聚合酶链反应剪接的原理和应用
中文名称聚合酶链反应剪接英文名称PCR splicing定 义利用聚合酶链反应进行基因剪接以删除DNA中一段特定序列的方法。系设计两组引物，先分别扩增拟删除序列上下游两侧的序列,再用上游序列5′端引物和下游序列3′端引物用PCR反应进行连接。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）......阅读全文
多重聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称多重聚合酶链反应英文名称multiplex PCR定 义在同一聚合酶链反应的反应管中加入多对引物，扩增同一模板的几个不同的区域的方法。常用于检测很长的特定序列(如人类肌养蛋白基因、视网膜母细胞瘤基因等)的缺失突变等变化。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
连接介导聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接介导聚合酶链反应英文名称ligationmediated PCR定 义由于样品中核酸含量低或序列不完全清楚，难以分析或使用，因而在样品序列末端连接上已知序列，使用与此已知序列互补的引物专一性地扩增目的DNA片段的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
易错聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称易错聚合酶链反应英文名称error-prone PCR定 义应用低保真度DNA聚合酶，并选择适当的反应条件，提高PCR反应中的碱基错配率，由此得到含有随机突变的PCR产物，可以克隆入表达载体，构建随机突变的DNA文库的一种使DNA随机突变的技术。能用于体外分子定向进化、基因或DNA序列功能
反向聚合酶链反应技术
我们描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延长经过环上的未知区而不是
什么是聚合酶链反应？
聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等
口蹄疫聚合酶链反应（PCR）
20世纪90年代初，PCR技术日趋成熟，也渗入到FMD的诊断中。这一技术特异性强，灵敏度高，可检测多种组织样品，检测病毒RNA的PCR方法已经成为FMDV检测方法中的一种，PCR方法具有极高的灵敏度（其理论值为一个病毒粒子的核酸），因为它仅需要极少量的反应模板，而且可以设计多循环PCR反应。由于仅
聚合酶链反应的控制方式
PCR反应的缓冲液 提供合适的酸碱度与某些离子镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L底物浓度 dNTP以等摩尔浓度配制，20～200umol/LTaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）引物 浓度一般为0.1 ～ 0.5umol/L反应温度和循环次数变性温度和时间 95℃，3
关于聚合酶链反应的概述
PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功的；最早的应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-
反向聚合酶链反应的定义
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶，切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段，将切出的DNA区段环化，然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
聚合酶链反应的反应特点
特异性强PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性，使反应中模
定量聚合酶链反应的定义
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应，对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
聚合酶链反应的污染来源
1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。2、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR
聚合酶链反应的基本步骤
主要分为三大步骤:高温变性、低温退火、适温延伸。分别添加引物、模板、Taq酶、dNTP和缓冲液等反应物混合,在约为95℃环境下,双链DNA氢键断裂解旋为单链;单链与人工设计的引物在约为60℃温度下,按照碱基互补配对的原则相结合;并升温到72℃左右,利用Taq酶延伸合成一条新的与模板DNA链互补的半保
连接锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接锚定聚合酶链反应英文名称ligationanchored PCR定 义对未知DNA序列的一种扩增技术。在未知序列末端连接已知的序列或添加同聚物尾序列(即锚序列)，在与锚序列互补的引物(锚引物)和基因另一侧特异性引物的作用下，将未知序列扩增出来。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个，另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科）
逆转录聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称逆转录聚合酶链反应英文名称reverse transcription PCR;RT-PCR定 义先将RNA通过逆转录酶的作用合成与之互补的DNA链，再以该链作模板进行聚合酶链反应扩增特定RNA序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
聚合酶链反应（PCR）在石蜡包埋组织中的应用
PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在体外将特异性目的DNA片段序列进行高效扩增的分子生物学新技术。自八十年代由美国Muilis发明这项技术以来，由于具有快速、敏感、特异及高效的特点，得以迅速推广，并从这一分子生物学基本技术扩展出一系列分子生物学研究方法。PCR扩增所需的模板DNA来源，也由从新
不对称聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称不对称聚合酶链反应英文名称asymmetric PCR定 义引物用量不对称的聚合酶链反应。这两个引物分别称为非限制与限制性引物，反应中当低浓度的限制性引物消耗完后，高浓度的非限制性引物就引导产生大量的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
关于聚合酶链反应引物的量和TaqDNA聚合酶的量的介绍
（一）引物的量 引物在PCR反应中的浓度一般在0.1～1μmol/L之间。浓度过高易形成引物二聚体且产生非特异性产物。一般来说用低浓度引物经济、特异，但浓度过低，不足以完成30个循环的扩增反应，则会降低PCR的产率。 （二）TaqDNA聚合酶的量 典型PCR反应混合物中，所用酶浓度为2.5
聚合酶链反应的模板的制备
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌
聚合酶链反应的循环参数介绍
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。 [5] 变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败
关于聚合酶链反应模板的介绍
单、双链DNA或RNA都可以作为PCR的样品。若起始材料是RNA，须先通过逆转录得到第一条cDNA。虽然PCR可以仅用极微量的样品，甚至是来自单一细胞的DNA，但为了保证反应的特异性，还应用ng级的克隆DNA，μg水平的单拷贝染色体DNA或104拷贝的待扩增片段作为起始材料，模板可以是粗品，但不
聚合酶链反应的电泳分析
在实际工作中常采用琼脂糖凝胶电泳。一般情况下先在电泳缓冲液或凝胶中加1%溴化乙锭（EB）（每100ml加100μl），然后将已经制备好的1%～2%琼脂糖凝胶（用电泳缓冲液配制）放入电泳槽内，加入待测样品10μl，同时用分子量标准品作标记。琼脂糖浓度应按分离DNA片段的大小进行选择，一般用1.5%
聚合酶链反应的引物设计原则
PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。（1）引物设计的基本原则引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱基：G+
逆转录聚合酶链反应
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得
聚合酶链反应构建重组DNA
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材 电泳仪离心机PCR仪实验步骤 1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物，若PCR产物要进行平端克隆，就应该对引物的5’端羟基进行磷酸化处理。 图一
核酸扩增—普通聚合酶链反应
把DNA分子变性后解链，两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合，在4种dNTP存在和合适的条件下，由DNA聚合酶催化引物由5'到3'扩增延长，每经过变性、复性、延伸一个循环，模板DNA增加1倍，新合成的DNA链又可作为下一个循环的模板，经过30-50个循环，可使原DNA量增加
逆转录聚合酶链反应
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得
聚合酶链反应PCR反应体系
PCR是20世纪80年代由美国西特斯公司的一批科学家、技术人员和商人发明的，主要发明者凯利·穆利斯（Kary Mullis）因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。其他科学家和技术人员，包括厄立克（Henry Erlieh）、安海姆（Norman Arnheim）、才木（Ran—daliSaiki）、霍
聚合酶链反应构建重组DNA
2016年09月12日 15:27 来源:上海江林生物科技有限公司>>进入该公司展台 实验材料DNA试剂、试剂盒TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材电泳仪离心机PCR仪实验步骤1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷