弗氏佐剂的配制方法
按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg。......阅读全文
弗氏佐剂的配制方法
按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性
弗氏佐剂的配制方法
按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性
弗氏佐剂的配制方法
按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性
弗氏佐剂的使用方法
(1)研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。(2)注射器混合法:将等量的
弗氏佐剂的功能特点
弗氏体即弗氏佐剂是动物实验中最常用的佐剂,分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2~20mg/ml)或死的结核分枝杆菌,即为完全弗氏佐剂(FCA)。一般首次注射时用1/2体积FCA
弗氏佐剂的概念和作用
弗氏体即弗氏佐剂是动物实验中最常用的佐剂,分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2~20mg/ml)或死的结核分枝杆菌,即为完全弗氏佐剂(FCA)。一般首次注射时用1/2体积FCA
福氏佐剂的成分和配制方法
常用的佐剂是福氏佐剂(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份,羊毛脂与石腊油的比例,视需要可调整为1:2~9(V/V),这是不完全福氏佐剂,在每毫升不完全佐剂加入1~20mg卡介苗就成为完全佐剂。配制方法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4
多克隆抗体制备实验_弗氏佐剂免疫法
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定
Bouin氏固定液的配制方法
Bouin氏固定液 苦味酸饱和水溶液 75ml 福尔马林(40%甲醛) 25ml 冰醋酸 5ml 1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。 先将苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
瑞氏(Wright)染色液的配制方法
瑞氏(Wright)染色液 瑞氏染料粉末 0.3g 甘油 3ml 甲醇 97ml 将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中过夜,过滤即可。
弗氏细胞压碎器的用途
弗氏细胞压碎器(French press)是破碎细胞和制备无细胞提取物的装置,利用压力破碎细胞。一种用于破碎细胞和制备无细胞提取物的装置。细胞悬液置于高压下强力挤出小孔,压力突然降低以及剪切力的作用导致细胞爆裂破碎。
米氏散射与弗朗和弗衍射有何差别?
采用米氏理论能更准确地反映不同粒径颗粒的散射规律,使激光粒度仪的测试下限更小,结果更准确。弗朗和弗衍射理论是米氏理论的近似,对细颗粒的误差较大。百特公司的激光粒度仪目前已采用全程米氏散射理论。
佐剂(adjuvant)的制备和作用
一、概念 佐剂(adjuvant)是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质,应用时可与抗原同时或预先注射于机体。佐剂本身可以有免疫原性,也可以没有免疫原性。 应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性,从而提高抗体的效价。颗粒性抗原(如细菌、细胞)因具有较强的免疫原性,一般情况下不使用佐剂即
关于弗氏链霉菌的基本介绍
弗氏链霉菌气丝落英淡粉色或粉色。基丝无色或微黄色。在大部分培养基内无可溶色素。克氏合成1号琼脂:气丝荷花白色。 蔗糖硝酸盐琼脂:基丝麦芽糖黄色。可溶色素无或微黄色。葡糖天冬素琼脂:气丝落英淡粉色。基丝微黄色。高氏合成1号琼脂:气丝荷花白色、浅粉色。基丝淡黄色。淀粉合成琼脂:气丝微白色。基丝无色
免疫佐剂的种类都有哪些?
1. 化合物:包括氢氧化铝、矿物油、吐温-80、弗氏不完全佐剂(羊毛脂与液状石蜡的混合物)以及人工合成的多聚肌苷酸:胞苷酸、脂质体等。 2. 生物制剂:①经处理改造的细菌及其代谢产物,如卡介苗、脂多糖(LPS)和类脂A、源于分枝杆菌的胞壁酰二肽等;②细胞因子及热休克蛋白等。 最常用于免疫动物
小鼠免疫实验
实验方法原理 实验材料 任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒 PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材 22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤 1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~40
富尔根氏核染色液的配制方法
富尔根氏核染色液 1.席夫氏(Schiff)试剂 将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷至50℃左右过滤,再加入1mol/LHC120ml,摇匀。待冷至25℃时,加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放置暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色
察氏培养基的配制操作方法
察氏培养基的配制操作方法1.牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒培养基成分蔗糖 3gNaN03 0.3gK2HP04 0.1gKCl 0.05gMgSO4·7H2O 0.05 gFeS04 0.001 g琼脂 1.5-2g蒸馏水
弗布利氏综合征的概述
鉴别诊断 临床需要与其他类型肌强直鉴别 (1)先天性肌强直(congenital myotonia):Thomsen(1876)描述了他本人及其家族的四代患者,又称为Thomsen病。通常为常染色体显性遗传病,与7q35染色体突变有关。通常自出生就存在全身性肌强直,不伴肌无力和肌萎缩,但至儿
弗布利氏综合征的病因
弗布利氏综合征为性连锁显性遗传疾病,致病基因定位于X染色体长臂中段Xq21至Xq24。因此,半合子男性病情重,而杂合子女性病情表现多样,多数轻度异常(如仅有角膜环生状混浊),甚至无症状,少数重如男性。该基因突变导致α-半乳糖苷酶A(一种溶酶体水解酶)缺乏,使终端α-半乳糖残基不能从中性糖鞘脂(n
弗氏细胞压碎器的原理和作用
弗氏细胞压碎器是破碎细胞和制备无细胞提取物的装置,利用压力破碎细胞。一种用于破碎细胞和制备无细胞提取物的装置。细胞悬液置于高压下强力挤出小孔,压力突然降低以及剪切力的作用导致细胞爆裂破碎。
弗布利氏综合征的诊断
弗布利氏综合征虽有许多特征性表现,但临床误诊10年以上者并不少见。一般来讲,Fabrys病患者的发病年龄在儿童晚期或青少年早期,男性发病,女性为携带者或轻症患者,B型和AB型血型者发病早且较严重。患者平均存活年龄为50岁,女性基因携带者的生存年龄较长,约70岁。死因主要是肾衰或心脑血管并发症。
小鼠免疫实验_-制备免疫脾细胞:用可溶性抗原致敏
实验材料任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~400 μl/鼠)。用双头带塞
多抗制备动物免疫
制备好抗原后,就要进行动物免疫了,免疫这一步除了动物自身的因素外,实验者也要有良好的计划才能得到更好的免疫效果。这里就几个常见的问题作一下简单的讨论。 动物的选择。常见的可以用来制备抗体的动物有:小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea pig)、仓鼠(Hamster)、兔(Rab
弗布利氏综合征的鉴别诊断
遗传性出血性毛细血管扩张症 遗传性出血性毛细血管扩张症与本病不同之处是皮损略大,数量多,外形极不规则,不波及下半身,也无发作性疼痛和发热。 Fordyce血管角质瘤 Fordyce血管角质瘤见于30岁以上的男性,皮损局限于阴囊。 岩藻糖苷贮积症 岩藻糖苷贮积症虽然出现血管角质瘤,但起病
弗布利氏综合征的发病机制
1967年Brady等阐明了弗布利氏综合征的生物化学缺陷。他们认为溶酶体酶酰基鞘氨醇己三糖苷酶活性缺陷导致了神经氨醇分解代谢减低,从而导致细胞内神经氨醇半乳糖苷酰基鞘氨醇的沉积。上述细胞内沉积物a末端连接一个半乳糖苷残基。由于人们对这一特异酶缺陷的认识,现在可以准确地诊断半合子的男性,并可以辨认
弗布利氏综合征的辅助检查
肾活检病理检查 光镜检查 光镜下肾小球脏层上皮细胞(有时还有壁层上皮细胞、内皮细胞及肾小管上皮细胞)增大,含无数空泡,空泡中充满脂质,偏光镜下见双折光脂质体,形似马耳他十字架;肾小球壁局灶性增厚,肾小球周围及间质纤维化。 弗布利氏综合征肾小球变化最显著,石蜡切片显示肾小球脏层上皮细胞扩大,
免疫球蛋白IgG的提取1
一、目的及要求了解和掌握免疫球蛋白的提取方法。 二、概 念 抗体是在抗原物质刺激下,人或脊椎动物免疫系统的浆细胞产生的,能与抗原发生特异性反应的免疫球蛋白,主要存在于人和动物的血清及其体液中。 三、免疫血清的制备 (一)动物的选择 实验室常用的动物是家兔和羊,有时也用豚鼠或鸡,大
免疫佐剂的主要分类
1.生物性佐剂是细菌或其产物,其本身具有免疫原性,如分枝杆菌(结核杆菌、卡介苗)、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰阴性杆菌内毒素等。此外发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-l、白细胞介素-2、干扰素-γ等的佐剂活性。2.无机佐剂如氢氧化铝、明矾、磷酸铝等。3.人工合成佐剂双链多聚肌苷酸、胞苷
单克隆抗体制备
1. 免疫动物:三只Balb/c小鼠 2. 佐剂:首先用完全弗氏佐剂(CFA),后用不完全弗氏佐剂(IFA)。 3. 免疫原:蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100µg免疫原。 4. 免疫:用PBS稀释免疫原,然后与相应的佐剂1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,将该乳剂在小鼠双