NK细胞活性测定:LDH法原理和实验步骤
一、原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。 二、仪器和材料 酶标仪、YAC-1细胞、Hank's液(pH7.2~7.4)、RPMI1640完全培养液、乳酸锂或乳酸钠、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)、NAD、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH8.2)、1%NP40或2.5%Triton 三、实验步骤 1、LDH基质液的配制 乳酸锂5×10-2mol/L 硝基氯化四氮唑(INT) 6.6×10-4mol/L 吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS......阅读全文
NK细胞活性测定:LDH法原理和实验步骤
一、原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶
NK细胞活性测定:LDH法
实验概要活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上
NK细胞活性测定:LDH法
实验方法原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上
NK细胞活性测定:同位素法原理和实验步骤
一、原理 将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时,靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来,其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。 二、仪器和材料 液体闪烁仪、多头细胞取集器、二氧化碳培养箱、3H-TdR、RPMI
LDH法测定NK细胞活性
一、原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上用4
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪
NK细胞活性检测实验步骤
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymp
NK细胞活性测定实验
实验方法原理 用放射性核素标记靶细胞,当靶细胞受到破坏时,放射性核素被释放出来,通过测定释放或残留在未被破坏细胞内的放射性核素放射活性,即可计算和推测杀伤细胞的细胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本实验采用51Cr释放法检测人NK细胞活性。实验材料 靶细胞试剂、试
免疫学实验NK细胞活性测定(NK)介绍
NK细胞活性测定(NK)介绍: 自然杀伤(NK)细胞是一群异质性多功能的免疫细胞,是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞。它对体内多种细胞,特别是T、B淋巴细胞有调节作用。它所介导的裂解细胞作用不受主要组织相溶性复合体的限制。自然杀伤细胞不仅对癌细胞,对病毒、胞内寄生菌和老化变异细胞也具有极强
NK细胞活性测定实验——乳酸脱氢酶释放法
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)存在于细胞内,正常情况下,不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时,由于细胞膜通透性改变,LDH可从细胞内释放至培养液中。释放出来的LDH再催化乳酸的过程中,使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)变成还原型辅酶(NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑
关于NK细胞活性测定(NK)的基本介绍
自然杀伤(NK)细胞是一群异质性多功能的免疫细胞,是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞。它对体内多种细胞,特别是T、B淋巴细胞有调节作用。它所介导的裂解细胞作用不受主要组织相溶性复合体的限制。自然杀伤细胞不仅对癌细胞,对病毒、胞内寄生菌和老化变异细胞也具有极强的清除作用。NK细胞起杀伤作用不需
简述NK细胞活性测定(NK)的检查过程
一、NK细胞活性测定(NK)的检查过程: 取传代后24h生长良好的YAC-1细胞(存活率>95%)按1×106/mL YAC-1细胞悬液加3H-TdR 10uCi进行标记,于37℃、5%CO2培养箱中培养2h,每30min振荡1次。标记后的细胞用培养液洗涤3次,重悬于培养液中,使细胞浓度为1×
简述NK细胞活性测定(NK)的临床意义
一、NK细胞活性测定(NK)的临床意义: 异常结果:受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性,可判定该项试验结果阳性。活性升高,常见于病毒感染的早期,Down综合征,接受器官移植、骨髓移植的患者等及免疫增强剂治疗患者。活性降低,常见于恶性肿瘤、重症联合免疫缺陷病,AIDS和免疫抑制
MTT法细胞活性检测实验步骤
MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途:
靶细胞杀伤实验:LDH法
一、效应细胞的制备 激惹5天后,于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结,100目钢网研磨,调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。 二、靶细胞的制备 P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养,调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×1
什么是NK细胞活性测定呢
NK细胞具有ADCC,能直接杀伤肿瘤细胞,故将单个核细胞与肿瘤细胞共同培养,肿瘤细胞存活率低,NK细胞的活性则高。测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株,而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。 体外检测NK细胞活性的方法有形态学法、酶释放法、放射性核素释放法、化学发光法、流式细
NK细胞活性测定实验——放射性核素释放
实验方法原理用放射性核素标记靶细胞,当靶细胞受到破坏时,放射性核素被释放出来,通过测定释放或残留在未被破坏细胞内的放射性核素放射活性,即可计算和推测杀伤细胞的细胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本实验采用51Cr释放法检测人NK细胞活性。实验材料靶细胞试剂、试剂盒
临床化学检查方法介绍NK细胞活性测定(NK)介绍
NK细胞活性测定(NK)介绍: 自然杀伤(NK)细胞是一群异质性多功能的免疫细胞,是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞。它对体内多种细胞,特别是T、B淋巴细胞有调节作用。它所介导的裂解细胞作用不受主要组织相溶性复合体的限制。自然杀伤细胞不仅对癌细胞,对病毒、胞内寄生菌和老化变异细胞也具有极强的清
血清乳酸脱氢酶(LDH)活性测定方法和意义
乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶。此酶几乎存在于所有组织中,以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺中为最多。这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。所以当少量组织坏死时,该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。测定此酶常用于对心梗、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。 1.正常参考值速率法(LD
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞,以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞,进行体外NK细胞活性检测。被
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
自然杀伤(NK)细胞参与了机体免疫防御的第一道防线,主要用于(1)免疫监视系统中抗肿瘤抗病毒(2)免疫调控。实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
实验方法原理 25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞,以外周血分离的单个
药物对动物体内NK细胞活性的影响实验
瘤细胞悬液皮下接种法实验方法原理肺癌是最常见的严重严胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一, 机体免疫功能低下,与肺癌的发生发展密切相关。实验材料小鼠试剂、试剂盒RPMI1640 培养基中止液Hank. s曲拉通X-100仪器、耗材酶联免疫监测仪96 孔24 孔平底培养板离心沉淀机实验步骤1. 动物分组及
药物对动物体内NK细胞活性的影响实验
实验方法原理 肺癌是最常见的严重严胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一, 机体免疫功能低下,与肺癌的发生发展密切相关。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 RPMI1640 培养基中止液Hank. s曲拉通X-100仪器、耗材 酶联免疫监测仪96 孔24 孔平底培养板离心沉淀机实验步骤 1. 动物分组及用药(1)
LDH总活性测定的临床意义是什么
(1)用于AMI和亚急性MI的辅助诊断,AMI后8~18h开始升高,峰时为24~72h,持续时间6~10d。 AMI时LD的升高倍数多为5~6倍,个别可高达10倍。 (2)可用于观察是否存在组织、器官损伤。如LD持续正常,可除外组织、器官损伤;如LD总酶活性升高,可能有组织、器官损伤,常用于
LDH总活性测定都有哪些临床意义?
(1)用于AMI和亚急性MI的辅助诊断,AMI后8~18h开始升高,峰时为24~72h,持续时间6~10d。AMI时LD的升高倍数多为5~6倍,个别可高达10倍。(2)可用于观察是否存在组织、器官损伤。如LD持续正常,可除外组织、器官损伤;如LD总酶活性升高,可能有组织、器官损伤,常用于广泛性癌症化
LDH总活性测定都有哪些临床意义?
(1)用于AMI和亚急性MI的辅助诊断,AMI后8~18h开始升高,峰时为24~72h,持续时间6~10d。 AMI时LD的升高倍数多为5~6倍,个别可高达10倍。 (2)可用于观察是否存在组织、器官损伤。如LD持续正常,可除外组织、器官损伤;如LD总酶活性升高,可能有组织、器官损伤,常用于