酵母双杂交系统的功能特点和应用
酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质分别克隆(融合)到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活域(AD)上,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。......阅读全文
酵母双杂交原理(蛋白相互作用)
概述酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者
双杂交和其他双成分系统实验(一)
实验材料 载体和酵母菌试剂、试剂盒 缓冲液和溶液SDS 凝胶上样缓冲液SDS 聚丙烯酰胺凝胶核酸和寡核苷酸抗体培养基仪器、耗材 专用设备实验步骤 第一阶段 诱饵-LexA 融合蛋白的鉴定材料缓冲液和溶液将贮存液稀释到适当浓度。2XSDS 凝胶上样缓冲液100 mmol/L Tris-Cl(pH6.
双杂交和其他双成分系统实验(四)
21. 测定转录活化。这个实验可以利用牙签重新划线培养或利用多支管/蛙形器来进行,在分析大量阳性克隆时,多支管/蛙形器是非常有用的(有关蛙形器的详细情况请参见图 18-10)。1) 通过直接划线培养测定a. 使用一个平头牙签分别在下面的 4 个平板上复制和主板上相同的栅格。使用相同的牙签在四个平板上
双杂交和其他双成分系统实验(五)
离心机和转子Sorvall RT6000 离心机,H1000B MPC 和 H6000A MPC 转子(离心微量滴定板用)专用设备玻璃珠(直径 0.45 mm, 无菌;Sigma)微量滴定板(24 孔或 96 孔 [可选])重复用移液管可选,请参见步骤 1。附加试剂此方案的步骤 2 需要第 1 章方
双杂交和其他双成分系统实验(-一)
实验材料载体和酵母菌试剂、试剂盒缓冲液和溶液SDS 凝胶上样缓冲液SDS 聚丙烯酰胺凝胶核酸和寡核苷酸抗体培养基仪器、耗材专用设备实验步骤第一阶段 诱饵-LexA 融合蛋白的鉴定材料缓冲液和溶液将贮存液稀释到适当浓度。2XSDS 凝胶上样缓冲液100 mmol/L Tris-Cl(pH6.8)20
双杂交和其他双成分系统实验(二)
第二阶段 筛选一个相互作用子材料缓冲液和溶液将贮存液稀释至适当的浓度二甲基亚砜(DMSO)乙醇可选择,请参见步骤 9。冻存转化体用的无菌甘油溶液65% 无菌甘油0.1mol/LMgS0425 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)TE(pH7.5)(无菌)TE(pH7.5),含 0.1mol/
双杂交和其他双成分系统实验(三)
第三阶段 阳性相互作用的再次确定材料缓冲液和溶液乙酸铵(7.5 ml/L)氯仿乙醇异丙醇裂解液酶解酶 100T 以 2~5 mg/ml 溶解于拯救缓冲液中或β-葡糖醛酸酶 100000 单位/ml(Sigma)按 1:50 稀释于拯救缓冲液中每次使用均需配置新鲜的溶液。酚(早衡至 pH8.0)拯救
双杂交和其他双成分系统实验(三)
方法转化文库1. 挑选一个在第一阶段的原始对照试验中状态最好的表达诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道子的酵母菌落,接种于 20 ml CM(Glu)-Ura-His 液体培养基中,30°C 摇动过夜培养。重要:应该在用文库重新转化之前 7~10d 内,将诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道
双杂交和其他双成分系统实验(二)
方法诱饵-LexA 融合蛋白的构建1.将编码诱饵蛋白的靶 DNA 克隆到 LexA 融合载体(如,pMW101 或 pMW103) 的多聚接头处,以合成一种框架内的 LexA 融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的质粒作为 pBait。2. 采用下列 LexA 融合基因和报道质粒的组
简述甲醇酵母表达系统的应用前景
经过近几年的发展完善,甲醇酵母表达系统已日趋成熟,应用也日趋广泛。国内已有多篇在甲醇酵母中生产外源蛋白质成功的报道。美国Invitrogen公司也已开发出多种新型的甲醇酵母表达系统试剂盒,如Multi-copy Pichia Expression Kit、Easyselect Pichia Ex
瘦蛋白的功能和应用特点
瘦蛋白在动物实验中,对鼠腹腔注射瘦蛋白,肥胖鼠和正常鼠的体重都下降,脂肪含量也下降。瘦蛋白是通过调节代谢和食欲来实现控制体重和脂肪沉积。瘦蛋白产生于脂肪细胞,是一种激素样物质,能从脂肪细胞分泌入血液,已发现在脉络丛及下丘脑处存在有瘦蛋白的受体(Lep-R)。瘦蛋白也许是通过反馈系统来调节体重,它有可
细胞色素的应用和功能特点
细胞色素是一类以铁卟啉(或血红素)作为辅基的电子传递蛋白,广泛参与动、植物,酵母以及好氧菌、厌氧光合菌等的氧化还原反应。细胞色素作为电子载体传递电子的方式是通过其血红素辅基中铁原子的还原态(Fe2+)和氧化态(Fe3+)之间的可逆变化。任何一类细胞蛋白(血红素蛋白),在细胞能量转移中起着极为重要的作
DNA测序的功能和应用特点
DNA测序(DNA sequencing,或译DNA定序)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤(G)的排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。在基础生物学研究中,和在众多的应用领域,如诊断,生物技术,法医生物学,
细菌疫苗的功能和应用特点
细菌感染性疾病是一类严重危害人类健康的疾病,目前,临床上用于治疗细菌感染性疾病的药物主要为抗菌药物,但抗菌药物的滥用导致耐药菌尤其是多重耐药菌迅速增加,使其不能有效控制感染,成为临床处理的难题,也给社会带来了沉重的经济负担。细菌疫苗能提高易感人群对病原菌的抵抗力,降低病原菌感染的发生率,有利于感染性
酪蛋白的功能和应用特点
酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白,对酸敏感,pH较低时会沉淀。酪蛋白是哺乳动物包括母牛,羊和人奶中的主要蛋白质,又称:干酪素、酪朊、乳酪素。α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白,人乳中没有α-酪蛋白,以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源,也是钙和磷的来源,酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。
重组[酵母]乙肝疫苗的功能特点
中文名称重组[酵母]乙肝疫苗英文名称hepatitis B vaccine made by recombinant DNA technique in yeast定 义一种预防乙型肝炎的疫苗。即借助基因工程技术,使酵母细胞表达重组的乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg),经纯化并加佐剂吸附而制成。应用学
无细胞翻译系统的特点和应用
中文名称无细胞翻译系统英文名称cell-free translation system定 义没有完整细胞的体外蛋白质翻译合成系统。通常利用无细胞提取物提供所需要的核糖体、转移核糖核酸、酶类、氨基酸、能量供应系统及无机离子等,在试管中以外加的信使核糖核酸(mRNA)指导蛋白质的合成。常用的无细胞提取
霉菌和酵母菌的特点
霉菌:1、霉菌形成分枝菌丝的真菌的统称。在分类上属于真菌,在固体基质上生长时,部分菌丝深入基质吸收养料,称为基质菌丝或营养菌丝;2、向空中伸展的称气生菌丝,可进一步发育为繁殖菌丝,产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等,称为菌丝体。3、菌丝体常呈白色、褐色、灰色,或呈鲜艳的颜色,有的可产生色素
时间检定仪的功能特点和应用
产品功能 可供各级计量部门、工厂、院校及各科研单位检定401/405电秒表,407/408电秒表、411数字式毫秒计、415/417/417B型数字式电秒表等时间类仪器 产品特点 a) 精度高、高性价比; b) 功能齐全、性能可靠; c) 采用高稳定度石英晶体振荡器作为时间基准。 典
阿折地平的功能特点和应用
阿折地平属于二氢吡啶(DHP)类钙通道阻滞剂(CCB),CCB类作为一线高血压治疗药,由于降压效果可靠性而被广泛应用。阿折地平具有利尿作用、心保护作用、肾保护作用以及抗动脉硬化作用。有着这些特点的阿折地平作为理想的该通道阻滞药物对于高血压治疗具有划时代意义。临床上广泛用于轻症或中等症状原发性高血压,
电子探针的功能和应用特点
电子探针是一种利用电子束作用样品后产生的特征X射线进行微区成分分析的仪器,可以用来分析薄片中矿物微区的化学组成。除H、He、Li、Be等几个较轻元素外,还有U元素以后的元素以外都可进行定性和定量分析。电子探针的大批量是利用经过加速和聚焦的极窄的电子束为探针,激发试样中某一微小区域,使其发出特征X射线
投影系统的功能特点
中文名称投影系统英文名称projecting system定 义将物体照明后成像于投影屏上的光学系统。应用学科机械工程(一级学科),光学仪器(二级学科),光学仪器一般名词(三级学科)
光系统Ⅱ的功能特点
PSⅡ的功能是利用从光中吸收的能量将水裂解,并将其释放的电子传递给质体醌,同时通过对水的氧化和PQB2-的还原在类囊体膜两侧建立H+质子梯度。PSⅡ行使功能的前提是吸收光能,PSⅡ将LCHⅡ吸收的光能传递给PSⅡ反应中心,使中心色素产生一个高能电子,并传递给原初电子受体。这一过程产生了带正电荷的供体
多能干细胞的功能和应用特点
多能干细胞:顾名思义,多能干细胞具有产生多种类型细胞的能力,但却失去了发育成完整个体的能力,发育潜能受到一定的限制。例如,造血干细胞可分化出至少12种血细胞,骨髓间充质干细胞可以分化为多种中胚层组织的细胞(如骨、软骨、肌肉、脂肪等)及其他胚层的细胞(如神经元)。科学家们趋向于将分化潜能更广的干细胞称
单能干细胞的功能和应用特点
单能干细胞(也称专能、偏能干细胞):常被用来描述在成体组织、器官中的一类细胞,意思是此类细胞只能向单一方向分化,产生一种类型的细胞。在许多已分化组织中的成体干细胞是典型的单能干细胞,在正常的情况下只能产生一种类型的细胞。如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞又叫卫星细胞。这种组织是处于一种稳定的
全能干细胞的功能和应用特点
全能干细胞:具有自我更新和分化形成任何类型细胞的能力,有形成完整个体的分化潜能,如胚胎干细胞,具有与早期胚胎细胞相似的形态特征和很强的分化能力,可以无限增殖并分化成为全身200多种细胞类型,进一步形成机体的所有组织、器官 。
翻滚启动子的功能和应用特点
中文名称翻滚启动子英文名称flip-flop promoter定 义可颠倒的启动子。最早见于沙门氏菌的两种鞭毛蛋白基因的交替表达。这些基因都受一个可以颠倒的DNA片段控制,在一个顺式作用因子的调节下,这个片段从不同的方向驱动不同基因的表达,后来发现奇异变形杆菌的氯霉素抗性基因和珠蛋白基因等基因的表
生物显微镜的功能特点和应用
生物显微镜是一种用来观察生物切片、生物细胞、细菌以及活体组织培养、流质沉淀等也可以观察其他透明或者半透明物体以及粉末、细小颗粒等物体的精密光学仪器。生物显微镜用来供医疗卫生单位、高等院校、研究院所用于微生物、细胞、细菌、组织培养、悬浮体、沉淀物等的观察,可连续观察细胞、细菌等在培养液中繁殖分裂的过程
土壤分析仪应用和功能特点
土壤分析仪是一种常用的分析仪器,主要用于土壤的组成成分或土壤的物理化学性质的分析,对土壤进行发育、肥力演变、土壤资源评价等。今天小编主要来介绍一下土壤分析仪应用和功能特点,希望可以帮助到大家。土壤分析仪应用土壤分析对土壤学的发展有着很大的影响。土壤分析仪对土壤的分析主要是测定土壤的各种化学成分的含量
蛋白质组的分析鉴定方法主要有哪些
为探究生物进程的分子机制,需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用.研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下:一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道 基因在酵母细胞内的表