DNA荧光组织化学染色的方法
一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B)，按直接法进行染色。二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色，再用FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy3复合物，经荧光显微镜下观察已出现特异性荧光，再进行FITC―抗小鼠IgG(二抗)的孵育，最后封片观察。其结果A抗原呈现绿色荧光，B抗原呈现红色荧光。......阅读全文
生物芯片（DNA微阵列）荧光扫描仪中的激光共聚...（二）
释放光采集荧光由目镜的镜头来采集，该镜头聚焦于样品上并将一定区域内的光线收集到装置。收集的角度区域的大小非常关键，荧光释放是球形的，目镜对荧光的采集范围是决定仪器的采集效率关键指标之一。目镜采集光的角度由数值孔径来表示，图2表示了数值孔径与光采集效率之间的变化关系。当数值孔径为1.0时，目镜将收集到
我国利用单分子荧光技术揭示DNA三联体两种结构
DNA是生物遗传信息的重要载体，除了经典双螺旋结构外，在真核生物染色体基因调控序列以及端粒中还广泛存在一种G四联体结构。G四联体结构在调控基因表达和维持基因组稳定性等生物学过程中扮演着重要角色。单分子荧光技术是观察与测量生物大分子构象变化的重要手段，非常适合观察G四联体结构的折叠过程。中科院物理
研究实现活细胞及线虫体内DNA和RNA的同步荧光成像
近期，中国科学院合肥物质科学研究院智能机械研究所智能微纳器件研究室研究员张忠平和王振洋领导的团队在生物体核酸结构的同步原位影像分析方面取得新进展，合成了一种具有高效生物膜穿透能力的阳离子碳量子点，实现了对活细胞及线虫体内DNA和RNA的同步荧光成像。相关研究成果发表在国际化学期刊《德国应用化学》
DNA定量法比较——紫外—可见吸收光谱和荧光光谱优势比较
通常情况下，对定量DNA应用荧光或紫外-可见光谱。两种方法各有优缺点，重要的是应考虑在整个分析中，包括上、下游工艺的方法。 对分子生物学家而言，DNA定量是一种重要而常规的技术。量化数据本身很少被当作实验的最终结果，更常见的是将其作为生物源提取物和下游使用、分析之间的桥梁。定量是重要的，但
生物芯片（DNA微阵列）荧光扫描仪中的激光共聚...（一）
生物芯片（DNA微阵列）荧光扫描仪中的激光共聚焦扫描技术所有的微阵列上的荧光须经荧光扫描装置来分析其上的荧光强度和分布，在这些装置中，激光共聚焦扫描仪具有优越的性能，能获取高质量的图像和数据，本文将分别介绍微阵列的相关特性和各种类型的微阵列扫描仪，激光共聚焦扫描仪的设计和关键特性，另外还将介绍一种已
荧光定量PCR检测HBV－DNA准确性的影响因素及解决措施
现在国内多数三级医院都用自动荧光聚合酶链式反应(PCR)扩增仪检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA。但在临床实践中发现,不同仪器之间检测结果差异较大。这对在同一医院用同一台仪器检测结果的意义影响不大,但在不同医院用不同仪器检测的结果如果存在差异,则会使医师难以判断患者检测指标的准确意义,从而使患者不得不
一种荧光物质能与DNA受损产生的γH2AX结合
英国研究人员6日报告说，许多癌症发生时都会产生一种特殊分子，对其进行追踪可以提前检测出癌症发病迹象，这一技术还可进一步用于癌症治疗。 英国牛津大学研究人员当天在英国癌症研究所组织的学术会议上报告了这项成果。据介绍，许多癌症的发病机理都与DNA受损有关，而DNA受损时会产生一种名为γH2AX的
生物芯片（DNA微阵列）荧光扫描仪中的激光共聚...（三）
以下要介绍共聚焦扫描微阵列的工作原理，顾名思义，共聚焦扫描仪将视野中的两个聚焦点的影象装配为二维图象，工作过程如所示：平行的激光束通过光束分离器后进入目镜，目镜采集到部分球状散射的荧光释放光并使这些光成为平行的光束，此外还采集被反射的激光，这些激光的强度要比荧光强度大3-7倍。采集回来的光束再次通过
DNA定量法比较—紫外—可见吸收光谱和荧光光谱优势比较
通常情况下，对定量DNA应用荧光或紫外-可见光谱。两种方法各有优缺点，重要的是应考虑在整个分析中，包括上、下游工艺的方法。 对分子生物学家而言，DNA定量是一种重要而常规的技术。量化数据本身很少被当作实验的最终结果，更常见的是将其作为生物源提取物和下游使用、分析之间的桥梁。定量是重要的，但
《纺织品山羊绒绵羊毛定量DNA检测荧光PCR法》通过
日前，在全国纺织品标准审定会上，上海检验检疫局工业品中心主持制定的国家标准《纺织品山羊绒绵羊毛定量DNA检测荧光PCR法》顺利通过审定。该标准是首次将DNA技术运用到羊毛羊绒定量检测中，突破了羊毛羊绒检测只能依赖主观经验判断的传统检测模式，从而推动我国在该领域的检测技术达到国际先进水平。 山羊
新型DNA结构的荧光张力探针于活细胞机械力可视化研究
电学、化学和力学是细胞内最常见的三大信号系统，它们相互协调，共同维持着细胞的生命活动。前两者已被人们广泛研究,而细胞的机械力信号传递过程因缺少有效的研究方法，人们一直对其认识有限。研究表明，细胞在体内拥挤的环境中不仅通过挤来挤去以获得足够的生存空间，同时，细胞的生命过程也不断的受到挤压、拉伸、弯
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠什么发出荧光的
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠荧光染色剂溴化乙锭发出荧光的。溴化乙锭为一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠什么发出荧光的
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠荧光染色剂溴化乙锭发出荧光的。溴化乙锭为一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基
细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶...
（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法：用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完全培养基不加药物的阴性对照，并用功能明确的药物为阳性对照和0.5%的乙醇溶剂对照，每
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组技术(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
生物芯片(DNA微阵列)荧光扫描仪中的激光共聚焦扫描技术
所有的微阵列上的荧光须经荧光扫描装置来分析其上的荧光强度和分布，在这些装置中，激光共聚焦扫描仪具有优越的性能，能获取高质量的图像和数据，本文将分别介绍微阵列的相关特性和各种类型的微阵列扫描仪，激光共聚焦扫描仪的设计和关键特性，另外还将介绍一种已商品化的激光共聚焦荧光扫描装置。 微阵列是由
影响流式细胞术定量分析细胞DNA荧光强度的几个因素
影响因素分为几个方面：第一类是仪器的因素：包括仪器的激光定位有偏差，激光功率不符合标定值，PMT的敏感度降低，设置的电压不准，仪器的管道不通畅，样本流速不匀等等第二类是样本的因素：样本的染色，是否固定完全，RNA是否完全消化，染料的浓度和时间。上机时各个样本件的细胞浓度是否一致？不同的细胞浓度对比较
一种针对循环肿瘤DNA的电化学/荧光双模传感器面世
电化学传感器是利用待测物所引发的电信号变化与浓度或其他物理量之间存在的相关性关系进而定性或定量分析的一种方法。荧光传感器则是通过将待测物与识别基团特异性结合的信息传递给荧光基团，引发荧光强度或发射波长的改变实现定性或定量检测的方法。这两种技术所涉及的信号源及构建方法往往差异较大。在同一体系中采用
DNA合成（DNA－synthesis－）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
DNA－指纹的概念高变区DNA与DNA指纹
人的卫星DNA 或称随体DNA 是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重复所构成的。重复片段的组成和拷贝数在不同的个体及基因组的不同位置上不一样。提取不同个体的基因组DNA 后，用其切点能识别序列为4 个碱基而又不切割该重复片段的限制性内切酶在重复片段的两侧切割基因组DNA ，然后将样品进行
LUMEX微芯片实时荧光定量PCR助力山羊绒和绵羊毛的DNA定...
LUMEX微芯片实时荧光定量PCR助力山羊绒和绵羊毛的DNA定量分析GB/T 36433-2018《纺织品 山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析 荧光PCR法》已于2019年1月1日正式开始实施，本标准规定了采用荧光定量PCR测定纺织品中山羊绒、绵羊毛DNA的定量检测方法。本标准适用于纺织品混合物中