实时聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称实时聚合酶链反应英文名称real-time PCR定 义一种定量测定样品中特定DNA序列的聚合酶链反应。即使用标记(最常用是荧光标记)的PCR引物，因而能够通过荧光监测到每一次PCR循环后扩增所得DNA产物的量，从连续监控下获得的反应动力学曲线，可推导得样品中被扩增模板DNA的原初含量。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）......阅读全文
实时荧光定量PCR原理、特点和应用领域（一）
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析，分析的都是PCR终产物。但是在
实时荧光定量PCR原理、特点和应用领域（二）
所谓Real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解
实时荧光定量PCR原理、特点和应用领域（三）
1、Ct值的定义在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。2、荧光域值（threshold）的设定PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-
反向聚合酶链反应
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶，切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段，将切出的DNA区段环化，然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
定量聚合酶链反应
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应，对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
聚合酶链反应的过程
标准的PCR过程分为三步：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术，其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的，借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
差示聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称差示聚合酶链反应英文名称differential display PCR定 义利用组织细胞间基因表达的差异并结合聚合酶链反应技术来筛选和克隆新基因的方法。即先主观设定一对引物(称武断引物)，提取两种或多种待比较细胞的mRNA，用3′端武断引物逆转录成cDNA，再PCR扩增，产物用凝胶电泳显
平衡聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称平衡聚合酶链反应英文名称balanced PCR定 义为克服在扩增时发生非线性差异而设计的一种聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称锚定聚合酶链反应英文名称anchored PCR定 义在目的核酸片段一端人工加上确定的序列，以便用与所加序列互补的引物作扩增的聚合酶链反应方法。常用于对目的核酸片段序列本身或旁侧序列不清楚时的扩增。如通过DNA末端转移酶在未知序列DNA的3′端加上多(dG)尾，用含多(dC)的锚定引物对此
多重聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称多重聚合酶链反应英文名称multiplex PCR定 义在同一聚合酶链反应的反应管中加入多对引物，扩增同一模板的几个不同的区域的方法。常用于检测很长的特定序列(如人类肌养蛋白基因、视网膜母细胞瘤基因等)的缺失突变等变化。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
连接介导聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接介导聚合酶链反应英文名称ligationmediated PCR定 义由于样品中核酸含量低或序列不完全清楚，难以分析或使用，因而在样品序列末端连接上已知序列，使用与此已知序列互补的引物专一性地扩增目的DNA片段的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
易错聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称易错聚合酶链反应英文名称error-prone PCR定 义应用低保真度DNA聚合酶，并选择适当的反应条件，提高PCR反应中的碱基错配率，由此得到含有随机突变的PCR产物，可以克隆入表达载体，构建随机突变的DNA文库的一种使DNA随机突变的技术。能用于体外分子定向进化、基因或DNA序列功能
反向聚合酶链反应技术
我们描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延长经过环上的未知区而不是
什么是聚合酶链反应？
聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等
口蹄疫聚合酶链反应（PCR）
20世纪90年代初，PCR技术日趋成熟，也渗入到FMD的诊断中。这一技术特异性强，灵敏度高，可检测多种组织样品，检测病毒RNA的PCR方法已经成为FMDV检测方法中的一种，PCR方法具有极高的灵敏度（其理论值为一个病毒粒子的核酸），因为它仅需要极少量的反应模板，而且可以设计多循环PCR反应。由于仅
聚合酶链反应的控制方式
PCR反应的缓冲液 提供合适的酸碱度与某些离子镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L底物浓度 dNTP以等摩尔浓度配制，20～200umol/LTaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）引物 浓度一般为0.1 ～ 0.5umol/L反应温度和循环次数变性温度和时间 95℃，3
关于聚合酶链反应的概述
PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功的；最早的应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-
反向聚合酶链反应的定义
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶，切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段，将切出的DNA区段环化，然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
定量聚合酶链反应的定义
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应，对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
聚合酶链反应的污染来源
1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。2、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR
聚合酶链反应的基本步骤
主要分为三大步骤:高温变性、低温退火、适温延伸。分别添加引物、模板、Taq酶、dNTP和缓冲液等反应物混合,在约为95℃环境下,双链DNA氢键断裂解旋为单链;单链与人工设计的引物在约为60℃温度下,按照碱基互补配对的原则相结合;并升温到72℃左右,利用Taq酶延伸合成一条新的与模板DNA链互补的半保
连接锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接锚定聚合酶链反应英文名称ligationanchored PCR定 义对未知DNA序列的一种扩增技术。在未知序列末端连接已知的序列或添加同聚物尾序列(即锚序列)，在与锚序列互补的引物(锚引物)和基因另一侧特异性引物的作用下，将未知序列扩增出来。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），
不对称聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称不对称聚合酶链反应英文名称asymmetric PCR定 义引物用量不对称的聚合酶链反应。这两个引物分别称为非限制与限制性引物，反应中当低浓度的限制性引物消耗完后，高浓度的非限制性引物就引导产生大量的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个，另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科）
逆转录聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称逆转录聚合酶链反应英文名称reverse transcription PCR;RT-PCR定 义先将RNA通过逆转录酶的作用合成与之互补的DNA链，再以该链作模板进行聚合酶链反应扩增特定RNA序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
聚合酶链反应（PCR）在石蜡包埋组织中的应用
PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在体外将特异性目的DNA片段序列进行高效扩增的分子生物学新技术。自八十年代由美国Muilis发明这项技术以来，由于具有快速、敏感、特异及高效的特点，得以迅速推广，并从这一分子生物学基本技术扩展出一系列分子生物学研究方法。PCR扩增所需的模板DNA来源，也由从新
关于聚合酶链反应引物的量和TaqDNA聚合酶的量的介绍
（一）引物的量 引物在PCR反应中的浓度一般在0.1～1μmol/L之间。浓度过高易形成引物二聚体且产生非特异性产物。一般来说用低浓度引物经济、特异，但浓度过低，不足以完成30个循环的扩增反应，则会降低PCR的产率。 （二）TaqDNA聚合酶的量 典型PCR反应混合物中，所用酶浓度为2.5
聚合酶链反应的模板的制备
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌
聚合酶链反应的循环参数介绍
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。 [5] 变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败