寡核苷酸定点诱变的概念
中文名称寡核苷酸定点诱变英文名称oligonucleotidedirected mutagenesis定 义人工获得特定核酸定点突变的一种方案。将需要改变的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部，在单链噬菌体(如M13)模板上用克列诺酶合成有指定变化的负链，再通过噬菌体复制得到含突变的双链。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）......阅读全文
反义寡核苷酸简介
反义寡核苷酸(AON)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达，在基因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸(phosphorothioate oligonucleotides，简称PS2ODNs)，是用硫原子将磷酸骨架上的非成键氧原子取代后形成的一类新的寡核苷酸类似物
寡核苷酸微阵列的定义
中文名称寡核苷酸微阵列英文名称oligonucleotide array定 义将一定长度、序列不同的寡核苷酸有序地排列固定在支持物（如玻璃片、尼龙膜等）上，供分子杂交分析的系统。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
寡核苷酸微阵列的定义
中文名称寡核苷酸微阵列英文名称oligonucleotide array定 义将一定长度、序列不同的寡核苷酸有序地排列固定在支持物（如玻璃片、尼龙膜等）上，供分子杂交分析的系统。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
寡核苷酸介导的诱变实验
用突变的寡核苷酸引导模板的合成，从而改变DNA序列，突变效率可达50~80%。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材水浴锅电泳仪培养箱实验步骤1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中
筛选寡核苷酸针的原则
筛选寡核苷酸针的原则下面是筛选寡核苷酸针的一些原则。一.长18～50nt，较长探针杂交时间较长，合成量低；较短探针特异性会差些。二.碱基成分：G+C含量为40%～60%，超出此范围则会增加非特异杂交。三.探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的“发夹”状结构。四.避免单一碱基的重复出现（不
寡核苷酸介导的诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中，60℃温育5 min，以杀灭细菌细胞，剧烈振荡以释放琼脂中的噬菌体，
寡核苷酸探针的制备方法
寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。
寡核苷酸探针的用途介绍
寡核苷酸探针还有一个重要用途。在用于检测单个碱基差异时尚可采用一种称为寡核苷酸限制（oligonucleotiderestriction）的技术。该技术只有在突变点位于某一限制性内切酶识别位点时才有效。例如，镰刀状红细胞贫血是因β珠蛋白基因的第6个寡码子由GAG变成GTG，从而导致所编码氨基酸由酪氨
寡核苷酸介导的诱变实验
基本方案 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
关于寡核苷酸的应用介绍
寡核苷酸常用来作为探针确定DNA或RNA的结构，用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中 。 寡核苷酸合成的DNA（脱氧核糖核酸）可以用于链聚合反应，能放大确定几乎所有DNA的片段，在这个过程中寡核苷酸是作为引物，和DNA 中标记的互补片段结合，作成DNA的复制品。 调控寡核苷酸用于抑制R
寡核苷酸探针的来源介绍
DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。此外，还可在体外人工合成碱基数不
筛选寡核苷酸针的原则
一.长18～50nt，较长探针杂交时间较长，合成量低；较短探针特异性会差些。二.碱基成分：G+C含量为40%～60%，超出此范围则会增加非特异杂交。三.探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的“发夹”状结构。四.避免单一碱基的重复出现（不能多于4个），如-CCCCC-。五.一旦选定某一序更
筛选寡核苷酸针的原则
一.长18～50nt，较长探针杂交时间较长，合成量低；较短探针特异性会差些。二.碱基成分：G+C含量为40%～60%，超出此范围则会增加非特异杂交。三.探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的“发夹”状结构。四.避免单一碱基的重复出现（不能多于4个），如-CCCCC-。五.一旦选定某一序更
寡聚核苷酸定点诱变技术的基本原理
寡聚核苷酸定点诱变技术是由加拿大的生物化学家M.史密斯（1932）发明的。其基本原理如下：应用寡聚核苷酸进行DNA的定点诱变时，首先要把含有待突变的DNA片段克隆到MI3噬菌体载体中，MI3噬菌体的正链可以感染具有纤毛的细菌，并在细菌体内进行复制后，以出芽的形式形成新的带有正链DNA的噬菌体。而存留
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
简并寡核苷酸诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机分光光度计实验步骤 1. 设计寡核苷酸，其3‘端含有由8个核苷酸组成的回文结构，且包含某一限制性内切酶的识别位点；如果可能的话，5’端也应有一含某个限制性内切酶位点的序列。中间区段则应含目
简并寡核苷酸诱变实验
小段DNA序列中产生大量突变 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
寡核苷酸探针技术介绍
利用寡核苷酸探针可检测到靶基因上单个核苷酸的点突变。常用的寡核苷酸探针主要有两种:单一已知序列的寡核苷酸探针和许多简并性寡核苷酸探针组成的寡核苷酸探针库。单一已知序列寡核苷酸探针能与它们的目的序列准确配对,可以准确地设计杂交条件,以保证探针只与目的序列杂交而不与序列相近的非完全配对序列杂交,对于一些
简并寡核苷酸诱变实验
本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交，因此，寡核苷酸实际上起互为引物的作用，在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
合成寡核苷酸探针的技术步骤
首先使支持物羟基化，并用光敏保护基团将其保护起来。每次选取择适当的蔽光膜（mask）使需要聚合的部位透光，其它部们不透光。这样，光通过蔽光膜照射到支持物上，受光部位的羟基解保护。因为合成所用的单体分子一端按传统固相合成方法活化，另一端受光敏保护基的保护，所以发生偶联的部位反应后仍旧带有光敏保护基团。
寡核苷酸连接分析的技术方法
中文名称寡核苷酸连接分析英文名称oligonucleotide ligation assay定 义一种测定等位基因单碱基突变的方法，用以确定基因是正常(野生型)还是缺陷(突变型)的。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
反义寡核苷酸的基本内容
反义寡核苷酸(AON)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达，在基因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸(phosphorothioate oligonucleotides，简称PS2ODNs)，是用硫原子将磷酸骨架上的非成键氧原子取代后形成的一类新的寡核苷酸类似物
关于寡核苷酸探针的标记介绍
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素-亲合素系统 、地高辛配体等作为标记物的方法。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
寡核苷酸阵列的原理和应用
微阵列（DNA Microarray）也叫寡核苷酸阵列（Oligonucleotide array），是人类基因组计划（Human Genome Project，HGP）的逐步实施和分子生物学的迅猛发展及运用的产物，它是生物学家受到计算机芯片制造和广为应用的启迪，融微电子学、生命科学、计算机科学和光
寡核苷酸的功能特点和用途
寡核苷酸(Oligonucleotide)，一般是指2~10核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段，但在使用这一术语时，对核苷酸残基的数目并无严格规定，在不少文献中，把含有30甚至更多核苷酸残基的多核苷酸分子也称作寡核苷酸。寡核苷酸可由仪器自动合成，它可作为DNA合成的引物(Primer)
关于寡核苷酸探针的制备的介绍
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针前，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外
FDA批准的寡核苷酸类药物及在研反义寡核苷酸类药物一览
寡核苷酸，是一类20个左右碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸)。寡核苷酸可以很容易地和它们的互补链结合，所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构；而其作为药物候选应用的研究则始于大约30年前，包括了反义寡核苷酸(ASOs)，核酸适配体(apatmers)及
简并寡核苷酸基因混编实验
蛋白酶生化性质的改善可以通过对该酶基因的错掺突变和 DNA 混编方法实现。混编技术可用于同一基因的一组突变体，或者对相关家族基因的片段进行新的组合，产生嵌合突变基因产物。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料pBSII KS 质粒大肠杆菌 DH5α试剂、