免疫亲和层析的原理

简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混合,随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过破坏非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力,因此能够保持与固定相的结合,而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液,能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用,从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子,称为洗脱液。固定相一般是凝胶基质,常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠,首先将含有烃链的抑制剂连接到琼脂糖珠(固体支持物)上。......阅读全文

酶免疫测定的技术原理

免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体或抗原联结,与相应的抗原或抗体作用后,通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量,亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究,即酶免疫组织化学技术。目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA),它是使抗

免疫共沉淀的实验原理简介

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质

免疫比浊法的原理简介

  免疫比浊法(Immunoturbidimetric Assays)是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是:当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时,形成的可溶性 免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下,自液相析出,形成微粒,使反应液出现浊度。当抗体浓度固

简述甲肝疫苗的免疫原理

  人体的免疫反应分为特异免疫和非特异免疫。侵入人体的外源物质称为抗原,每种病毒抗原一般都由蛋白衣壳,衣壳上有决定免疫特异性的抗原决定簇,当抗原与抗体结合后,抗体试着消化抗原,同时产生与抗原决定簇相关免疫记忆的特异抗体,这种特异抗体可以在人体内存在很长时间,并且在下一次病毒入侵时,迅速有效的消化病毒

简述霍乱疫苗的免疫原理

  霍乱康复者对霍乱弧菌感染至少可产生3年的免疫力。研究发现,这种免疫力主要依靠人体产生的保护性抗体,其中以具有杀弧菌活性的菌体O抗原和阻断毒素作用的抗毒素抗体最为重要,它们通过抑制细菌在小肠定居和繁殖,并阻断霍乱毒素作用而起保护作用。经动物实验和人体研究表明,采用菌体抗原和霍乱毒素B亚单位复合免疫

免疫酶技术的技术原理简介

  免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体或抗原联结,与相应的抗原或抗体作用后,通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量,亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究,即酶免疫组织化学技术。  目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA),

火箭免疫电泳的实验原理

电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标,抗原浓度为横坐标,绘制标准

火箭免疫电泳的实验原理

电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标,抗原浓度为横坐标,绘制标准

火箭免疫电泳的实验原理

电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标,抗原浓度为横坐标,绘制标准

免疫荧光技术的技术原理

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看

斑点免疫渗滤试验(IFA)的原理

用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标记物等,以及用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂。原理:将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上,将膜贴于吸水材料上,依次在膜上滴加标本、免疫胶体金及洗涤液等试剂进行抗体或抗原反应,过量试剂很快渗入吸水材料中。抗原抗体反应后,形成大分子胶体金复合物,从而使阳性结

免疫印迹法的检测原理

免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术,它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳

免疫酶标方法的方法原理

免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,

双向免疫扩散试验的原理

双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例,而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时,可呈现多条沉淀线以至交叉反应。

免疫荧光细胞化学的原理

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看

免疫荧光技术的方法原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法将标记的特异性

免疫荧光细胞化学的原理

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体(或抗原),再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红

荧光免疫分析的原理是什么

  作为免疫分析法的一种,FIA同样存在两种模式,即竞争型和夹心型。其中竞争型(以标记抗原的竞争型为例)的测定原理是基于未标记的抗原(Ag)和标记抗原(Ag-L)竞争结合有限的抗体(Ab)而实现的免疫分析法。检测时,Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag

酶免疫测定的技术原理

免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体或抗原联结,与相应的抗原或抗体作用后,通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量,亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究,即酶免疫组织化学技术。目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA),它是使抗

火箭免疫电泳的实验原理

电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标,抗原浓度为横坐标,绘制标准

T2毒素免疫层析亲和柱说明

1、 用途:免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的T2毒素,从而对T2毒素样品起到非常针对性的纯化作用,过柱净化后的样品液可直接用于液相进行T2毒素含量的检测。亲和层析柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的,以改善信噪比,可提高检测方法的准确度。2、 概述:T2毒素(T2)是由多种镰刀菌产生的一种霉

T2毒素免疫层析亲和柱

  1、 用途:   免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的T2毒素,从而对T2毒素样品起到非常针对性的纯化作用,过柱净化后的样品液可直接用于液相进行T2毒素含量的检测。   亲和层析柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的,以改善信噪比,可提高检测方法的准确度。   2、 概述:   T2毒

黄曲霉毒素M1柱CH09003

  华安麦科生物技术有限公司是国内首家将免疫亲和层析柱(IAC)系列产品化的公司   一、用途:    免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1,从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用,过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。亲和层析柱与HPLC配合使用

黄曲霉毒素M1柱CH09003

  华安麦科生物技术有限公司是国内首家将免疫亲和层析柱(IAC)系列产品化的公司   一、用途:    免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1,从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用,过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。亲和层析柱与HPLC配合使用

常用色层分析亲和层析

亲和层析在一对有专一的相互作用的物质中,把其中之一联结在支持物上,用于纯化相对的另一物质。常见的亲和对如:酶和抑制剂,抗原和抗体,激素和受体等。支持物为琼脂糖或纤维素等。

金属螯合亲和层析实验

天然MCAC纯化带组氨酸尾的可溶性融合蛋白 变性条件下用MCAC纯化带组氨酸尾的不溶性融合蛋白             实验材料 蛋白质

胰岛素亲和层析实验

试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体,得自 WGA-琼脂糖柱层析(见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖(~2 ml 预装胶)(SigmaC

亲和层析实验:常规方法(一)

一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。亲和介质

胰岛素亲和层析实验

胰岛素亲和层析实验             试剂、试剂盒 部分纯化的胰岛素受体 NaCl 胰岛素琼脂糖

金属螯合亲和层析实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 IPTGNiSO4蛋白酶抑制剂MCAC-EDTATriton仪器、耗材 层析柱转子实验步骤 1.  接种含以pET载体表达带组氨酸尾融合蛋白的大肠扦菌BL21(DE3)pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨苄青霉素/氯霉素培养基。于37℃摇荡培养过夜。2.  转接1