聚合酶链反应剪接的原理和应用
中文名称聚合酶链反应剪接英文名称PCR splicing定 义利用聚合酶链反应进行基因剪接以删除DNA中一段特定序列的方法。系设计两组引物,先分别扩增拟删除序列上下游两侧的序列,再用上游序列5′端引物和下游序列3′端引物用PCR反应进行连接。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)......阅读全文
聚合酶链反应剪接的原理和应用
中文名称聚合酶链反应剪接英文名称PCR splicing定 义利用聚合酶链反应进行基因剪接以删除DNA中一段特定序列的方法。系设计两组引物,先分别扩增拟删除序列上下游两侧的序列,再用上游序列5′端引物和下游序列3′端引物用PCR反应进行连接。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二
剪接重叠延伸聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称剪接重叠延伸聚合酶链反应英文名称splicing overlapping extension PCR;SOE-PCR定 义利用一系列聚合酶链反应,使产物两端彼此重叠,以便剪接成长片段,其间越过某段序列可使之缺失的PCR方法。一些基因工程抗体就是用此法制备的。应用学科生物化学与分子生物学(一
实时聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称实时聚合酶链反应英文名称real-time PCR定 义一种定量测定样品中特定DNA序列的聚合酶链反应。即使用标记(最常用是荧光标记)的PCR引物,因而能够通过荧光监测到每一次PCR循环后扩增所得DNA产物的量,从连续监控下获得的反应动力学曲线,可推导得样品中被扩增模板DNA的原初含量。应
反向聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
随机聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称随机聚合酶链反应英文名称random PCR定 义采用许多序列不相同的(部分随机或全部随机序列)、短的(约10个核苷酸)引物所进行的聚合酶链反应。由于在模板DNA多个不同位置上扩增,所形成的产物长度各异,电泳图谱独特,可用于识别核酸的多态性、研究基因组的物理图谱及分析生物的进化等。应用学科
聚合酶链反应原理介绍
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最
聚合酶链反应克隆的原理
中文名称聚合酶链反应克隆英文名称PCR cloning定 义应用聚合酶链反应的技术获得DNA分子克隆的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用1
第一节 概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作
聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用2
第五节 PCR各处应用模式 一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR 密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,
聚合酶链反应的常规应用介绍
用于治疗感染性疾病,肿瘤及遗传病。感染性疾病PCR在医学检验学中最有价值的应用领域就是对感染性疾病的诊断。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR就可以检测到。一般实验室也能检出10~100基因拷贝,而目前病原体抗原检测方法一般需要105-7个病原体才可检测到。PCR对病原体的检测解决了免疫学检测的
定量聚合酶链反应的应用特点
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应,对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
聚合酶链反应[PCR]实验原理和操作步骤(2)
【实验目的】了解聚合酶链反应(PCR)的基本原理及其影响因素,掌握PCR的基本操作过程。[仪器]PCR仪、台式离心机、电泳仪、电泳槽、紫外检测仪[试剂]1、引物:用去离子水配成10 μmol /μL。2、Taq聚合酶3、10×PCR反应缓冲液(加镁离子)4、dNTPs:四种核苷酸混合物,浓度为10m
聚合酶链反应[PCR]实验原理和操作步骤(1)
【实验原理】聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术是美国Cetus公司人类遗传研究所的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种体外扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特异性、灵敏度,在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以及临床标
聚合酶链反应的用途和特性
PCR反应扩增出了高的拷贝数,下一步检测就成了关键。荧光素(溴化乙锭,EB)染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的,因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行,成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法,有逐渐取代电泳法的趋势。
逆转录聚合酶链反应的原理
组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA.再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达.RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能.该技术主要用于:分析基因的转录产物,
阻抑聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称阻抑聚合酶链反应英文名称suppression PCR定 义抑制非特异扩增、而选择性扩增那些只知道部分序列目的DNA的一种聚合酶链反应方法。即先在所有的DNA 5′端加上人工接头,设计引物一个与人工接头互补,另一个与目的DNA互补,非特异PCR产物由于两端有颠倒重复序列,退火时会自身形成环
阻抑聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称阻抑聚合酶链反应英文名称suppression PCR定 义抑制非特异扩增、而选择性扩增那些只知道部分序列目的DNA的一种聚合酶链反应方法。即先在所有的DNA 5′端加上人工接头,设计引物一个与人工接头互补,另一个与目的DNA互补,非特异PCR产物由于两端有颠倒重复序列,退火时会自身形成环
Alu聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称Alu聚合酶链反应英文名称Alu-PCR定 义从复杂来源样品中特异扩增人基因组DNA的方法。Alu是人基因组中特有的高度重复序列,散布于整个人的基因组中。设计能识别Alu保守区序列的聚合酶链反应引物,就能特异地扩增获得人基因组DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二
竞争聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称竞争聚合酶链反应英文名称competitive PCR;cPCR定 义在反应体系中加入已知含量的内参照竞争模板,该模板与待测模板可以等效扩增,扩增过程中或扩增结束后,可用某些手段区分和定量待测物和竞争物的扩增产物,比较两者的量即可知待测模板含量的一种定量聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与
原位聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称原位聚合酶链反应英文名称in situ PCR定 义在DNA模板分子原来所在的位置处(如细胞、组织中)进行聚合酶链反应的技术。能够直接指示出DNA模板的部位。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
逆转录聚合酶链反应的技术应用
RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
聚合酶链反应技术的临床应用及现状
PCR是英文Polymerase chain reaction的缩写,翻译过来,称为聚合酶链反应。PCR自1983年由美国加利福尼亚的Cetus公司的Mullis博士发明到现在,虽只短短的二十多年,但其在生命科学研究和临床分子诊断中,已毫无争议的成为“支点”工具。如果没有PCR,人类基因组计
定量聚合酶链反应
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应,对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
反向聚合酶链反应
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
聚合酶链反应的过程
标准的PCR过程分为三步:DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′
反转录聚合酶链反应的功能和特点
RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用,从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术,其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的,借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称锚定聚合酶链反应英文名称anchored PCR定 义在目的核酸片段一端人工加上确定的序列,以便用与所加序列互补的引物作扩增的聚合酶链反应方法。常用于对目的核酸片段序列本身或旁侧序列不清楚时的扩增。如通过DNA末端转移酶在未知序列DNA的3′端加上多(dG)尾,用含多(dC)的锚定引物对此
平衡聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称平衡聚合酶链反应英文名称balanced PCR定 义为克服在扩增时发生非线性差异而设计的一种聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
差示聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称差示聚合酶链反应英文名称differential display PCR定 义利用组织细胞间基因表达的差异并结合聚合酶链反应技术来筛选和克隆新基因的方法。即先主观设定一对引物(称武断引物),提取两种或多种待比较细胞的mRNA,用3′端武断引物逆转录成cDNA,再PCR扩增,产物用凝胶电泳显