胶体金与蛋白制备
胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。1．待标记蛋白溶液的制备 将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100 000g4℃离心1h，去除聚合物。2．待标胶体金溶液的准备 以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。标记IgG时，调至9.0；标记McAb时,调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10。由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。3．胶体金与标记蛋白用量之比的确定（1）根据待标记蛋白的要求，将胶......阅读全文
蛋白质提取与制备(Protein－Extraction－and－Preparation)4
蛋白质提取液中，除包含所需要的蛋白质（或酶）外，还含有其它蛋白质、多糖、脂类、核酸及肽类等杂质。除去的方法有：1）核酸沉淀法该法可用核酸沉淀剂和氯化锰、硫酸鱼精蛋白或链霉素等。必要时也可用脱氧核糖核酸酶除去核酸。即在粗匀浆中加入少量DNase,于4℃保温30～60min，可使DNA 降解为足够小的碎
蛋白质提取与制备(Protein－Extraction－and－Preparation)5
确定沉淀蛋白质所需硫酸铵浓度的方法将少量样品冷却到0～5℃，然后搅拌加入固体硫酸铵粉末，见蛋白质产生沉淀时，离心除去沉淀，分析上清液确定所要蛋白质的浓度，如它仍在溶液中则弃去沉淀，再加更多的硫酸铵于上清液中，直到产生蛋白质沉淀时止。以所要提取的蛋白质在溶液中的浓度对硫酸铵浓度作图，得沉淀曲线，找出蛋
蛋白质提取与制备(Protein－Extraction－and－Preparation)3
水溶液提取：大部分蛋白质均溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中。因此蛋白质的提取一般以水为主。稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶度大，也是提取蛋白质的最常用溶剂。盐溶液提取：以盐溶液及缓冲液提取蛋白质进常注意下面几个因素。盐浓度等渗盐溶液尤以0.02～0.05mol/L 磷酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液常用
Western－Blot中蛋白样品的制备与试剂选择
"良好的开始是成功的一半"，尤其对于生物学实验，如果没有高质量的实验样本，等待我们的很可能是失败的实验结果。优质特异的蛋白样品对Western Blot实验至关重要。下面将从蛋白样品制备的方法和试剂选择上给大家一些建议，同时也和大家分享一些因蛋白样品制备不当而导致Western Blot实验失败的案
蛋白质提取与制备(Protein－Extraction－and－Preparation)2
三、蛋白质提取与制备具体操作方法1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰
胶体金分散颗粒制备实验——白磷还原法（改进）
实验方法原理白磷还原法一般只能制备出单一颗粒直径的胶体金。因此，用于电镜双重标记或多重标记时此法显得有些不足，还需结合其他方法。Henegouwen 等（1986）发展了传统的白磷还原法，可制备出多种不同直径的胶体金，取得了良好的效果。这一方法的特点是通过循环还原的引入使原白磷还原法的适用范围得到扩
蛋白制备方法介绍
胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。1．待标记蛋白溶液的制备 将待标记蛋白预先对0.005Mo
酪蛋白的制备
实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。实验材料 牛乳试剂、试剂盒 乙醇 无水乙醚 醋酸 醋酸钠 乙醇
胶体金分散颗粒制备实验——柠檬酸钠还原法
实验方法原理柠檬酸钠还原法（Frens，1973）制备过程十分简单，制备出的金颗粒均匀一致，因此广为采用。大量研究已表明该法制备胶体金时，颗粒的大小是柠檬酸钠用量的函数，即在一定的范围内任意给定一个柠檬酸钠的量，总有一定大小的胶体金颗粒与它相对应，因而这种方法可很好地满足电镜双重标记和多重标记的要求
免疫胶体金的制备及其在医学检验中的应用
摘要免疫胶体金技术是四大免疫标记技术之一，问世二十多年来发展十分迅速，在生物医学各研究领域特别是在医学检验中得到了日益广泛的应用。本文从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术和实际应用等几个方面对胶体金技术作了较系统介绍。 1971年Faulk 和Taytor将胶体金引人免疫化学，此
蛋白分离色谱与高压制备液相色谱异同讨论
蛋白分离色谱与高压制备液相色谱异同讨论快速蛋白液相色谱(FPLC)、中压液相色谱(MPLC)、低压液相色谱(LPLC)是近年来从HPLC基础上发展的新型色谱技术，其中FPLC能以极快的速度把复杂混合物分离，可在短时间内大量纯化样品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科学研究及
胶体金分散颗粒制备实验——乙醇超声波还原法
实验步骤1. 取 1％ AuCl3 • HCl 水溶液 1 ml 加入 100 ml 双重蒸馏水。2. 用 0～2mol/L K2CO3 调 pH 至 7.2，再加入 1 ml 无水乙醇。3. 用 20 KC、135 W 超声波探头浸入溶液内进行超声振荡，此法制备的颗粒为 6～10 nm。
胶体金分散颗粒制备实验——鞣酸柠檬酸钠还原法
实验方法原理在鞣酸-柠檬酸钠还原法中，柠檬酸钠是主要的还原剂；而鞣酸则具有双重作用，既起还原作用，也有保护作用，它控制着「晶核」的形成过程，故可改变鞣酸的用童来制备不同颗粒的胶体金。实验步骤A 液（80 ml）：1％ 氯化金，1 ml；双重蒸馏水，79 ml。B 液（20 ml）：1％ 柠檬酸钠，4
胶体金分散颗粒制备实验——硼氢化钠还原法
实验步骤1. 取 0.6 ml 1％ 氯化金水溶液，加入 40 ml 预冷（4℃）双蒸馏水。2. 再加入 0.2mol/L K2CO3 0.2 ml。3. 边搅拌边加入新鲜配制的硼氢化钠水溶液（0.5 mg/ml）2 ml，至溶液由蓝紫色变为橙红色为止。然后继续搅拌 5 min，获得的金颗粒直径在
融合蛋白的制备方法
基于重复结构的融合蛋白大多为短肽，不具有复杂的空间结构，因此只需简单的多肽合成过程即可获得目标蛋白。由单个氨基酸合成多肽主要通过两个氨基酸之间脱水形成肽键来实现，主要包括以下基本步骤:：首先对两性离子结构的氨基酸进行相应的氨基或羧基保护，其次将羧基活化为活性中间体，待耦合过程结束后，对肽链上氨基酸的
制备肌动蛋白实验
从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白 由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白 将肌动蛋白纯化成纯品 实验材料 肌球蛋白
制备肌动蛋白实验
实验材料 肌球蛋白试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 离心机实验步骤 1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心（GSA 转头，13000 r/min，1
Western－Blot－蛋白样品制备
一、单层贴壁细胞总蛋白的提取：1.倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。2.每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次
酪蛋白的制备方法
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。可溶于强
酪蛋白的制备实验
等电点沉淀法 实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛
融合蛋白的制备步骤
具体步骤为：1、进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。2、在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重
融合蛋白的制备方法
基于重复结构的融合蛋白大多为短肽，不具有复杂的空间结构，因此只需简单的多肽合成过程即可获得目标蛋白。由单个氨基酸合成多肽主要通过两个氨基酸之间脱水形成肽键来实现，主要包括以下基本步骤:：首先对两性离子结构的氨基酸进行相应的氨基或羧基保护，其次将羧基活化为活性中间体，待耦合过程结束后，对肽链上氨基酸的
金免疫技术（斑点免疫层析试验）
一、原理金免疫技术是免疫标记技术之一，金盐被还原成原子金后形成金颗粒悬浮（胶体金），这种金颗粒呈红色，并能与蛋白质等大分子物质结合，因此，可用胶体金作为标记物来检测标本中的抗原或抗体。典型的测定方法有斑点买免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等。二、材料1 、HCG金标试纸条2、妊娠尿液 正常尿液三、方法
胶体金法怎么用
胶体金与标记蛋白简介在不同还原剂的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制备出金颗粒直径在0.8-500nm的胶体金。制备好的胶体金保存时间较长，可在4℃保存6个月以上，或在室温下可保存1-2个月。胶体金在做为标记探针时，不同用途选用的胶体金的直径范围也不同，用于免疫快速检测的胶体金颗粒直径范围一般在
胶体金法怎么用
胶体金与标记蛋白简介在不同还原剂的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制备出金颗粒直径在0.8-500nm的胶体金。制备好的胶体金保存时间较长，可在4℃保存6个月以上，或在室温下可保存1-2个月。胶体金在做为标记探针时，不同用途选用的胶体金的直径范围也不同，用于免疫快速检测的胶体金颗粒直径范围一般在
胶体金法怎么用
胶体金与标记蛋白简介在不同还原剂的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制备出金颗粒直径在0.8-500nm的胶体金。制备好的胶体金保存时间较长，可在4℃保存6个月以上，或在室温下可保存1-2个月。胶体金在做为标记探针时，不同用途选用的胶体金的直径范围也不同，用于免疫快速检测的胶体金颗粒直径范围一般在
胶体金法怎么用
胶体金与标记蛋白简介在不同还原剂的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制备出金颗粒直径在0.8-500nm的胶体金。制备好的胶体金保存时间较长，可在4℃保存6个月以上，或在室温下可保存1-2个月。胶体金在做为标记探针时，不同用途选用的胶体金的直径范围也不同，用于免疫快速检测的胶体金颗粒直径范围一般在
免疫胶体金(Immune－colloidal－gold)
原理 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（ HAuCl4 ）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基
蛋白分离色谱与高压制备液相色谱的异同讨论
快速蛋白液相色谱(FPLC)、中压液相色谱(MPLC)、低压液相色谱(LPLC)是近年来从HPLC基础上发展的新型色谱技术，其中FPLC能以极快的速度把复杂混合物分离，可在短时间内大量纯化样品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科学研究及药物生产上使用越来越广泛。(1)FP
蛋白分离色谱与高压制备液相色谱的异同讨论
快速蛋白制备液相色谱(FPLC)、中压制备液相色谱(MPLC)、低压制备液相色谱(LPLC)是近年来从HPLC基础上发展的新型色谱技术，其中FPLC能以极快的速度把复杂混合物分离，可在短时间内大量纯化样品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科学研究及药物生产上使用越来越广泛。