把DNA的双螺旋结构在热变性过程中紫外吸收值达到最大值的1/2时的温度。不同序列的DNA,Tm值不同。DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系。核酸Tm值(解链温度)计算评价标准是核酸所吸收的光线量达到其所增加吸收260nm光线的量的两倍达到的温度,当核酸达到Tm值

如何计算引物的Tm值?

   引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度、碱基组成及所使用缓冲夜的离子强度有关。    长度为25base以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)    对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:    Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+]

如何计算引物的Tm值?

引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度、碱基组成及所使用缓冲夜的离子强度有关。长度为25base以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (GC%) –

引物的Tm值是什么

负责引物合成的公司会给你引物的详细信息,其中有理论tm值,应该是和这个公式tm=2*(a+t)+4*(g+c)计算的一样,你在进行调整优化即可。

怎么计算Tm值

引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关。长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中,Siz

怎么计算Tm值

公式:(G—C)%=(Tm-69.3)×2.44在一定条件下(pH7.0,0.165MNaCl中)Tm值与(GC)%含量呈正比关系。因此,通过测定Tm值,可以推算出DNA分子中的碱基百分组成。在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量高时,Tm值比较高,反之则低。这是因为G-C

引物Tm值与PCR产物Tm值有什么区别

引物TM是设值和合成引物时的Tm值,也就是理论值。而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当

引物TM值和PCR程序问题

tm值和引物中的GC含量有关 只要相差不是太大就行 设定时取平均值就可以;你可以根据引物的长度和GC的百分比来确定一下哪个更准确。不知道你用的那个公司的机器,一般是的在退火温度后面的空格里,输入你每个循环升或降的温度,后面还有加减号代表升或降。

引物的浓度和TM值的技术

引物浓度的计算:引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成10-50pmol/ul。一般情况下,建议将引物的浓度配制成50pmol/ul,加水的体积(微升)按下列方式计算:V (微升)= OD数*(乘)33 *(乘)*(乘)20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报

什么是tm值,有何用途,如何计算

Tm值就是DNA熔解温度,指把DNA的双螺旋结构在热变性过程中紫外吸收值达到最大值的1/2时的温度。不同序列的DNA,Tm值不同。DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系。核酸Tm值(解链温度)计算评价标准是核酸所吸收的光线量达到其所增加吸收260nm光线的量的两倍达到的温度,当核酸达到Tm值

引物的Tm值,到底有多少意义

Tm较低,而且熔解温度范围较宽;离子强度较高时,Tm较高,熔解温度范围较窄。DNA溶液中离子强度低时,Tm较低,而且熔解温度范围较宽;离子强度较高时,Tm较高,熔解温度范围较窄。因此,在表示某一来源DNA的Tm值时,必须指出其测定条件。在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量

如何确定引物二聚体和扩增产物的Tm值

最近在做qPCR,今天遇到个样品的浓度很低,想看看能不能做出样品10倍梯度稀释的曲线,于是照常做了。结果最后的溶解曲线发现,头三个的Tm是84,之后的5个样品时77。从Ct值来看,也是头三个还有点像样,后面的Ct都是33-34.很显然后面的5个应该不是扩增产物,应该是奈不住寂寞的引物二聚体之类的非目

退火温度与引物的TM值有什么联系

退火温度与引物的TM值的关系主要和DNA聚合酶与其buffer有关。有些退火温度要比TM低5度、3度,有些还会高3度,有些是一模一样的。主要参考不同公司所生产的DNA聚合酶的说明书。

Tm值的影响Tm值的因素

Tm值的影响因素如下:(1)G—C的含量:在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量高时,Tm值比较高,反之则低。这是因为G-C之间的氢键较A-T多,解链时需要较多的能量之故。Tm值和G-C的含量可用二一个经验公式表示:(G—C)%=(Tm-69.3)×2.44在一定条件下(p

如何测定引物的OD值?

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量,请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其吸光度,即为所测体积的OD值,进而

引物溶剂量如何计算?

一般默认是每条引物合成2个OD,分装为2管,所以每管中有1个OD的引物。由于引物分子量的不同,每个OD所对应的物质的量(即n mol数)都是不同的。在管壁标签上我们都会标明这个管里有多少个OD、多少n mol。可以根据这个数据,来算出你需要在管子里加多少体积的溶剂来进行溶解。通常直接用于PCR加样的

引物需要合成多少OD数?如何计算引物的浓度?

根据实验目的确定。一般PCR扩增,2 OD引物,可以做500-1000次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 OD就足够了。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。一般情况下,我们建议将引物的浓度配制成100pmol/ul,称为保存浓度,而引物的工作浓度一般配制成10-50pmol/

ph值如何计算

ph值计算方法:单一溶液pH的计算方法:1、强酸cmol·L-1HnA强酸溶液,c(H+)=ncmol·L-1―→pH=-lgnc。2、强碱cmol·L-1B(OH)n强碱溶液,c(OH-)=ncmol·L-1,n(H+)=mol·L-1―→pH=14+lg_nc。混合溶液pH的计算方法如下图:其中

ph值如何计算

ph值计算方法:单一溶液pH的计算方法:1、强酸cmol·L-1HnA强酸溶液,c(H+)=ncmol·L-1―→pH=-lgnc。2、强碱cmol·L-1B(OH)n强碱溶液,c(OH-)=ncmol·L-1,n(H+)=mol·L-1―→pH=14+lg_nc。混合溶液pH的计算方法如下图:其中

ph值如何计算

ph值计算方法:单一溶液pH的计算方法:1、强酸cmol·L-1HnA强酸溶液,c(H+)=ncmol·L-1―→pH=-lgnc。2、强碱cmol·L-1B(OH)n强碱溶液,c(OH-)=ncmol·L-1,n(H+)=mol·L-1―→pH=14+lg_nc。混合溶液pH的计算方法如下图:其中

DNA的Tm值测定实验

紫外分光光度法             实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80~100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生

DNA的Tm值测定实验

实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80~100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm 区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。DNA 的变性的特点是爆发式的, 变性作用发生在一个很窄的范围。通常把D

qPCR溶解曲线TM值

tm>80℃_芙馇叻治隹梢杂美慈范ú煌姆从Σ铮ǚ翘匾煨圆铩?_芙馇?(Dissociation curve):随温度升高,DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。全部DNA双螺旋结构降解一半的温度称为溶解温度(Tm)。不同序列的DNA,Tm值不同。DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系。不排除极度

tm值与退火温度

我用primer 5设计出来的Tm值从来都是直接当退火温度用。用引物primer-blast的话我都是直接贴序列上去。有其他菌的匹配很正常,有些进化亲缘性很近的,只要在同一物种中没有匹配上的问题应该不大!

qPCR溶解曲线TM值

tm>80℃随温度升高,DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。全部DNA双螺旋结构降解一半的温度称为溶解温度(Tm)。不同序列的DNA,Tm值不同。DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系。不排除极度偶然的情况:1.两个序列的溶解曲线一样 2.没有目标产物,只有一种非特异产物。

如何计算水中OD值

对于较稀的溶液,吸光度和浓度成正比,两者关系可用比尔-朗伯定律

引物参数计算

Simple javascript Oligo CalculatorOligo CalculatorEnter Oligo Sequence in BoxLength Melting Temperature (Tm)  °C%GC contentMolecular Weight:  daltons

如何使用quantityone计算条带灰度值

变性条件——SDS LB直接裂解:用常温或者高温预热过(预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化,但容易遗忘,LB久煮某些性质会改变)的1*SDSLB(或者略高1.5*)直接加到细胞或者组织上并煮样。通常6孔板细胞80%以上密度,需200ul,其他按平板面积比类推。通常条件下,SDSLB都是过量的

水污染密度指数SDI值如何计算

反渗透膜污染测定 SDI 值的标准方法,其方法的基本原理是测量在 30psi 给水压力下用 0.45 μ m 微滤膜过滤一定量的原水所需要的时间。反渗透膜污染密度指数SDI的测定方法污染密度指数 SDI 值是表征反渗透系统进水水质的重要指标。反渗透膜污染测定 SDI 值的标准方法,其方法的基本原理是

根据引物合成单如何设定PCR退火温度?

PCR退火温度应如何设置? 问题:引物单上数据如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+):68.2 Tm(50mM Na+):46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+):