免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗人球蛋白抗体:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释。搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。⑶实验步骤1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,......阅读全文
关于抗人球蛋白试验(直接法)的简介
抗人球蛋白试验又称Coombs’试验,是检查不完全抗体的常用方法,是诊断自身免疫性溶血性贫血的最重要的试验。一般分为直接试验(直接反应)和间接试验(间接反应)。抗人球蛋白试验(直接法)的目的是检查红细胞表面的不完全抗体,抗人球蛋白试验(间接法)的目的是检查血清中是否存在游离的不完全抗体。表面附有
关于抗人球蛋白试验(间接法)的简介
抗人球蛋白试验又称Coombs试验,是检查不完全抗体的常用方法,是诊断自身免疫性溶血性贫血的最重要的试验。一般分为直接试验(直接反应)和间接试验(间接反应)。抗人球蛋白试验(直接法)的目的是检查红细胞表面的不完全抗体,抗人球蛋白试验(间接法)的目的是检查血清中是否存在游离的不完全抗体。间接法是先
测汞仪应用原理及使用步骤
汞在科研和生产领域的作用很大,但它也可能带来巨大危害,造成环境污染,影响人体健康。因此,测汞仪的应用也越来越多。它适用于水、空气、士壤、食品、化妆品、化工原料中汞的检测。测汞仪是一种高灵敏度的测汞用的原子吸收光谱仪器,产品具有性能稳定、使用灵活、可靠性高、维护简便等优点。仪器利用的是汞蒸气能强烈吸收
量子点免疫荧光组织化学实验宝典
一、量子点免疫荧光组织化学原理量子点免疫荧光组织化学(Quantum Dots based Immunohistochemistry, QD-IHC)又称量子点免疫荧光细胞化学,是根据抗原—抗体特异性结合的原理,用量子点标记特异性抗体作为探针,检测组织或细胞中抗原性物质的一种技术。量子点免疫荧光组化
抗人球蛋白实验(直抗、间抗)正常参考值及临床意义
中文名称:抗人球蛋白实验(直抗、间抗) 英文名称及缩写:Antiblobulin Test Coomb’s(DAT、IAT) 正常参考值:凝聚为阳性,不凝聚为阴性。 临床意义: DAT阳性: 1、新生儿溶血病诊断 2、溶血性输血反应的检查 3、自身免疫性溶血性输血
免疫荧光技术操作步骤
基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗体溶液:以 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 进行稀释缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油
细胞免疫荧光操作步骤
1.细胞爬片;2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮);3.PBS漂洗5min;4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理);5.PBS漂洗2次,每次5min;6.1%BSA封闭30min;7.加入1%BSA稀释的一抗,于37℃杂交2h;8.
蛋白质的性质实验原理和操作步骤1
【目的和要求】1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识,了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。【实验原理】(一) 蛋白质及氨基酸的呈色反应蛋白质所含有的某些氨基酸具有特殊
酵母RNA的提制实验原理、仪器试剂和操作步骤
一、目的:学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法,从而加深对核酸性质的认识。二、原理:提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料,其中RNA 的提制以酵母最为理想,因为酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.51
过氧化氢的实验原理和步骤
实验原理实验原理:实验药品:3%过氧化氢溶液、小木条、二氧化锰固体实验步骤1、在试管中加入少量过氧化氢溶液,把带火星的小木条放在试管口,观察现象(无明显现象)2、在试管中加入少量二氧化锰,观察现象(出现大量气泡,木条复燃)3、当停止生成气泡时,继续加入过氧化氢溶液,观察现象(出现大量气泡,木条复燃)
细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤
单位实验室做过,小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的,实验效果不错.细胞爬片免疫荧光步骤:1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干
细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤
1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可,我选择在培养皿中爬。一为节约经费(培养皿可以重复利用)
细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤
细胞爬片免疫荧光步骤:1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可,我选择在培养皿中爬。一为节约经费
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先
免疫荧光的原理
免疫荧光(Immunofluorescence,IF)原理免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在
RNA-Extraction-(mini-prep):Trizol法实验原理和步骤
RNA的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调控和cDNA的合成都是必须的,RNA的纯度和完整性对于Northern blot,RT-PCR 和cDNA文库的构建等分子生物学实验都至关重要。RNA分离的方法很多,其中最关键的因素是尽量减少RNA酶的污染 实验原理: Trizol 试剂
苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤
(一)原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于
NK细胞活性测定:LDH法原理和实验步骤
一、原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
(一)原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白 A/G(Protein A/G)或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经洗涤后,重悬于电泳上
免疫荧光技术(immunofluorescence-technique)1
免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是一种以荧光物作为标记物的免疫分析技术,荧光物质分子在特定条件下吸收激发光的能量后,分子呈激发态而极不稳定,其迅速回到基态时,可以电磁辐射形式释放出所有的光能,发射出波长较照射光长的荧光。用荧光素与已知的抗体(或抗原,较少用
免疫酶细胞化学实验技术2
(四)染色原理及步骤 1.基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同,亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上,间接法是将酶标记在第二抗体上,检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体(80%~90%的抗血清系由家兔制得,而绝大数单克隆
免疫荧光技术简介
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,根据抗原抗体反应的原理,将荧光素偶联到已知的抗原或抗体上制成荧光探针,与血清或体液、细胞、组织中存在的相应抗体(或抗原)结合,从而对这些组织中存在的抗原或抗体进行定性、定量和(或)定位的检测。抗体的选择
免疫荧光组织化学染色法
一)免疫荧光组织化学原理 将已知抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受到激发光的照射会发出明亮的荧光(黄绿色或橘红色),荧光素受激发光照
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 直接法 将
免疫荧光三标实验如何做?如何选择二抗?
免疫荧光三标?——蓝色荧光的AMCA与Dylight 405标记二抗做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里,都会选择一个
凯氏定氮法测粗蛋白的实验步骤和注意事项
食品中蛋白质含量的多少是评价粮油食品品质、营养价值的重要指标。测定某些粮食蛋白质的含量,可以做到充分发挥粮油资源的作用,促进合理用粮,节约用粮,对提高粮油资源的利用率具有重要的意义。 以凯氏定氮法为代表的测定含氮量换算蛋白质的方法操作简单、测定结果的准确度和精密度较高,适宜于测定任何形态(固体
人工脂质体法的功能和应用
人工脂质体法采用阳离子脂质体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质。此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。Li