间接ELISA法的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA为例,间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清;③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。⑶ 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下,如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待检血清的OD值≥0.4,则判为阳性,否则判为阴性。......阅读全文
活细胞间接免疫荧光法
一.实验器材:1. 器材:40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等2. 试剂:单抗隆抗体(单抗)、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS(pH7.2-7.4)、甘油、叠氮钠(NaN3)等二.方法(微量法)1. 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次,1000rpm每次10分钟
间接检眼镜检查法检查作用
间接检眼镜检查法对视网膜脱离、皱襞等不在眼底同一平面上的病变有重要意义。动脉如有搏动,则为病理现象。脉络膜色素较多而聚于血管之间,即呈现出红色和褐色相间的条纹状,称豹纹状眼底。 需要检查的人群:屈光不正或屈光介质被破坏者。
鸡脂蛋白脂酶ELISA试剂盒操作程序
Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。 样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标
双夹心免疫荧光法的操作程序
中文名称双夹心免疫荧光法英文名称sandwich immunoflurescence定 义用免疫荧光法进行的双抗体夹心试验。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)
检测elisa试剂盒组成技术原理与间接法
组成结构 1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗
间接检眼镜检查法的正常值
视盘:位于眼球后极偏鼻侧约3-4mm,直径约1.5mm,呈椭圆形、色淡红,但颞侧颜色稍淡。 血管:这些血管分枝彼此不相吻合。动脉色鲜红,管径细而较直,中央有鲜明的反射光条,宽约为管径的1/3。静脉色暗红,管径稍粗而较弯曲,管腔的反射较暗而细小。动脉与静脉的比例约为3:4或2:3。在视盘内,有时
间接检眼镜检查法的临床意义
异常结果:动脉如有搏动,则为病理现象。脉络膜色素较多而聚于血管之间,即呈现出红色和褐色相间的条纹状,称豹纹状眼底。 需要检查的人群:屈光不正或屈光介质被破坏者。
间接检眼镜检查法的注意事项
不合宜人群:青光眼患者。 检查前禁忌:情绪紧张。 检查时要求:检查周边眼底时,最好予以扩大瞳孔,嘱病人将眼球转向一侧,检者亦应将头适当倾斜。
间接检眼镜检查法的检查过程
检查时,被检者采取坐位或卧位,检查距离为50cm左右,检者用拇、食指持+13D--28D的透镜(为了提高像质,现多采用非球面透镜),以无名指及小指靠在被检者额部作为依托,并提起上睑,透镜在被检者眼前4-9cm 范围内移动,直至见到眼底影像为止。
利用间接放射免疫法检测样品的mTNF
实验概要本实验利用间接放射免疫法检测样品的mTNF。选用两种抗体,一抗为抗TNF抗体,可与细胞膜表面的mTNF特异性结合;二抗为抗一抗抗体,且标记放射性同位数125I,可与一抗特异性结合,通过测定其放射活性,并与标准品对照,即可间接测定细胞膜表面的TNF。实验原理肿瘤坏死因子(tumor nec
利用间接放射免疫法检测样品的mTNF
实验概要本实验利用间接放射免疫法检测样品的mTNF。选用两种抗体,一抗为抗TNF抗体,可与细胞膜表面的mTNF特异性结合;二抗为抗一抗抗体,且标记放射性同位数125I,可与一抗特异性结合,通过测定其放射活性,并与标准品对照,即可间接测定细胞膜表面的TNF。实验原理肿瘤坏死因子(tumor nec
间接免疫荧光法的操作步骤介绍
1、细胞准备与固定 (1)单层生长细胞:取对数生长细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,制成单细胞悬液。将细胞接种到预先放置几张6×22mm盖玻片的培养瓶或培养皿中,置二氧化碳培养箱培养1-3天,待细胞接近长成单层,取出盖玻片,进入PBS(0.01 mol/L,pH7.4)洗2次,然后根据实验目的,
关于间接测热法的基本信息介绍
间接测热法是指测定人体消耗掉的氧气量和生成的二氧化碳量和排出的尿氮量可以计算出人体所生成的热能的方法。 由于食物在人体内氧化时,需消耗吸入空气中的氧,生成二氧化碳,释放出能量。因此,从测定时用气袋收集一定时间内受试者的全部呼出气,分析呼出气中的含氧量和二氧化碳量,将呼出气与吸入的空气对比,即可
ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪
双抗体夹心法:(1)包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。(2)加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置3
间接免疫荧光法检测自身抗体
自身抗体诊断的标准技术是间接免疫荧光法,其特点是特异性强,阳性与阴性样品的信号强度对比明显,通过显微镜观测能够精确地判断组织或细胞内荧光的分布。自身抗原的位置决定了其相应抗体的典型的荧光模式,所有与此典型模式不相关区域的染色被认为是非特异性染色。即使偶尔伴有强的非特异性染色,但弱的特异性信号
滴定分析法间接滴定法简介
有些物质虽然不能与滴定剂直接进行化学反应,但可以通过别的化学反应间接测定。 例如高锰酸钾法测定钙就属于间接滴定法。由于Ca2+在溶液中没有可变价态,所以不能直接用氧化还原法滴定。但若先将Ca2+沉淀为CaC2O4,过滤洗涤后用H2SO4溶解,再用KMnO4标准溶液滴定与Ca2+结合的C2O42
滤膜孔径测算方法间接测量法
间接法是利用与孔径有关的物理现象,通过实验测出相应的物理参数,在假设孔径为均匀直通圆孔的假设条件下,计算得到膜的等效孔径,主要方法有泡点压力法、压汞法、氮气吸附法、液液置换法、气体渗透法、截留分子量法、悬浮液过滤法。 泡点法: 泡点压力所对应膜的最大孔径。实测时,膜应被液体完全润湿,否则将带
间接免疫荧光法检测自身抗体
自身抗体诊断的标准技术是间接免疫荧光法,其特点是特异性强,阳性与阴性样品的信号强度对比明显,通过显微镜观测能够精确地判断组织或细胞内荧光的分布。自身抗原的位置决定了其相应抗体的典型的荧光模式,所有与此典型模式不相关区域的染色被认为是非特异性染色。即使偶尔伴有强的非特异性染色,但弱的特异性信号也能够被
间接检眼镜检查法指标解读结果
正常: 视盘位于眼球后极偏鼻侧约3~4mm,直径约1.5mm,呈椭圆形、色淡红,但颞侧颜色稍淡。 血管这些血管分枝彼此不相吻合。动脉色鲜红,管径细而较直,中央有鲜明的反射光条,宽约为管径的1/3。静脉色暗红,管径稍粗而较弯曲,管腔的反射较暗而细小。动脉与静脉的比例约为34或23。在视盘内,有
人皮肤蛋白ELISA试剂盒操作程序洗板方法
样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取
ELISA法检测立克次体
ELISA法检测立克次体 立克次体(Rickettsia)是一类专性活细胞内寄生的原核细胞微生物,具有细胞壁,含有RNA和DNA,以二分裂繁殖。需在细胞内繁殖,不能在无细胞的人工培养基中生长。它是属于人兽共患的自然疫源性疾病。临床上常见的有普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病立克次体和Q热立克次体
用原子吸收法间接分析水中的氯化物
参考国外文献的基础上,用原子吸收法间接分析水中的氯化物在国外经常有所报道。实际工作中建立了这种方法,方便可靠。1原理本方法通过往样品中加入过量已知量的硝酸银溶液,银离子与氯离子沉淀后,测出剩余银离子的量,可以差量算出样品中的氯离子的量。2干扰及消除饮用水中含有的各种物质在通常数量下不发生干扰,但溴化
关于滴定分析法的间接滴定法介绍
有些物质虽然不能与滴定剂直接进行化学反应,但可以通过别的化学反应间接测定。 例如高锰酸钾法测定钙就属于间接滴定法。由于Ca在溶液中没有可变价态,所以不能直接用氧化还原法滴定。但若先将Ca沉淀为CaC2O4,过滤洗涤后用H2SO4溶解,再用KMnO4标准溶液滴定与Ca结合的C2O4,便可间接测定
布ELISA法的主要程序
⑴ 首先把抗布氏杆菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并经洗涤及封闭;⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟,然后洗5次;⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌抗体,于室温下感作30分钟,然后洗涤5次;⑷ 加入底物液显色;⑸ 测定OD值。
竞争-ELISA-检测法的缺点
竞争 ELISA 法存在以下一些缺点:检测范围相对较窄:由于其检测原理是基于竞争抑制,浓度过高或过低的待测物可能导致结果不准确,限制了可检测的浓度范围。准确性可能受竞争不完全的影响:在竞争反应中,如果标记抗原和未标记抗原与抗体的结合能力存在差异,或者反应条件不理想,可能导致竞争不完全,从而影响检测结
间接免疫荧光法有哪些优缺点
优点:可直接看到细胞核,判断疾病的方向缺点:培养荧光操作人员大约需要半年时间,成本高(需要荧光显微镜);不能量化指标,周期长,半定量。
检测鸡传染性法氏囊病病毒的双夹心抗体ELISA操作程序
① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)
一、直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结
关于酶联合吸附测定的检查过程介绍
常用的酶联合吸附测定有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。 一、间接ELISA 本法主要用于检测抗体。间接ELISA的操作程序如下。 (1) 材料 ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液; ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清.
改进的间接酶联免疫法检测磺胺类药物
实验概要磺胺类药物是抗菌药,被广泛应用于动物和人。各种检测磺胺类药物残留的方法已经被应用。本试验利用酶联免疫吸附方法,检测磺胺类药物的浓度,为实际应用提供参考。本实验用四只兔子制备抗体,兔子被TS-LPH和TS-BSA免疫,间接ELISA检测血清,在每两只兔子上,使用TS-OV作为诱导原,产生高滴度